医院制剂榆参洗剂质量标准研究*

朴春梅，梁 会，周训蓉

（贵阳中医学院第二附属医院，贵州 贵阳 550001）

榆参洗剂处方源自我院皮肤科经验用方，组方为黄柏、地榆、苦参、蛇床子、冰片等，具有清热燥湿、杀虫止痒的功效，适用于湿疹、银屑病、丘疹性荨麻疹、结节性痒疹、疥疮、皮肤瘙痒症等瘙痒性皮肤病。现代药理研究证实，黄柏、地榆、蛇床子、地肤子、苦参、冰片等可降低毛细血管通透性和减轻炎性介质的释放，产生明显的抗炎、抗过敏效应，并对金黄色葡萄球菌等均有不同程度的抑制作用。为了更好地控制榆参洗剂的质量，本研究中对方中黄柏、苦参2味药材进行了薄层色谱（TLC）鉴别，并采用高效液相色谱（HPLC）法对方中黄柏的活性成分小檗碱（C20H18NO4）进行含量测定，为完善该制剂的质量标准提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

HP1100型高效液相色谱仪，包括自动进样器、在线脱气机、DAD检测器（美国安捷伦公司）；HB－10250型超声清洗器（功率为250 W，频率为40 kHz，江苏汉邦科技有限公司）；AE电子分析天平（十万分之一，Mettler Toledo）；98－1－B型电子控温电热套（天津市泰斯特仪器有限公司）；DZ－1BC型真空干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试药

乙腈为色谱纯，乙醇、磷酸等均为分析纯；水为超纯水；国家药品标准物质盐酸小檗碱（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号为110713－201212）；硅胶G、硅胶H（青岛海洋化工厂，供薄层层析用）；榆参洗剂（我院自制制剂）。

2 方法

2.1 薄层色谱鉴别[1]

黄柏、苦参：取样品10 mL，加1% 醋酸甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1.5 mL，作为供试品溶液。取缺黄柏及缺苦参的阴性模拟制剂各10 mL，同法制备阴性对照品溶液。另取黄柏及苦参对照药材各5 g，分别加1% 醋酸甲醇50 mL，加热回流 30 min，滤过，滤液浓缩至1.5 mL，作为黄柏对照药材溶液及苦参对照药材溶液。照2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB中薄层色谱法试验，取黄柏对照药材、苦参对照药材、供试品、缺黄柏阴性对照品和缺苦参阴性对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水（30∶10∶3）的下层溶液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液[1]。供试品溶液色谱中，在与2种对照药材溶液色谱相应位置上，显相同颜色斑点，阴性对照无干扰，色谱图见图1。

图1 黄柏、苦参薄层色谱图

2.2 盐酸小檗碱含量测定(HPLC法)2.2.1 色谱条件

色谱柱：Ultimate XB －C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈 －0.1% 磷酸溶液（28 ∶72）；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：265 nm。

2.2.2 溶液制备

精密量取样品10 mL，置50 mL锥形瓶中，加乙醇30 mL，加热回流处理30 min，放冷，过滤，滤液定容到50 mL，摇匀，用 0.45 μm 微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。取缺黄柏药材的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。称取盐酸小檗碱对照品1.951 mg，置 5 mL 容量瓶中，加乙腈 － 水（5 ∶1）混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1 mL含0.260 1 mg的对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

系统适用性试验：分别吸取盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按拟订色谱条件测定。阴性对照品溶液在与对照品溶液相同保留时间处未见色谱峰，说明阴性无干扰，色谱图见图2。

线性关系考察：精密吸取混合对照品溶液0.1，0.2，0.5，0.6，0.8，1.0 mL，分别置 2 mL 容量瓶中，加乙腈－水（5∶1）混合溶剂稀释至刻度，摇匀，按拟订色谱条件，各取5 μL进样，以峰面积积分值（Y）为纵坐标、质量浓度（X，g/L）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=27 815.362X+25.344 114，r=0.999 9（n=6）。结果表明，盐酸小檗碱质量浓度在0.013 005～0.130 050 g/L与峰面积线性关系良好。

图2 高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液5 μL，重复进样6次，测定峰面积。结果的RSD为0.58%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密量取同一供试品溶液10 mL，分别于 0，3，6，9，12 h 时进样。结果的RSD为 0.93%（n=5），表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验：分别精密量取样品8，10，12 mL各3份，依法制备供试品溶液，分别进样测定。结果平均含量为 1.23 g/L，RSD为 2.94% （n=9），表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已知含量的样品（盐酸小檗碱含量为 0.264 g/L）9份，每份 5 mL，精密量取；取对照品溶液（初始质量浓度为 1.234 g/L）1.00，0.75，0.60 mL，精密量取，加入上述样品溶液中（每个质量浓度3份），依法制备供试品溶液，分别进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.2.4 样品含量测定

依法制备供试品溶液和盐酸小檗碱对照品溶液，分别进样，记录色谱峰，测定峰面积。结果见2。

表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果（n=9）

表2 样品含量测定结果（g/L，n=10）

3 讨论

3.1 样品处理方法

在建立盐酸小檗碱定量方法时，分别考察了超声提取、加热回流提取等供试品溶液的前处理方法，结果以加热回流提取方法较好，盐酸小檗碱含量最高。还对提取溶剂及提取时间进行单因素考察，最终确立了本研究中供试品溶液的制备方法。

3.2 色谱条件选择

榆参洗剂为中药复方制剂，成分复杂，而方中黄柏、苦参分别存在阴性干扰，主斑点不明显，专属性不强。通过多次调整及试验，筛选出以三氯甲烷－甲醇－水（30 ∶10 ∶3）的下层溶液为展开剂，试验证明[2－4]，能同时鉴别苦参与黄柏，且斑点清楚明显，分离效果好，重复性较好，均无阴性干扰，操作简便。该方法具有简易、重复性好、专属性强的优点，可为该制剂质量标准的提高提供参考依据。

由于小檗碱属于季胺型生物碱，极性较大，为了达到良好的分离效果，本研究中采用反相色谱柱进行分离。文献[5－9]报道，曾用乙腈－0.05 mol/L磷酸二氢钠（24 ∶76）、（25 ∶75），乙腈 －0.1% 磷酸（45∶55）和乙腈 －水（29 ∶71）作为流动相，2010 年版《中国药典（一部）》中，盐酸小檗碱以乙腈－0.05 mol/L磷酸二氢钠（38∶62）为流动相，综合考虑分离度、出峰时间等因素，最终选择流动相为乙腈－0.1%磷酸溶液（28∶72），流速为1 mL/min，柱温为30℃，检测波长为265 nm。结果显示，该条件下样品分离效果好，且出峰时间适中。

3.3 指标成分选择

榆参洗剂具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮的功效，用于湿疹瘙痒湿热、带下热淋。方中选用黄柏清热泻火毒，燥湿去湿热以皮治皮，配地榆凉血解毒、消肿止痛，加强泻火解毒的作用，为君药。且盐酸小檗碱是黄柏的主要活性成分之一[10－13]，故采用盐酸小檗碱为指标进行制剂学研究。

根据本品工艺研究结果，小檗碱平均含量为0.255 g/L，从大批量规模生产考虑，本品每1 mL盐酸小檗碱的含量，其限度以80%计算，小檗碱的含量为0.204 g/L，故本品的限度定为每瓶含小檗碱（C20H18NO4）不得少于20.4 mg。