厚朴对胃肠动力障碍作用的研究

巢蕾　曹雨诞　陈佩东

[摘要] 目的 研究厚樸以及厚朴酚促进小鼠胃肠动力的作用机制。 方法 将304只雄性ICR小鼠按体重随机分为厚朴提取物低、中、高剂量组（1、2、4 g/kg），厚朴酚低、中、高剂量组（40、80、160 mg/kg），阳性对照组（盐酸依托比利50 mg/kg）及空白对照组，每组8只。分别测定正常小鼠小肠推进率、采用阿托品（1 mg/kg）及昂丹司琼（1.6 mg/kg）造模后小鼠胃排空和小肠推进率，应用多通道生理仪测定小鼠电生理波形。 结果 与空白对照组比较，厚朴提取物中、高剂量组与厚朴酚中、高剂量组均可显著提高正常小鼠小肠推进率（P < 0.05）。与阿托品模型组比较，厚朴提取物中、高剂量组和厚朴酚低、中、高剂量组小鼠胃排空率均显著上升，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。与阿托品模型组比较，厚朴提取物高剂量组和厚朴酚高剂量组小肠推进率均显著上升，差异有统计学意义（P < 0.05）。与昂丹司琼模型组比较，厚朴酚高剂量组胃排空率、小肠推进率显著升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 厚朴提取物及厚朴酚可提高小鼠胃排空率及小肠推进率，其对胃肠动力的促进作用可能与5羟色胺（5-HT3）受体和M胆碱受体相关。

[关键词] 厚朴；胃动力；小肠推动力；厚朴酚

[中图分类号] R57 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）05（a）-0031-04

Study on the effect of Magnoliae Officinalis Cortex on gastrointestinal motility disorders

CHAO Lei1 CAO Yudan2 CHEN Peidong2 ZHANG Li2

1.Department of Pharmacy， Jiangsu Hospital of Traditional Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210029， China； 2.College of Pharmacy， Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210046， China

[Abstract] Objective To investigate the mechanism of Magnoliae Officinalis Cortex on promoting gastrointestinal motility of mice. Methods Three hundred and four male ICR mice were randomly divided into low， medium， high dose of Magnoliae Officinalis Cortex extract groups （1， 2， 4 g/kg）， low， medium， high dose of magnolol groups （40， 80， 160 mg/kg）， positive control group （Etobil Hydrochloride， 50 mg/kg） and blank control group according to the body weight， with 8 mice in each group. The intestinal propulsive rate of normal mice， and the gastric empty and intestinal propulsive rate of Atropine （1 mg/kg） and Ondansetron （1.6 mg/kg） induced mice were measured respectively. The multi-channel physiological instrument was used to detect the muscle electrophysiological waveform. Results Compared with blank control group， the intestinal propulsive rates of normal mice in medium， high dose of Magnoliae Officinalis Cortex extract groups and medium， high dose of magnolol groups were significantly improved （P < 0.05）. Compared with Atropine model group， the gastric emptying rates in medium， high dose of Magnoliae Officinalis Cortex extract groups and low， medium， high dose of magnolol groups were significantly improved （P < 0.05 or P < 0.01）. Compared with Atropine model group， the intestinal propulsive rates in high dose of Magnoliae Officinalis Cortex extract group and high dose of magnolol group were improved， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Compared with Ondansetron model group， the gastric emptying rate and intestinal propulsive rate in high dose of magnolol group were improved， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion Magnoliae Officinalis Cortex extract and magnolol can improve the gastric emptying rate and intestinal propulsive rate of mice， the positive effect for gastrointestinal motility may be connected with 5-HT3 receptor and M acetylcholine receptor.

[Key words] Magnoliae Officinalis Cortex； Gastric motility； Small intestinal propulsion； Magnolol

厚朴为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹叶厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮[1]，主要化學成分为新木脂素类[2-3]、苷类[4]和生物碱类[5]。厚朴主要的功效为消胀除满、化导消积[6]，为通降胃气之要药[7]。此外，厚朴还具有抗氧化[8]、抗抑郁等作用[9]。厚朴对胃肠动力障碍患者具有确切的疗效。厚朴排气合剂对术后患者具有明显的改善胃肠动力的作用[10]，厚朴提取物可提高胃排空率并且促进小肠推进率，对血清中D-木糖、胃动素、胃泌素等水平有调节作用[11]，而厚朴中的主要成分厚朴酚对胃排空率及小肠推进率均有促进作用[12]。尽管厚朴及含有厚朴的复方对胃肠动力障碍的作用研究有一定进展，但是其作用机制并不明确。在前期的工作中我们对厚朴的炮制工艺及化学成分进行了研究[13]，本研究应用M胆碱受体拮抗药阿托品和5羟色胺（5-HT3）受体拮抗剂昂丹司琼复制了小鼠胃肠动力障碍模型，对厚朴提取物和其中主要成分厚朴酚促进小鼠胃肠动力的作用进行了研究。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 试药和仪器 厚朴购自安徽省六安市霍山县（No.20160417），由南京中医药大学中药鉴定教研室刘圣金副教授鉴定为厚朴（Magnolia officinalis Rehd. et Wils.）；厚朴酚对照品（批号：20131104）购自江苏省药检所；硫酸阿托品注射液（批号：W140103）购自上海禾丰制药有限公司；盐酸昂丹司琼（批号：140906）、伊文思蓝（批号：201406）、可溶性淀粉（批号：201406）购自上海思域化工科技有限公司；盐酸依托比利片购自日本Abbott制药有限公司（批号：911-8555）。ALCB10-MPA2000型多道生理仪（上海奥尔科特生物科技有限公司）；TGL-16C型高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；UV-1600型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）。

1.1.2 实验动物 雄性清洁级ICR小鼠（18～22 g），鼠龄4～5周，购自上海杰思捷实验动物有限公司，动物许可证号SCXK（沪）2013-0006。20～24℃恒温饲养，相对湿度40%～70%，昼夜明暗交替时间为12 h。

1.2 厚朴样品的制备

取20年树龄厚朴100 g，去粗皮，粉碎，以1000 mL 95%乙醇提取2次，合并滤液，减压浓缩，加0.1 g吐温80，用0.5%羧甲基纤维素钠分别配制成厚朴提取物低剂量组、中剂量组和高剂量组（含生药量分别为1、2、4 g/kg）。

1.3 实验动物分组与给药

1.3.1 正常小鼠小肠推进研究 将64只小鼠按体重随机分为空白对照组，阳性对照组（盐酸依托比利50 mg/kg），厚朴提取物低、中、高剂量组（1、2、4 g/kg）和厚朴酚低、中、高剂量组（40、80、160 mg/kg），每组8只。禁食16 h后，各组小鼠灌胃给予相应的药物溶液20 mL/kg，空白对照组给予等容积的羧甲基纤维素钠。10 min后灌胃给予活性炭混合物0.01 mL/g，20 min后处死小鼠，测定小鼠小肠推进率。

1.3.2 阿托品造模小鼠胃排空和小肠推进率研究 将144只小鼠按体重随机分为空白对照组，阳性对照组（盐酸依托比利50 mg/kg），阿托品模型组（1 mg/kg），厚朴提取物低、中、高剂量组（1、2、4 g/kg）和厚朴酚低、中、高剂量组（40、80、160 mg/kg），每组8只。禁食16 h后，除空白组外其余各组皮下注射阿托品，20 min后各组小鼠灌胃给予相应的药物溶液20 mL/kg，空白对照组给予等容积的羧甲基纤维素钠。给药后20 min灌胃给药伊文斯兰0.2 mL，20 min后处死小鼠，分别测定小鼠胃排空率和小肠推进率。

1.3.3 昂丹司琼造模小鼠胃排空和小肠推进率研究 将96只小鼠按体重随机分为空白对照组，阳性对照组（盐酸依托比利50 mg/kg），昂丹司琼模型组（1.6 mg/kg），厚朴酚低、中、高剂量组（40、80、160 mg/kg），每组8只。禁食16 h后，除空白组外其余各组腹腔注射昂丹司琼，20 min后各组小鼠灌胃给予相应的药物溶液20 mL/kg，空白对照组给予等容积的羧甲基纤维素钠。给药后20 min灌胃给药伊文斯兰0.2 mL，20 min后处死小鼠，分别测定小鼠胃排空率和小肠推进率。

1.3.4 活性炭混合物配制方法 活性炭0.5 g、可溶性淀粉0.5 g、玉米淀粉1.5 g、玉米油（金龙鱼）1 g、脱脂奶粉（伊利）0.5 g，加水至10 mL。

1.3.5 小肠推进率和胃排空率测定 A为活性炭从幽门到小肠中的距离，B为小肠的长度，A/B×100%即为小肠推进率。胃排空率测定：灌胃给药20 min后，立即摘下胃部，胃上下两端均用医用缝合线结扎，然后将胃剪下放入7 mL pH为7.4的PBS液中，剪碎后离心10 min，转速15 000 r/min，离心半径8.1 cm。取上清液5 mL，于570 nm下检测。胃排空率=（A-B）/A×100%，其中A为加入含伊文斯兰的混合食物后立即处死小鼠胃中伊文思蓝的吸光度，B为20 min后小鼠胃中伊文思蓝的吸光度。

1.4 多道生理仪测定

小鼠小肠电生理波形图。小鼠处死后，取小肠靠近盲肠部分，放在台式液中，剪成1 cm长小段共4段，多道生理仪上测试。

1.5 统计学方法

采用SPSS 16.0软件，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正常小鼠小肠推进实验

与空白对照组比较，阳性对照组可显著提高正常小鼠小肠推进率，差异有高度统计学意义（P < 0.01），厚朴提取物中、高剂量组与厚朴酚中、高剂量组均可提高小鼠小肠推进率（P < 0.05）。而厚朴提取物低剂量组、厚朴酚低剂量组与空白对照组比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 阿托品造模测定厚朴提取物及厚朴酚对小鼠胃排空率和小肠推进率的影响

与空白对照组比较，阿托品模型组胃排空率、小肠推进率显著降低（P < 0.01）。与阿托品模型组比较，厚朴提取物中、高剂量组和厚朴酚低、中、高剂量组小鼠胃排空率均显著上升，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。与阿托品模型组比较，厚朴提取物高剂量组和厚朴酚高剂量组小肠推进率均显著上升，差异有统计学意义（P < 0.05），而厚朴提取物低、中剂量组和厚朴酚低、中剂量组均无明显变化，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.3 昂丹司琼造模测定厚朴酚对小鼠胃排空和小肠推进率的影响

与空白对照组比较，昂丹司琼模型组小鼠胃排空率、小肠推进率显著降低，差异有统计学意义（P < 0.05、P < 0.01）。与昂丹司琼模型组比较，阳性对照组、厚朴酚高剂量组胃排空率、小肠推进率显著升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表3。

2.4 多道生理仪测定小鼠小肠电生理实验

取各组小鼠小肠片段，采用多通道生理仪比较小鼠小肠电生理波形图，见图1。从图中可见，正常小鼠（图1A）在单位时间内（18.87 s）出现9个波峰。阿托品造模后，阳性对照组（图1B）出现9个完整波峰，而阿托品模型组（图1C）出现6个完整的波峰，厚朴提取物高剂量组为8个完整波峰（图1D）。昂丹司琼模型组出现7个完整的波峰（图1E）。昂丹司琼造模后，厚朴酚高剂量组出现9个完整的波峰（图1F）。

3 讨论

厚朴作为通降胃气之要药[14]，临床中常用于治疗各种原因引起的胃肠蠕动功能障碍疾病[15-16]。有研究表明厚朴中的化学成分对5-HT等单胺类神经递质有调节作用[17-18]，其中厚朴酚通过对大鼠脑中5-HT的调节对抑郁症有抑制作用[19]。而昂丹司琼通过竞争5-HT3受体，可以抑制胃、肠平滑肌的收縮，在胃肠动力障碍作用研究中是一个重要的造模药物[20]，所以我们选择了昂丹司琼造模方法验证厚朴中的主要成分厚朴酚促进胃肠动力作用。盐酸依托比利是一种胃肠动力药物，其作用机制主要是一方面阻断多巴胺D2受体及抑制乙酰胆碱酯酶活性，是研究肠胃动力的常用阳性对照药物。

本研究结果表明，厚朴提取物及其主要成分厚朴酚的中、高剂量组对正常小鼠小肠的推进率有促进作用，提示厚朴酚可能为厚朴中促进胃肠动力的成分之一。在阿托品造模小鼠中，厚朴提取物及厚朴酚对小鼠胃排空率的促进作用显著，特别是厚朴酚低剂量组即表现出促进胃排空的作用。而在促进小肠推进率实验中，只有厚朴酚高剂量组才表现出显著作用。以上实验结果提示，厚朴提取物和厚朴酚在由M胆碱受体抑制导致的胃肠动力障碍中，对胃排空率的促进作用更强。在昂丹司琼造模小鼠中，厚朴酚高剂量组表现出促进胃排空率及小肠推进率作用，提示厚朴酚对5-HT受体抑制引起的胃肠动力障碍具有一定的促进作用。小鼠小肠电生理实验结果表明，厚朴提取物及厚朴酚高剂量组对阿托品和昂丹司琼导致的小肠蠕动频率下降均有改善作用。

胃肠动力障碍是临床常见病，厚朴在临床中常用于消胀除满。本研究结果提示，厚朴消胀除满的作用不仅与兴奋M胆碱受体有关，而且可对5-HT3受体产生一定的调节作用，增强胃肠平滑肌的收缩性。

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（收稿日期：2017-12-04 本文编辑：张瑜杰）