β-Catenin蛋白和Survivin蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义

曾 珍 陈文添 戴艳枝

（1.江西省赣州市寻乌县人民医院病理科，江西赣州 342200；2.江西省赣州市寻乌县人民医院内1科，江西赣州 342200；3.江西省人民医院病理科，江西南昌 330006）

结直肠癌（CRC）是世界第3大流行性肿瘤，2015年的中国恶性肿瘤统计数据显示，中国结直肠癌发病率和病死率在全部恶性肿瘤中均位居前5位[1]。美国癌症协会预测，2018年其新发人数和死亡人数在男女性中均居第3[2]。其发病率在我国乃至世界范围内逐年上升，除与动物蛋白在人们饮食结构中比重的增加，还与抑癌基因以及癌基因的改变密切相关[3]。在近几年当中，人们对结直肠癌与细胞信号转导通路、细胞凋亡机制异常之间的相关性进行了进一步研究，如：（1）Survivin基因为凋亡抑制蛋白家族中的一个新成员，于细胞分裂周期G2/M 期中呈现出高表达的情况，具有抑制细胞凋亡、调节细胞有丝分裂以及促进细胞增殖的作用，通过对该基因的表达进行有效地抑制，能够加快肿瘤细胞凋亡的速度，其基因突变都与结直肠癌等多种肿瘤有关。（2）Wnt/β-catenin信号通路能够对细胞的分化与增值进行调节，而β-catenin则是该通路的一个重要调节因子。本实验应用免疫组化法检测β-catenin蛋白和survivin蛋白在结直肠癌的表达情况并分析两者表达的相关性，研究这两种蛋白和结直肠癌的关系。

1 资料与方法

1.1 一般材料

选取2013年6月至 2017 年6月本院病理科保存的60例结直肠癌病理组织标本作为研究对象，患者术前未进行抗肿瘤治疗，有完整的临床资料。男性36例、女性24 例；年龄 32 ～ 86岁，平均年龄62岁；肿瘤直径＞5 cm的32例，直径＜5 cm的28例；高分化腺癌12 例，中分化腺癌 34例，低分化腺癌 14例；根据 Dukes分期： A + B 期33例，C + D 期 27 例，淋巴结转移者27 例；无淋巴结转移者33例。以同期结直肠腺瘤手术存档的蜡块以及癌旁超过5 cm的正常结直肠组织病理蜡块各40例为对照组。

1.2 方法

标本固定利用10%中性福尔马林，经石蜡包埋，并予以连续切片处理，厚度为4μm，然后再予以HE和免疫组化染色处理。本研究所用的试剂主要有：兔抗人 Survivin多克隆抗体（由“福州迈新公司”提供），β-catenin多克隆抗体（由“Abcam公司”提供），SP试剂盒、PBS缓冲液以及枸橼酸盐抗原修复液及SP试剂盒都由“福州迈新公司”提供。染色时，严格按照相关说明书中的内容进行，并在实验过程中设置阴性和阳性对照。

1.3 结果评价

在机体的细胞膜、细胞核与细胞质中，β-catenin均可定位，阳性细胞为淡黄-棕黄色的颗粒，若细胞提示阳性，即可判断为异常表达。若β-catenin≤50%细胞核阳性，提示低表达；若β-catenin＞50%细胞核阳性，提示高表达。

由两名高资历且临床经验丰富的医师进行阅片，于光镜下对阳性细胞进行观察，发现细胞为棕褐色细颗粒状。在细胞核亦或者是细胞质中，Survivin 都能定位和表达。按照相关标准，也就是从肿瘤细胞阳性数和染色反应强度这两方面上进行判断。其中，染色强度的判断标准为：无阳性着色-0分，淡黄色-1分，棕黄色-2分，棕褐色-3分。采取随机法并利用高倍视野计数100个肿瘤细胞所占的比例，将之分为5级，详细如下：（1）0分：无阳性表达（或者阳性细胞数低于 5% ）。（2）1分：5 ～ 25 %。（3）2分：26 ～ 50 %。（4）3 分：51 ～ 75 % 。（5）4 分：＞ 75 %。计算两项评分之和，4分提示阳性，0分提示阴性。

1.4 统计学分析

采用 SPSS 18.0 统计学软件进行数据分析，计数资料用（%）表示，行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

β-catenin能够在细胞膜、细胞核和细胞质中进行定位，阳性细胞为淡黄-棕黄色的颗粒，见表1。细胞核阳在结直肠癌中的异常表达。β-catenin 在结直肠癌中的阳性率比结直肠腺瘤以及癌旁正常结直肠组织高，P=0。Survivin 蛋白在细胞质已着手细胞核定位。结直肠癌的Survivin阳性率比结直肠腺瘤与癌旁正常结直肠组织高，P=0 。

表1 β-catenin和Survivin在结直肠癌、结直肠腺瘤和癌旁正常组织中的阳性表达率[例（%）]

结直肠癌中β-catenin蛋白和Survivin蛋白表达的相关性。结直肠癌中β-catenin和Survivin 蛋白的表达呈正相关（ r= 0. 173，P= 0. 027），见表 2 。

表2 结直肠癌中β-catenin和Survivin表达的相关性

β-catenin蛋白和Survivin蛋白表达与结直肠癌临床病理因素的关系。β-catenin蛋白和Survivin蛋白表达与结直肠癌患者性别、年龄和肿瘤大小比较差异无统计学意义（P＞0.05），与结直肠癌分化程度、淋巴结转移及临床Dukes分期比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表 3 。

3 讨论与结论

大量研究[4-6]表明，在消化道恶性肿瘤类疾病中，结直肠癌具有比较高的发病率，且可致人死亡，近几年来，该病的发病率显著升高，已经对人类的生命健康造成了较大的威胁。 而凋亡抑制基因表达于直肠细胞中亦或者是抑癌基因突变则是引发直肠癌的重要原因[7]。

Wnt信号通路能够对细胞的生长、分化以及运动进行调控，且其也参加了胚胎到成体的胚胎早期的发育过程，能够对细胞的分化、增殖、凋亡与生长进行调控。作为生物进化期间比较保守的一条通路，在正常且成熟的细胞当中，Wnt信号通路处于关闭状态。其在胚胎细胞黏附、细胞增殖和凋亡方面发挥重要作用[8]。Wnt包含有多条信号通路，其中比较常见的有经典Wnt信号通路，也就是Wnt/β-catenin信号通路。其中，β-catenin 是通路中比较重要的一个信号传递子，同时也是一个枢纽因子。而β-catenin 蛋白则能起到抑制癌细胞侵袭以及激活通路的作用。在正常细胞当中，β- catenin 蛋白以及细胞膜上的轴蛋白和钙黏蛋白会相互结合，并形成一种降解复合物，使得细胞质中的β- catenin 蛋白较低[9]。Wnt异常激活后，会对β-catenin 蛋白的降解进行抑制，使得β-catenin 蛋白大量进入细胞质，随后转位入细胞核中，与TCF/LEF相结合并形成复合体，同时对通路下游的靶基因进行激活，使得细胞发生了异常增殖的情况，进而加快了肿瘤形成的速度[10]。相关资料中提及，Wnt/β-catenin信号通路的异常和多种肿瘤疾病密切相关，如胃癌、肝癌等[11-12]。此外，也有报道称[13-17]，在胰腺癌、胃癌、肺癌、结肠癌以及卵巢癌等恶性肿瘤当中，Survivin 都呈现出了高表达的情况。

表3 β-catenin蛋白和Survivin蛋白表达与结直肠癌临床病理因素的关系

近几年来，人们通过研究发现了另一个凋亡抑制蛋白家族成员，也就是Survivin，为凋亡抑制剂，能够起到促细胞增殖以及抑制细胞凋亡的作用，通过对该基因进行有效地抑制，能够加快肿瘤细胞凋亡的速度。本研究显示，在结直肠癌中β-catenin与Survivin的表达比结直肠腺瘤以及癌旁正常组织高（P＜0.05）。β-Catenin、Survivin 表达与肿瘤大小、性别以及年龄无任何相关性（P＞0.05），但与结直肠癌的 Dukes分期、分化程度以及淋巴结转移密切相关（P＜0.05）。本实验中，β-catenin细胞核高表达与多种因素密切相关，包括结直肠癌组织的Dukes分期、分化程度与淋巴结转移（P＜0.05）。表明 β-catenin细胞核的表达量是诊断结直肠癌和判断患者预后的一种重要指标[18]，主要可能为，β-catenin细胞核的表达和细胞增殖、袭转移与凋亡基因的转录和表达密切相关。另外，本组实验中，Survivin 在结直肠癌、腺瘤及正常组织中的表达是逐渐降低的，本研究结果与 Adamkov等[19]的研究一致。对于结直肠癌患者来说，肿瘤恶性程度的加重以及病情的进展，能够增加Survivin 的表达，提示 Survivin 的表达能够反映出结直肠癌的发生与进展，因此，Survivin具有非常高的应用价值，有助于临床医师诊断结直肠癌。

在结直肠癌的发病和进展中，β-catenin蛋白和Survivin蛋白高表达起着至关重要的作用。部分结直肠癌是从腺瘤发展而来的，联合检测β-catenin蛋白和Survivin蛋白有助于了解结直肠肿瘤的生物学行为并对患者的早期诊断、判断预后提供分子生物学的支持，有望成为结直肠癌的基因分型及基因治疗的新靶点。