鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

张 代 赵耀光

（商丘职业技术学院动物工程系 河南 商丘 476000）

鸭大肠杆菌病是养鸭生产中较为常见的细菌病[1]，它是由某些致病性大肠杆菌引起的。该病可发生在任何年龄的鸭群，其中雏鸭最易感染，发病率和死亡率较高[2]。主要症状是精神萎靡、食欲不振，呼吸困难，腹泻，拉黄绿色或黄白色稀粪。临床剖检表现为纤维性心包炎，包心、包肝，气囊炎、输卵管炎等[3]。由于大肠杆菌血清型复杂，很难依靠疫苗进行控制，抗生素的大量使用又极易产生耐药性，已逐渐成为人类的健康潜在的威胁。本试验对商丘市某鸭场发病雏鸭分离的细菌进行了实验室诊断和药敏实验，以期望为临床上进行有效地预防和治疗提供理论依据。

1 试验材料

1.1 仪器。高压灭菌器、生化培养箱、冰箱、显微镜。

1.2 培养基及试剂。普通琼脂培养基、肉汤培养基、麦康琼脂凯培养基、细菌生化鉴定管、药敏试纸片。

1.3 试验动物。健康小白鼠12只，购于郑州大学试验动物中心，体重20～24 g。

2 方法

2.1 病料的采集。剖检鸭为商丘市某鸭场送往市动物疫病防控中心的临床病例，病鸭临床表现和剖检结果与大肠杆菌病的典型特征吻合，疑似致病性大肠杆菌引起。无菌采取病鸭肝脏病料接种于普通琼脂培养基上，置于37℃的生化培养箱培养18～24 h，观察菌落形态。

2.2 细菌的分离、纯化。根据菌落形态，挑取单个疑似菌落进行涂片、革兰氏染色、镜检，后接种于麦康凯琼脂培养基上，置于37℃的生化培养箱培养18～24 h，观察菌落生长特点。

2.3 细菌的生化试验。根据中国农业出版社出版的兽医微生物试验指导(姚火春主编)进行细菌生化试验。

2.4 药敏试验。药敏试验采用琼脂纸片扩散法，取细菌纯培养物密集划线接种于整个普通琼脂平板上，将药敏片依次均匀贴放到平板上，每个平板放5片，各纸片中心相距约24 mm，纸片距平板边缘约15 mm，各纸片间距离相等，将平板倒置于37℃温箱培养24 h，然后观察药物的抑菌情况，并测定各种药物抑菌圈的大小。

2.5 动物试验。取分离菌接种于营养肉汤中，37℃培养18 h，将12只小白鼠随机分成2组(试验组和对照组)，每组6只，试验组采用腿部肌肉注射的方法，每只注射纯培养物0.2 ml(约含细菌0.7亿/只)，对照组每只腿部肌肉注射生理盐水0.2 ml，接种24 h后观察试验动物的发病及死亡情况。

3 结果

3.1 病理剖检结果。肝脏肿大且有出血点，表面附有白色的纤维素样炎性渗出物。腹腔、胸腔及心包积液严重，心包膜明显增厚，纤维素性心包炎、腹膜炎特征明显。

3.2 培养特性结果。该细菌能在普通肉汤中生长良好，管底沉淀呈灰白色，轻摇呈云雾状均匀浑浊；接种于麦康凯琼脂培养基上生长呈现红色的菌落。革兰氏染色后镜检可见该菌较小，呈阴性，杆状，两端钝圆，符合大肠杆菌的培养及染色的典型特点。

3.3 生化试验结果。该菌能分解多数碳水化合物，即葡萄糖、麦芽糖、乳糖及甘露醇等，并且在发酵的过程中产酸产气；不发酵蔗糖；吲哚试验和MP试验结果呈阳性反应；硫化氢试验、柠檬酸盐利用试验以及尿素分解试验结果呈阴性反应(见表1)。

表1 分离菌株的生化试验结果

3.4 药敏试验结果。对丁胺卡那霉素高度敏感，对氯霉素、四环素、庆大霉素、链霉素、强力霉素、卡拉霉素、头孢拉定及头孢唑啉等中度敏感，对其他药物不敏感(具有一定的耐药性)。

表2 分离菌株的药敏试验结果

3.5 动物试验结果。接种细菌的试验组小白鼠均出现了呼吸急促、精神不振、厌食等症状，48 h内全部死亡，尸体剖检结果显示死亡小鼠心脏有少量的片状出血位点，心包内有积液。接种生理盐水的对照组则无任何异常现象，即小鼠能够正常生存。

4 分析与讨论

4.1 通过对分离菌株进行分离培养、染色镜检、生化鉴定、药敏及动物试验，可以确诊分离株为鸭致病性大肠杆菌，并且致病性较强。

4.2 大肠杆菌病是一种常见病、多发病，其血清型众多，控制难度极大。血清型不同，地区不同，大肠杆菌对药物敏感性也各不相同。药敏试验结果表明，分离菌对丁胺卡那霉素药物高度敏感，对氯霉素、四环素、庆大霉素、链霉素、强力霉素、卡拉霉素、头孢拉定及头孢唑啉等中度敏感，对阿莫斯林、氟哌酸、利福平、环丙沙星及左氧沙星等其他药物已经产生了一定的耐药性。

4.3 大肠杆菌是条件性致病菌，发病主要与环境条件有着极大的关系，因此为了减少大肠杆菌病的发生，我们应尽可能的搞好鸭舍清洁卫生，勤扫粪便，定期消毒，做好通风，饲喂优质饲料及清洁水，采用全进全出饲养方式，减少各种不良应激[4]。