HPLC法检测液态乳中的乙基麦芽酚

周宏霞，臧汝瑛

（威海市食品药品检验检测中心，山东威海,264210）

0 引 言

乙基麦芽酚（2-乙基-3羟基-4-吡喃酮），是一种人工合成香精，因其毒性相对较小、副作用小，被广泛应用于食品生产中。它可以弥补食品本身的香味缺陷，赋予部分食品生动的原滋味，加强食品的香味，掩盖食品的不良气息[1]。但是，如果大量的使用也会危害身体健康。GB 2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》，中明确规定巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳等28种产品中不能添加香料、香精，凡添加了食品用香料、香精的食品应按照国家相关标准进行标示。巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳中不得检出乙基麦芽酚。因此，对三类液态乳进行乙基麦芽酚的检测，加强对乳品市场的监管具有重要意义。

目前，检测乙基麦芽酚的方法有：分光光度法[2]、电化学法[3-5]、高效液相色谱法[6-7]、气相色谱法[8-9]、气相色谱-串联质谱法[10]及液相色谱-串联质谱法[1]等。GB5009.250-2016是关于食品中乙基麦芽酚的检测方法，但是适用范围，没有液态乳。由于提取的基质不同，提取效果会有差别，本文以液态乳为研究对象，建立液态乳中乙基麦芽酚的测定方法。为保障液态乳的质量安全提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 材料

甲醇：色谱纯(美国默克公司)；乙腈：色谱纯(美国默克公司)；甲酸：分析纯（天津科密欧化学试剂有限公司）；标准品：乙基麦芽酚≥98%（加拿大TRC公司）。微孔滤膜：0.45 um(天津津腾)。

1.2 仪器

台式高速离心机(Neofuge 23R，上海力申科学仪器有限公司)，电子天平（舜宇恒平仪器公司），分析天平（瑞士梅特勒公司），岛津LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司）。

1.3 样品前处理

准确称取2 g样品（精确至0.01 g）于10 mL容量瓶中，加入6 mL乙腈振荡混匀，提取10 min，用乙腈定容至刻度，6 000 r/min离心10 min，取上清液，过0.45 um的滤膜，滤液进液相色谱仪分析。

1.4 标准溶液配制

精密称取乙基麦芽酚0.1 g(精确至0.0001 g)，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，得到相应的标准储备液，浓度为1 mg/mL，于4℃冰箱保存。

1.5 仪器条件

色谱柱为Aglient ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 um)。流动相A：0.1%甲酸溶液，流动相B：甲醇。A+B=65∶35；流速：1.0 mL/min；进样量：10 uL；柱温：35℃；检测波长：276 nm。

2 结果与讨论

2.1 液相色谱条件的优化

选择不同的流动相甲醇+水(30∶70)、甲醇+0.02 mol/L磷酸二氢钠（25∶75）、甲醇+0.1%甲酸溶液（35∶65），发现甲醇+0.1%甲酸溶液（35∶65）条件下乙基麦芽酚峰形较好，基本无拖尾现象，目标物质与样品中的干扰物质也能得到很好的分离。而用其他流动相时峰拖尾严重。因此选用甲醇+0.1%甲酸溶液（35∶65）的条件。色谱柱选择150 mm的反相柱，柱压小，分析时间短，目标物能与样品杂质分离。乙基麦芽酚的色谱图如图1所示。

图1 乙基麦芽酚色谱图

2.2 提取条件的优化

液体乳中蛋白质含量高，提取过程要除去蛋白。前处理过程中比较了两种沉淀蛋白的方法：（1）利用有机试剂沉淀蛋白，本方法参考GB 5009.250-2016的方法采用乙腈沉淀蛋白。（2）利用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白。其中利用有机试剂沉淀蛋白效果好，并且回收率高。因此本方法采用乙腈沉淀蛋白。

2.3 标准曲线与检出限

用标准储备液配制0.5、2、5、10、25、100 mg/L的工作溶液，6个浓度的工作溶液依据1.5的液相色谱条件进样，以质量浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线结果如图2所示。乙基麦芽酚在0.5～100 mg/L范围内线性良好，线性回归方程为Y=38186.92X-42965.82，R=0.9999。以峰面积相当于基线噪音的3倍（S/N=3）计算出乙基麦芽酚的检出限为1 mg/kg。

图2 乙基麦芽酚的校准曲线

2.4 回收率和精密度实验

在已知的阴性液态乳样品中分别添加1、2、10 mg/kg的3个水平的乙基麦芽酚，每个加标样品做5个平行实验，按照1.3进行样品前处理，计算回收率及其精密度。最后计算得到液态乳中乙基麦芽酚的回收率在87.81%～98.82%，RSD在1.03%～3.27%。其结果见下表1。

表1 回收率添加实验

3 结果

建立了液态乳中乙基麦芽酚的液相检测方法，具有准确、简单、快速的优点。该方法线性关系良好，回收率高，可操作性强，符合定量分析的要求。