中药六味地黄汤与单味颗粒剂混合液成分比较研究

胡耶芳 林玲易 春霞颜 剑黎剑

摘要目的：比较中药六味地黄汤与单味颗粒混合液有效成分的含量。方法：采用高效液相色谱法，以乙腈磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为10 mL/min，检测波长238 nm。定量分析2种溶液中的已知有效活性成分马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷的含量变化。结果：3批六味地黄传统汤剂种马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷的含量明显高于同批的单味颗粒剂混合液中成分的含量，分别为3批单味颗粒的145、136、143倍。结论：中药六味地黄汤单味颗粒剂混合液低于六味地黄汤有效成分含量，存在明显差异，本研究为临床中药汤剂、单味颗粒剂合理应用提供科学依据。

关键词中药；六味地黄汤；单味颗粒剂；混合液；高效液相色谱法；马钱苷；丹皮酚；没食子酸；芍药苷

Comparison Study on the Components of Liuwei Dihuang Decoction and Single Ingredient Mixture

Hu Yefang， Lin Ling， Yi Chunxia， Yan Jian， Li Jian

（Pharmacy Department， Guilin Hospital of Traditional Chinese Medicine， Guilin 541002， China）

AbstractObjective：To compare the content of the effective components in the mixture of Liuwei Dihuang Decoction and single ingredient mixture. Methods：The gradient elution was carried out by using high performance liquid chromatography with acetonitrile phosphoric acid aqueous solution as mobile phase. The flow rate was 10 mL/min and the detection wave length was 238 nm. Quantitative analysis of changes in the content of two kinds of solution of known active ingredients loganin， paeonol， gallic acid， and paeoniflorin. Results：The 3 batch of Liuwei Dihuang Decoction， loganin， paeonol， gallic acid， and paeoniflorin content was significantly higher than that of the single component content of the same batch of granules in a mixed solution， respectively， for the 3 batch of single granule 145， 136， 143 times. Conclusion The traditional Chinese medicine Liuwei Dihuang Decoction mixture of single ingredient is lower than the effective ingredient content of Liuwei Dihuang Decoction， with significant differences. This study provides a scientific basis for the clinical application of traditional Chinese medicine decoction and single granule.

Key WordsLiuwei Dihuang Decoction； Single ingredient granules； Mixed liquor； HPLC； Loganin； Paeonol； Gallic acid； Paeoniflorin

中圖分类号：R2895文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.07.048

汤剂是中医治疗疾病的主要剂型之一，以其随证加减、组方灵活、吸收快的优点，从古到今深受广大患者的欢迎[12]。但因调配、煎煮、携带的不方便使其发展受到一定的影响。单味中药颗粒剂的出现是对中药饮片改革的一种尝试，但中药颗粒剂是否符合中医辨治的需要，其与汤剂在化学组分及临床疗效方面是否一致，目前尚未得到肯定[3]。中药六味地黄汤出自宋代名医钱乙《小儿药证直诀》是治疗肝肾阴虚的经典方，由熟地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻、牡丹皮六味药组成，临床常用于滋阴补肾，用于治疗头晕耳鸣，腰膝酸软，遗精盗汗等症[45]。中医认为肾精滋养髓海，肾精亏容易导致脑髓失养神智失常，肺肾金水相生，一为气之主，一为气之根，故六味地黄汤可以用于肝肾不足的神经精神疾病。本课题采用高效液相色谱法（HPLC）分析方法拟对传统方剂六味地黄汤、单味颗粒剂混合液的指标性成分进行分析，探讨指标性成分的含量变化。现报道如下。

1仪器与试药

11仪器

高效液相色谱仪（1260 Agilent）；十万分之一电子天平（AB265S，梅特勒托利多仪器有限公司）；万分之一电子天平（ALB224，梅特勒托利多仪器有限公司）。

12试剂

对照品马钱苷（111640201502）、丹皮酚（110708201506）、没食子酸（110831201405）、芍药苷（110736201509）均购买于中国食品药品检定研究院。

乙腈为色谱纯（美国Fisher公司）；磷酸（北京化工厂）；纯化水（杭州哇哈哈有限公司）。

13分析样品

熟地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻、牡丹皮六种药材均购买于广州致信药业有限公司，并经桂林市中医院药剂科老师鉴定为正品。

2方法与结果

21色谱条件

流动相：乙腈（A）～01%磷酸水溶液（B）梯度洗脱（0～5 min，5%A；5～15 min，5%A→15%A；15～20 min，15%A；20～45 min，15%A→45%A；45～50 min，45%A；50～55 min，45%A→100%A；55～60 min，100%A）流速：10 mL/min；波长：238 nm；柱温35 ℃；进样量：10 μL。

22对照品溶液的制备

分别精密吸取对照品马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷适量至10 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，制得马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷浓度分别为0205 mg/ mL、0045 2 mg/ mL、0142 8 mg/ mL、0131 2 mg/ mL的混合对照品溶液。

23供试品溶液的制备

汤剂制备：取熟地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻、牡丹皮六种药材按配方比例（24∶12∶12∶9∶9∶9）煎煮3次，8倍溶媒量，首次煎煮60 min，第2，3次煎煮30 min，合并水煎液，浓缩至250 mL，精密量取25 mL溶液，至50 mL容量瓶中，加入甲醇超声溶解，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得[6]。

24配方颗粒溶液制备本研究所需配方颗粒严格按照生产工艺进行生产，经水煎、提取、浓缩、干燥、制粒，成品备用，准确称取相当量的配方颗粒加入一定量水溶解，制得单味颗粒剂混合液，量取25 mL按照上述方法处理，即得单味颗粒剂混合液供试液[7]。

25专属性试验取六味地黄药材，按供试品溶液制备的方法制备不含熟地黄、山茱萸和牡丹皮的阴性对照品溶液，按以上色谱的条件得样品、对照品以及阴性对照品比较，结果显示，无其他成分干扰目标成分的测定。

26线性关系考察

分别精密取混合对照品溶液2、4、8、10、15、20 μL，按21项下色谱条件进行测定，以马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷对照品峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线分别为Y=1 7235X～125（r=0999 8，线性范围为041～410 μg）、Y=1 6217X～125（r=0999 7，线性范围为0090 4～0904 μg）、Y=1 5437X～125（r=0999 7，线性范围为0285 6～2856 0 μg）、Y=1 4787X～125（r=0999 7，线性范围为0264～264 μg）。

27中间精密度试验

精密吸取混合对照品溶液10 μL，连续进样6次，记录4种对照品的峰面积，并计算RSD值，结果显示马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷4种对照品RSD值分别为05%、032%、048%、056%，均小于10%，结果表明仪器精密度良好。

28供试品溶液稳定性试验

取同一供试品溶液分别于0、2、4、8、12、24 h进样测定，记录马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷4种成分峰面积，并计算RSD值分别为072%、067%、023%、065%，结果显示供试品溶液24 h内稳定。

29重复性试验

精密吸取六味地黄汤样品溶液6份，按222项下方法制备供试品溶液，按21项下色谱条件进行测定，记录并计算马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷4种成分含量及RSD值，结果显示4种成分含量分别为0328、0056、0132 3、0248 mg/g，RSD值分别为058%、067%、028%、045%均小于10%，结果表明该方法重复性良好。

210回收率试验

精密吸取六味地黄汤样品溶液6份置100 mL容量瓶中，分别加入制备好的混合对照品溶液（马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷浓度分别为0205 mg/mL、00452 mg/mL、0142 8 mg/mL、0131 2 mg/mL）3 mL，按222项下方法制备供试品溶液，计算4种对照品回收率及RSD值。結果显示，4种对照品加样回收率分别为：122%、144%、021%、053%。结果表明，该方法可行。见表1。

211样品测定结果

分别取3批传统六味地黄汤样品溶液及配方颗粒样品溶液，按222项下方法制备供试品溶液，按21项下色谱条件进行测定，测定4种对照品马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷峰面积，并计算含量，结果3批六味地黄传统汤剂种马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷的含量明显高于同批的单味颗粒剂混合液中成分的含量，分别为3批单味颗粒的145、136、143倍。见表2。

3讨论

六味地黄方剂味传统滋补肝肾药方，其方剂中主要由山茱萸、泽泻、熟地黄、山药、茯苓和牡丹皮等6味药材组成[811]。现代药理学研究表明，该方具有增强免疫力、抗氧化、降血脂、抑制肿瘤扩散等功效[1216]。临床上多用于治疗慢性前列腺炎、肾病、高血压、女性更年期综合征等疾病[1722]。随着中药剂型的不断改变，新剂型、新技术的不断改进，六味地黄制剂已呈现多样化，但传统汤剂有很多不足，如携带不便、贮存不便、饮用不便，配方颗粒的出现，避免了上述的不足，但配方颗粒与传统汤剂的指标性成分的含量还存在差异性。

本研究制备六味地黄汤剂与单味颗粒剂混合液所需药材均为相同批次中药饮片制备而成，且单味颗粒需要量均由汤剂混合液药材折算而成，综合以上两点，该试验结果更具客观性、真实性、可比性。本研究建立了同时测定马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷4种有效成分的含量测定方法，经方法学考察显示该方法稳定、可行。

本研究采用HPLC测定六味地黄汤剂与单味颗粒剂混合液中4种有效成分马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷的含量，结果显示六味地黄传统汤剂中4种有效成分的含量明显高于同批的单味颗粒剂混合液中成分的含量，且分别为3批单味颗粒的145、136、143倍。分析其原因，2种样品中的物质基础成分存在一定的差异性，2种样品在制备过程中，因其制备工艺不同，以及样品单煎、共煎的差异性；单味颗粒在制备过程中，增加了喷雾干燥这一过程，可能导致有效成分的含量存在较大的差异。本研究为临床配方颗粒的应用提供了依据。但该研究只是针对马钱苷、丹皮酚、没食子酸、芍药苷4种有效成分的含量的差异性进行了测定，六味地黄汤中成分复杂，其他成分是否存在差异性有待进一步研究，另外，该4种有效成分的差异性能否导致药效变化还有待进一步研究。为此六味地黄汤剂与单味颗粒剂混合液的等效性还需要进行更多、更深入的研究。

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（2017-07-26收稿责任编辑：杨觉雄）