Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达量检测对慢性乙型肝炎患者病情评估的价值分析

徐开菊 周巧灵 杨仁国（通讯作者）

（四川省人民医院 四川 成都 610072）

临床上，慢性乙型肝炎十分常见，属于慢性传染性疾病的一种，主要治疗方式为抗病毒治疗[1-2]。慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）中提示，若仅采用抗病毒疗法对患者进行治疗，便难以获得明显的治疗效果，会导致多数患者病情迁延，最终发展成为肝硬化[3]。据最新研究可知，慢性乙型肝炎患者肝组织和外周血中的Th17（辅助性T细胞）表达水平会显著升高，可以将其作为治疗慢性乙型肝炎的的一个新靶点[4]。本研究对Th17细胞表面的CXCR3（CXC亚族趋化因子受体3）、CCR6（CC趋化因子受体）、CCR4（CC趋化因子受体）表达量进行检测，以此来分析其和患者病情之间存在的相关性，报道如下。

1.资料与方法

1.1 临床资料

于2017年1月—2017年12月在我院接受诊治的慢性乙型肝炎患者中选取88例，归为观察组，从未接受过抗病毒治疗，患者平均年龄（36.28±8.29）岁，男性50例，女性38例；病情重度、中度、轻度患者分别有18例、30例、40例。再选取同时期我院86例健康体检者为对照组，平均年龄（37.05±8.16）岁，男性49例，女性37例。对比两组基础资料，差异有对比价值存在，P＞0.05。

1.2 检测方法

Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达量检测：抽取所有研究对象5ml清晨空腹静脉血，在抗凝管中放置，PBMC（外周血单个核细胞）采用Ficoll密度梯度离心法进行分离，采用培养基将无菌PBMC浓度调节到1×106个/ml，并且放入到24孔板中，将阻断剂、伊屋诺霉素以及刺激剂加入之后，在5%二氧化碳、37℃的条件下对其进行5h培养，CD8、CD4、CD3表面均标记染色固定，在室温下保持20min静置，注意避光，细胞洗涤之后，Thl7细胞表面趋化因子受体CXCR3、CCR6、CCR4表达百分率、CD8+Thl7、CD4+Thl7细胞细胞占总淋巴细胞百分率均采用流式细胞仪进行检测。

肝功能指标检测：抽取患者2ml清晨空腹静脉血，对其进行离心处理，Glo（球蛋白）、Alb（白蛋白）、TBIL（总胆红素）、ALT（丙氨酸转氨酶）等肝功能指标均采用大型自动生化仪进行检测。

血清纤维化指标检测：抽取患者2ml清晨空腹静脉血，室温下放置之后对其进行15min离心处理，速度控制为2000r/min，PCⅢ（人Ⅲ型前胶原）、IVc（Ⅳ型胶原）、LN（层黏连蛋白）、HA（透明质酸）等纤维化指标均采用ELISA（酶联免疫吸附）法测定。

1.3 统计学分析

经SPSS20.0统计学软件统计，计量资料采用t检验，计数资料行χ2检验，P＜0.05时说明差异明显。

2.结果

2.1 各组Th17细胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表达量对比

经检验，慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表达量均高于对照组，差异显著，P＜0.05；慢性乙型肝炎患者病情越严重，外周血Th17细胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表达量越高，差异明显，见表1。

表1 各组Th17细胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表达量对比（±s，%）

表1 各组Th17细胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表达量对比（±s，%）

CD4+Thl7 CXCR3 CCR6 CCR4 CXCR3 CCR6 CCR4对照组（n=86） 31.29±5.72 3.45±0.52 7.12±0.88 21.28±3.58 4.10±0.55 5.28±0.67重度（n=18） 63.28±7.37 10.29±1.53 18.40±2.35 52.37±6.08 19.27±2.52 26.48±3.28中度（n=30） 58.30±7.11 7.10±0.82 13.28±1.42 35.47±4.61 11.26±1.73 15.33±1.90轻度（n=40） 40.23±5.31 5.12±0.58 9.27±0.84 28.37±3.45 6.48±0.75 9.75±0.82 F 9.298 8.390 7.726 10.385 8.265 9.340 P 0.012 0.0013 0.025 0.013 0.020 0.014组别 CD8+Thl7

2.2 各组肝功能对比

经检验，慢性乙型肝炎患者Alb、TBIL、ALT均高于对照组，Glo低于对照组，差异显著，P＜0.05；慢性乙型肝炎患者病情越严重，Glo水平越低，Alb、TBIL、ALT水平越高，差异明显，见表2。

表2 各组肝功能指标对比（±s）

表2 各组肝功能指标对比（±s）

组别 Glo（g/L）Alb（g/L）TBIL（μmol/L）ALT（IU/L）对照组（n=86） 35.22±4.93 6.48±0.84 19.28±3.27 15.96±2.07重度（n=18） 3.40±0.91 54.29±7.10 118.47±15.46398.56±49.62中度（n=30） 18.22±2.10 32.49±4.36 83.27±9.41 109.65±18.96轻度（n=40） 25.37±3.47 13.28±1.74 41.29±5.32 49.26±6.15 F 8.326 7.368 9.370 13.625 P 0.015 0.018 0.012 0.010

2.3 各组血清纤维化指标对比

经检验，慢性乙型肝炎患者PCⅢ、IVc、LN、HA均高于对照组，差异显著，P＜0.05；慢性乙型肝炎患者病情越严重，PCⅢ、IVc、LN、HA水平越高，差异明显，见表3。

表3 各组血清纤维化指标对比（±s，ng/ml）

表3 各组血清纤维化指标对比（±s，ng/ml）

组别 PCⅢ IVc LN HA对照组（n=86） 6.19±0.92 15.29±2.65 17.19±3.08 19.29±3.52重度（n=18） 153.69±32.4213.56±30.25183.68±30.42154.89±28.62中度（n=30） 58.36±7.20 76.98±9.56 92.40±12.36 79.56±10.25轻度（n=40） 14.62±2.12 28.56±4.09 31.58±4.82 38.02±5.11 F 9.625 12.658 11.295 9.6258 P 0.013 0.001 0.015 0.012

2.4 Thl7细胞表面趋化因子受体表达量和患者病情之间的相关性分析

相关分析结果显示，Th17细胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表达量和Gl之间存在负相关性，和Alb、TBIL、ALT、PCⅢ、IVc、LN、HA之间存在正相关性，P＜0.05。

3.讨论

临床上，乙肝病毒在肝细胞破坏过程中不发挥作用，属于非细胞毒性病毒的一种，但是在肝细胞免疫病理损伤中则具有十分重要的作用。肝组织中处于激活状态的淋巴细胞可以对特定受体分子进行表达，并向靶器官进行迁移，促使炎症反应与免疫应答出现。研究显示，慢性乙型肝炎患者肝组织和外周血中的Th17表达水平会呈现显著升高现象，这可能是受到肝损伤的影响。Thl7细胞产生的三种趋化因子受体包括CXCR3、CCR6、CCR4，受体上G蛋白与趋化因子会在炎症过程中偶联，进而导致炎症细胞活化与迁移，释放胞内钙离子，激活蛋白激酶c。为了将慢性乙型肝炎患者中Thl7细胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表达情况具体明确，本研究对健康者和不同病情严重程度的慢性乙肝患者进行了分析，结果显示，慢性乙型肝炎患者病情越严重，外周血Th17细胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表达量越高，可知Thl7细胞表面趋化因子受体的高表达现象确实存在于慢性乙型肝炎患者中，并且趋化因子受体表达量会随着患者病情加重而增加，提示慢性乙肝病情加重的内在原因为趋化因子受体表达增加。其次，Th17细胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表达量和Glo之间存在负相关性，和Alb、TBIL、ALT、PCⅢ、IVc、LN、HA之间存在正相关性，提示Thl7细胞表面趋化因子受体表达量增加会对慢性乙肝患者病情进展产生直接影响，炎症相关趋化因子增加会进一步提高趋化因子受体表达量，最终形成一种恶性循环。

综上所述，Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达量检测在慢性乙型肝炎患者病情评估的应用价值显著，可推广。