外周血维生素D3在原发性干燥综合征患者中的表达及与病情程度的关系①

刘鑫颖 房 成 张 勇

(唐山市工人医院检验科，唐山063000)

原发性干燥综合征是一种自身免疫性疾病，发病机制尚不明确，但基础研究认为，遗传、免疫、病毒感染等均可引发其发病[1]。临床表现为腮腺、颌下腺肿大疼痛且反复发作，吞咽困难，眼睛感觉异物且泪少，视力出现下降，全身乏力，皮肤感到瘙痒等，还可累及外分泌腺[2,3]。发病人群多为30岁以上或绝经期后的女性，老年发病率更高，随着时间的变化，其发病率也逐年增长[4]。25(OH)D3属于脂溶性维生素，对免疫功能以及钙磷代谢均具有调节作用[5]。临床认为，外周25(OH)D3和自身免疫性疾病之间具有密切的关系[6]。本研究旨在探讨25(OH)D3在原发性干燥综合征患者中的表达及与病情程度的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集我院就诊的98例患者。均符合原发性干燥综合征诊断标准[7]：口鼻干，视力下降感觉有异物，腮腺、颌下腺肿大疼痛且反复发作，口鼻干燥、全身乏力等。纳入肝肾肺功能无异常者；无结核病、肝炎等传染疾病；配合研究者；无器质性疾病；排除妊娠期妇女；近期头面部接受过放疗；患有精神疾病；近期使用过乙酰胆碱药物；本研究家属及患者均签署知情同意书，且经医院伦理委员会许可，将其分为pSS稳定期组和pSS活动期组。pSS稳定期患者49例，男21例，女26例，年龄40～60岁，平均(50.28±5.03)岁；pSS活动期49例，男23例，女26例，年龄41～60岁，平均(50.73±4.97)岁；同期选择98例在我院体检的健康志愿者作为对照组进行研究，男50例，女48例，年龄40～60岁，平均(49.08±5.12)岁。比较三组性别等差异无统计学意义(P>0.05)，存在可比性，见表1。

1.2方法

1.2.1外周血标本及血清采集方法 空腹采集患者外周静脉抗凝血，加入淋巴细胞分离液(生产厂家：天津灏洋LDS1075)，密度梯度离心后并取单个核细胞。用PBS重悬PBMC后分装至流式细胞管，650 g离心7 min，5 ml血一共可留取1～2 ml血浆,以尽量不吸取到红细胞为原则，注意无菌操作，巴斯管不能伸进EP管。吸取的血浆离心3 000 r/min，10 min，吸取上清。将血浆样本用0.5 ml EP管分装冻存，放入-80℃冰箱冻存，待所有样本收集齐后，统一复苏细胞，进行抗体染色，采用流式细胞仪检测进行检测(仪器型号：美国BD LSRⅡ)。

1.2.2血清采集及检测 空腹采集患者外周静脉血，以3 000 r/min离心10 min，取血清待检测。按电化学发光法测定IL-6、IL-10、IL-17，试剂盒：海南利能康泰制药有限公司；按免疫比浊法检测肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor α，TNF-α)、试剂盒：广东联康药业有限公司。采用ELISA(上海哈灵生物科技有限公司)检测外周血25(OH)D3的水平。

GroupsSex(male/female)Age(year)Clinical manifestationFeverSwelling of parotid glandVasculitisLung involvementRenal lesionControl group50/4849.08±5.12/////pSS stable period21/2850.28±5.0314(28.57)20(40.81)17(34.69)10(20.40)9(18.36)pSS activity period23/2650.73±4.9712(24.48)18(36.73)19(38.77)11(22.44)10(20.40)

GroupsB lymphocyte indexCD27highCD27+T lymphocyte index(μg/L)TNF-αIL-6IL-10IL-17Control group1.80±0.2033.92±3.1969.03±11.0740.02±9.4296.89±10.3745.92±9.01pSS group0.87±0.2321.75±4.32135.89±15.8398.52±20.1746.16±17.0589.36±16.26

GroupsB lymphocyte indexCD27highCD27+ T lymphocyte index(μg/L)TNF-αIL-6IL-10IL-17pSS activity period0.70±0.1017.04±1.90205.86±28.98114.02±20.7331.92±8.09101.86±15.97pSS stable period1.23±0.3025.10±2.80124.57±16.0481.98±7.4060.86±6.1876.39±4.53

表4三组25(OH)D3水平对比

Tab.4Comparisonof25(OH)D3levelinthreegroups

GroupsnVitamin D3(pg/ml)Control group9841.64±5.59pSS active group7022.45±3.27pSS stable period4939.03±3.21

1.2.3观察指标 观察pSS组和对照组B淋巴细胞指标、T淋巴细胞指标对比，pSS活动期组和pSS稳定期组B淋巴细胞指标、T淋巴细胞指标对比。

2 结果

2.1pSS组和对照组免疫功能指标对比 在B淋巴细胞中，pSS组CD27high浆细胞、CD27+记忆性B细胞显著低于对照组(P<0.05)，在T淋巴细胞指标中，pSS组TNF-α、IL-6、IL-17水平显著高于对照组，IL-10水平显著低于对照组(P<0.05)，见表2。

2.2pSS活动期组和pSS稳定期组免疫功能指标对比 在B淋巴细胞中，pSS活动期组CD27high浆细胞、CD27+记忆性B细胞显著低于pSS稳定期组(P<0.05)，在T淋巴细胞指标中，pSS活动期组TNF-α、IL-6、IL-17水平显著高于pSS稳定期组，IL-10水平显著低于pSS稳定期组(P<0.05)，见表3。

2.3三组25(OH)D3水平对比 活动组25(OH)D3水平低于稳定期组和对照组(P<005),但稳定期组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

3 讨论

原发性干燥综合征可累及全身各个系统，由于目前其发病机制尚不明确，因此，多种免疫细胞异常活化的调节机制尚处于未知状态[8]。原发性干燥综合征最常见的受累靶器官为唾液腺和泪腺，从而使患者全身出现一系列临床症状，还可引起肺肾脏病变，出现低钾血症和肾小管酸中毒[9]。

25(OH)D3具有生物学活性，是25(OH)D3的代谢产物[10]。维生素D具有调节免疫以及钙磷代谢的作用，与维生素D受体结合后，还可合成及分泌相关细胞因子，激活淋巴细胞，调节抗原递呈细胞分化[11,12]。且以往大量研究证实，若维生素D摄入不足或减少时，可使T淋巴细胞亚群以及B淋巴细胞功能出现异常，从而导致免疫机制出现障碍[13]。本研究显示，原发性干燥综合征患者的25(OH)D3含量与正常人存在显著差异，而原发性干燥综合征活动期患者的25(OH)D3含量明显低于稳定期患者。提示了25(OH)D3与原发性干燥综合征之间存在一定的联系，且其含量与病情程度之间呈负相关，但本次研究例数较少，还需大样本研究证明。原发性干燥综合征病发后最关键的病理环节是T淋巴细胞和B淋巴细胞[14]。国内外研究认为[15]，B淋巴细胞可导致靶腺体功能损伤，其指标CD27high浆细胞、CD27+记忆性B细胞向靶腺体进行迁移并浸润，出现含量异常降低的情况。在T淋巴细胞中，可使局部浸润从而产生多种炎症因子参与疾病，促进靶腺体功能损伤[16]。TNF-α、IL-6、IL-17是临床上常见的炎症因子，由免疫细胞合成及分泌，具有一定的促炎作用，可促进病情的发展。IL-10是一种多功能细胞因子，由Th1细胞分化，可对细胞的生化及分化进行调节，参与炎症反应和免疫反应，具有促进嗜酸粒细胞凋亡的作用。T细胞活化后在靶腺体内受到浸润后会使TNF-α、IL-6、IL-17、IL-10含量出现改变[17]。在本研究中，CD27+记忆性B细胞显著低于正常人，且活动期患者较稳定期患者低；TNF-α、IL-6、IL-17含量显著高于正常人，且活动期患者较稳定期患者高，IL-10含量低于正常人，活动期患者较稳定期患者低。说明了该病可使机体免疫功能出现紊乱，加速病情发展。

国外研究表明，当25(OH)D3不足时，Th1和Th17细胞会出现异常活化，Th2免疫功能会出现减弱[18]，而B淋巴细胞出现异常成熟，从而对患者的靶器官功能造成损伤。临床认为，25(OH)D3具有抑制T淋巴细胞活化以及B淋巴细胞成熟的作用[19]。其可促进细胞生长与分化，与维生素D受体结合激活后，能够增强免疫活性，可减少对腺体功能的损伤[20]。

综上所述，原发性干燥综合征患者外周血25(OH)D3水平显著低于正常人，25(OH)D3的不足可使T淋巴细胞和B淋巴细胞浸润及活化，造成腺体功能损伤，与原发性干燥综合征的病情程度以及免疫功能之间存在密切的关系。