两种染色方法在甲状腺穿刺细胞涂片的观察比较

邱立 温寿青 高亮 赖吉林

【摘要】 目的：探讨苏木素单染色法在甲状腺细针穿刺细胞涂片的应用效果。方法：回顾性分析2016年1月-2017年12月本院206例甲状腺乳头状癌患者术前用两种染色制作的细针穿刺细胞图片，分析细胞学特征及诊断结果。结果：与常规HE染色涂片比较，苏木素单染色涂片细胞背景干净，细胞核形态显示得更加清晰。苏木素单染色涂片和常规HE染色涂片穿刺细胞学诊断的阳性符合率分别为96.8%、93.8%。结论：观察甲状腺穿刺细胞涂片时苏木素单染色效果优于常规HE染色，有利于诊断。

【关键词】 苏木素单染色； 常规HE染色； 细针穿刺细胞学

【Abstract】 Objective：To investigate the application effect of hematoxylin single staining in fine needle aspiration cell smears of thyroid.Method：The fine needle aspiration cell images of 206 patients with papillary thyroid carcinoma from January 2016 to December 2017 were analyzed retrospectively. The cytological features and diagnostic results were analyzed.Result：Compared with conventional HE staining smears，the background of smears by hematoxylin single staining were clean and the nucleus characteristics were more clear.The positive coincidence rates of hematoxylin single staining and conventional HE staining in FNAC diagnostic were 96.8% and 93.8%.Conclusion：The effect of hematoxylin single staining on thyroid puncture cell smears is better than that by conventional HE staining，which is helpful for diagnosis.

【Key words】 Hematoxylin single staining； Conventional HE staining； Fine needle aspiration cytology

First-authors address：Baoan District Peoples Hospital of Shenzhen， Shenzhen 518101，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.15.038

B超引導下甲状腺细针穿刺涂片细胞学（fine needle aspiration cytology，FNAC）检查因其具有损伤性小、敏感性高的优点[1-2]，近年来在临床得到广泛开展，已经成为术前筛查甲状腺恶性肿瘤——特别是甲状腺乳头状癌的重要检查手段[3-4]。目前常规每例甲状腺穿刺需要涂3～10张片，随着临床送检标本量的不断增加，细胞病理诊断医师的阅片工作量也不断增加。如何减轻阅片的压力，提高检查的效率以及诊断的准确性是值得探讨的问题。本研究通过苏木素单染色法和目前在甲状腺穿刺细胞涂片较常用的染色法——苏木素-伊红（hematoxylin-eosin，HE）制作出的涂片效果比较，探讨苏木素单染色法对显微镜下观察甲状腺乳头状癌细胞形态的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2016年1月-2017年12月本院行甲状腺细针穿刺细胞学检查的患者206例的资料。纳入标准：术后活检均诊断为甲状腺乳头状癌。其中94例涂片采用苏木素单染色，112例涂片采用常规HE染色。男79例，女127例，年龄20～47岁，平均（33.0±0.5）岁。所有患者均因彩超检查提示甲状腺结节，后由外科医生在B超引导下行甲状腺细针穿刺术，多次负压吸取细胞液涂片后送病理科进一步制片诊断。

1.2 涂片制备 将细针穿刺吸取的液体立即均匀涂抹在载玻片上，用注射器吸取过多的血液，每例涂3～8张片，立即放入95%乙醇溶液中固定15 min。

1.3 常规HE染色 固定后的涂片流水洗2 min，蒸馏水洗1 min，浸入苏木素染液10 min，水洗2 min，0.5%盐酸酒精分化2 s，水洗2 min后浸入1%碳酸锂溶液返蓝1 min，水洗后浸入伊红染液10 s，水洗后梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.4 苏木素单染色 固定后的涂片流水洗涤2 min，蒸馏水洗涤1 min，浸入苏木素染液10 min，水洗2 min，0.5%盐酸酒精分化2 s，水洗2 min后浸入1%碳酸锂溶液返蓝1 min，水洗后直接梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片[5]。苏木素及伊红染液购自福州迈新试剂公司。

1.5 细胞学观察及诊断 在显微镜下仔细观察比较两种不同染色方法制作的涂片效果，特别是两种染色法对显示肿瘤细胞形态的比较以及对细胞学诊断结果的影响。按照甲状腺细胞病理学Bethesda报告系统分六类进行诊断[6-7]。统计比较两种染色法涂片所发出的细胞学诊断与术后组织学诊断的阳性符合率。阳性符合率=阳性细胞学确诊例数/术后组织学确诊例数×100%。

2 结果

2.1 常规HE染色涂片效果 显微镜下观察，涂片中肿瘤细胞的胞浆、纤维细胞胞浆、背景的红细胞及胶质染成不同程度的红色，肿瘤细胞核染成浅蓝-深蓝色。但由于细胞质、红细胞及胶质等背景染色的干扰，相对减弱了细胞核染色在其中的显著程度，导致一些肿瘤细胞核特征性形态的视觉清晰度有不同程度的降低，见图1。

2.2 苏木素单染色法涂片效果 显微镜下观察，涂片中所有上皮、纤维及炎症细胞的细胞浆，背景的红细胞以及胶质基本呈无色或仅仅看到模糊的轮廓。上色的只有细胞核，呈浅蓝-深蓝色。在基本无视觉干扰的背景下，肿瘤细胞核轮廓显示的突出显著，核染色质也观察地更加清晰，一些具有诊断价值的甲状腺乳头状癌细胞学特征性——特别是核沟、核内包涵体更容易寻找和辨认，见图2。

2.3 两种染色涂片细胞学诊断统计比较 206例术前甲状腺细针穿刺细胞涂片标本，涂片质量合格。穿刺细胞学诊断后，所有患者均行甲状腺部分切除手术，术后病理活檢均诊断为甲状腺乳头状癌。整理分析两种染色涂片细胞学诊断情况，见表1。统计得出苏木素单染色涂片和常规HE染色涂片穿刺细胞学诊断的阳性符合率分别为96.8%、93.8%，而“可疑恶性肿瘤”诊断在苏木素单染涂片和常规HE染色涂片细胞学诊断中的比例分别为2.1%和4.5%。

3 讨论

流行病学调查显示，近年来甲状腺乳头状癌在我国的发病率有不断上升的趋势[8-10]。分析其原因，各种更加先进有效的检查手段逐渐在临床广泛应用，导致越来越多早期或微小甲状腺乳头状癌被发现，这是导致发病率上升的一个重要因素[11-12]。B超引导下甲状腺细针穿刺细胞学检查因其具有低风险性、高敏感性和高特异性，近年来在我国已成为术前筛查甲状腺恶性肿瘤——特别是甲状腺乳头状癌最有效的手段[13-14]。随着这项检查在临床的广泛开展，标本送检量也逐年显著上升。再加上每例甲状腺细针穿刺细胞涂片少则3张，多则十几张，这样就明显加大了诊断医生的工作量。如何在一定程度上减轻医生在工作量上的压力，让诊断医生在切片上更容易寻找和辨认出肿瘤细胞，能更清晰、更容易得观察到细胞形态特征，是值得探讨的问题。

甲状腺乳头状癌细胞学诊断有一定的自身特点，即基本上所有具有诊断价值的肿瘤细胞学特征大部分都体现在细胞核上[15]，包括核的排列分布特点（如分支真性乳头结构、指状突乳头样结构、洋葱皮样乳头状结构、单层细胞片块状结构、核拥挤重叠等）以及核形态特点（核增大、毛玻璃样核、瓜子或梭形核、核沟、核内假包涵体等）[16-17]。因此如何让涂片上细胞核特征更加突出、醒目是制片需要考虑的首要问题。本研究通过苏木素单染色法与常规HE染色涂片效果的比较，发现苏木素单染色法制做出的甲状腺细针穿刺细胞涂片在镜下观察的效果与常规HE染色涂片效果相对比是存在明显差异的。总结起来，苏木素单染色法主要有以下两个优点：（1）苏木素单染色与常规HE染色涂片效果最显著的区别在于前者显微镜下观察的颜色比较单纯，没有后者色彩那么复杂。一般在甲状腺细针穿刺涂片上除了需要重点观察的滤泡上皮细胞外，整个涂片背景里还常常会有不定量的红细胞、纤维细胞、炎症细胞、胶质等，这些成分在常常会同滤泡上皮细胞混杂在一起，以致干扰影响诊断。而苏木素单染色法仅仅将细胞核染成蓝色，而这些干扰成分的细胞浆基本都不上色，因此涂片背景相对干净单纯许多，这样深蓝色的细胞核在基本无色的背景下因为对比度鲜明，显得更为突出醒目，易于在镜下寻找和观察肿瘤细胞。（2）苏木素单染法制片步骤较常规HE染色简单，省去了伊红染色等相关试剂的后续处理，细胞受到物理化学因素的影响相对较少，因此肿瘤细胞核的镜下形态能相对保持得更加新鲜完整[18]，特别是核沟、核内假包涵体、核皱褶以及核染色质浅染等细微形态学特征能更清晰得显示出来，有利于镜下的观察和辨认。苏木素单染法制作的涂片因为主要染细胞核，故有时候会对判断肿瘤细胞的核浆比造成一定困难。但其实仔细观察，大部分的肿瘤细胞还是可以看到浅淡的细胞膜轮廓，对判断核浆比没有明显的影响。另一方面也可以通过与周边正常滤泡上皮细胞或淋巴细胞的核做对比，判断所要观察的细胞核是否增大[19]。

本研究结果亦显示苏木素单染色涂片细胞学诊断的阳性符合率略高于常规HE染色涂片诊断的阳性符合率，而在诊断“可疑恶性肿瘤”的比例上前者较后者也有所降低。分析病理医师做出“可疑恶性肿瘤”诊断的原因，常常是因为在细胞学上甲状腺乳头状癌细胞的一系列核特征性改变在镜下显示得不够全面，往往只能观察辨认出3～4条核的特征性改变，不足以直接诊断为“恶性肿瘤”[20]。这也从一方面证明苏木素单染法在显示核的特征方面是有其独特优势的，有助于减轻细胞诊断医师的阅片视觉压力，更容易观察和辨认肿瘤细胞，因此也有利于做出更准确的诊断，是值得推荐的一种甲状腺细针穿刺细胞涂片的染色方法。

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