牛初乳类产品免疫调节作用的动物试验研究

文/王青云 杨晓波* 李凯锋 梁 超

（ 黑龙江省完达山乳业股份有限公司）

牛初乳富含具有调节机体生理功能的活性物质,其中免疫因子主要是高含量、具有抗原结合特性的IgG[1]，具有丰富的营养价值。初乳中常规营养成分（蛋白质、脂肪、维生素、矿物质）和生物活性物质（免疫因子、激素、生长因子等）的含量比常乳高数倍,具有极高的开发利用价值[2]。本文主要用完达山牌乳珍产品喂食小鼠，对细胞免疫功能、迟发型变态反应、体液免疫功能、单核—巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性进行检测，验证产品具有免疫调节作用。

1 材料与方法

1.1 样品

完达山牌乳珍产品，由黑龙江省完达山乳业股份有限公司提供，样品为乳黄色粉末，感官检查未见异常。

1.2 试验动物

由黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心提供，编号为医动字第09-2-7号。将健康雌性小鼠随机分为5 组，分别进行迟发型变态反应实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（免疫Ⅰ组）、碳廓清试验（免疫Ⅱ组）、脾淋巴细胞转化试验和NK细胞活性测定（免疫Ⅲ组）、半数溶血值（HC50）测定和抗体生成细胞检测（免疫Ⅳ组）。

1.3 剂量设计

完达山牌乳珍产品的人体推荐量为每人每日2 g（含IgG 2.26%)，如成人体重以60 kg计，则相当于0.033 g/kg·bw。小鼠的等效剂量为人体推荐量的10 倍，即每日0.33 g/kg·bw（中剂量），上、下各设一个剂量组：0.99 g/kg·bw（高剂量）和0.17 g/kg·bw（低剂量）。同时设清洁水（20 mL）和普通奶粉（0.33 g/kg·bw）分别作为阴性对照组和普通奶粉对照组。各组动物则按20 mL/kg·bw灌胃容积进行灌胃，连续灌胃30 d后测定各项免疫指标。

1.4 仪器与试剂

动物天平、分析天平、冰箱、离心机、722型分光光度计、显微镜、二氧化碳培养箱等。

无菌手术器械、游标卡尺（精密度0.01 mm）、微量注射器（25 μL）、细胞计数器、纱布、试管、计时器、血色素吸管、24孔培养板等。

绵羊红细胞（SRBC）、鸡红细胞、生理盐水、补体（豚鼠血清）、SA缓冲液、都氏试剂、印度墨汁、Na2CO3、Hank's液（pH值7.2～7.4）、RPMI 1640培养液、小牛血清、青链霉素、氧化型辅酶I等。

表1 完达山牌乳珍对小鼠体重的影响

表2 完达山牌乳珍对小鼠脏器／体重比值的影响

表3 完达山牌乳珍对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响（免疫Ⅰ组）

1.5 数据处理及结果判定

用方差分析进行统计分析。

2 结果

2.1 完达山牌乳珍产品对小鼠体重的影响

小鼠喂食完达山牌乳珍产品30 d后的体重变化见表1。由表1可见，各剂量组与对照组相比，初始体重和终末体重均无显著性差异（p＞0.05），说明本试验条件下完达山牌乳珍产品对小鼠体重增长无影响。

2.2 完达山牌乳珍产品对小鼠脏器/体重值的影响

喂食小鼠完达山牌乳珍30 d对脏器/体重值的影响见表2。由表2可见，经口给予小鼠不同剂量的完达山牌乳珍产品30 d后，低、中、高剂量组与对照组相比，脾脏/体重值和胸腺/体重值均无显著性差异（p＞0.05），即完达山牌乳珍产品对小鼠的脏器/体重值无影响。

2.3 完达山牌乳珍产品对小鼠迟发型变态反应（D TH）的影响

喂食小鼠完达山牌乳珍产品30 d对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响见表3。由表3可见，经口给予小鼠不同剂量的完达山牌乳珍产品30 d后，高剂量组与普通奶粉对照组相比，注射SRBC 24 h后的小鼠足跖肿胀度（足跖厚度）差异极显著（p＜0.01)，即完达山牌乳珍产品能增强小鼠的迟发型变态反应。

表4 完达山牌乳珍产品对小鼠巨噬细胞吞噬红细胞功能的影响（免疫Ⅰ组）

表5 完达山牌乳珍产品对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清功能的影响（免疫Ⅱ组）

2.4 完达山牌乳珍产品对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的影响

喂食小鼠完达山牌乳珍产品30 d对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的影响见表4。由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的完达山牌乳珍产品30 d后，各剂量组与普通奶粉对照组相比，吞噬百分数和吞噬指数均无显著性差异（p＞0.05），即完达山牌乳珍产品不能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

2.5 完达山牌乳珍产品对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清功能的影响

喂食小鼠完达山牌乳珍产品30 d对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清功能的影响见表5。由表5可见，经口给予小鼠不同剂量的完达山牌乳珍产品30 d后，中、高剂量组与对照组相比，碳廓清功能差异显著（p＜0.05），即完达山牌乳珍产品能够显著增强小鼠单核—巨噬细胞的碳廓清功能。

2.6 完达山牌乳珍产品对小鼠脾淋巴细胞转化功能的影响

喂食小鼠完达山牌乳珍产品30 d对小鼠脾淋巴细胞转化功能的影响见表6。由表6可见，经口给予不同剂量的完达山牌乳珍产品30 d后，各剂量组与阴性对照组相比，小鼠脾淋巴细胞转化功能均无显著性差异（p＞0.05），说明完达山牌乳珍产品不能影响小鼠脾淋巴细胞转化功能。

2.7 完达山牌乳珍产品对小鼠NK细胞活性的影响

喂食小鼠完达山牌乳珍产品30 d对小鼠NK细胞活性的影响见表7。由表7可见，经口给予小鼠不同剂量的完达山牌乳珍30 d后，各剂量组与普通奶粉对照组相比，小鼠NK细胞活性均无显著性差异（p＞0.05），说明完达山牌乳珍产品不能增强小鼠NK细胞活性。

2.8 完达山牌乳珍产品对小鼠半数溶血值（HC50）的影响

喂食小鼠完达山牌乳珍产品30 d对小鼠半数溶血值（HC50）的影响见表8。由表8可见，经口给予小鼠不同剂量的完达山牌乳珍产品30 d后，高、中剂量组与普通奶粉对照组相比，小鼠半数溶血值差异分别极显著（p＜0.01）和显著（p＜0.05），表明完达山牌乳珍产品能显著提高小鼠半数溶血值。

表6 完达山牌乳珍产品对小鼠脾淋巴细胞转化功能的影响（免疫Ⅲ组）

表7 完达山牌乳珍产品对小鼠NK细胞活性的影响（免疫Ⅲ组）

表8 完达山牌乳珍产品对小鼠半数溶血值（HC50）的影响（免疫Ⅳ组）

表9 完达山牌乳珍对小鼠抗体生成细胞的影响（免疫Ⅳ组）

2.9 完达山牌乳珍对小鼠抗体生成细胞的影响

喂食小鼠完达山牌乳珍产品30 d对小鼠抗体生成细胞的影响见表9。由表9可见，经口给予不同剂量的完达山牌乳珍产品30 d后，高、中剂量组与普通奶粉对照组相比，抗体生成细胞差异显著（p＜0.05），表明完达山牌乳珍产品能增强小鼠抗体生成细胞功能。

3 小结

经口给予小鼠不同剂量的完达山牌乳珍产品30 d，进行了4 类、7项试验，即细胞免疫功能检测（小鼠脾淋巴细胞转化试验和迟发型变态反应试验）、体液免疫功能检测（抗体生成细胞检测和半数溶血值测定）、单核—巨噬细胞吞噬功能检测（小鼠单核—巨噬碳廓清功能试验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验）以及NK细胞活性检测。结果表明，完达山牌乳珍产品可显著增强小鼠迟发型变态反应、碳廓清功能、半数溶血值及抗体生成细胞功能。由此可见，完达山牌乳珍产品可增强体液免疫功能、细胞免疫功能和单核—巨噬细胞吞噬功能，即具有免疫调节作用。