药敏试验在治疗发情期蓝狐阴道细菌性疾病的应用

郝芯缈段亚南魏来李杰李彦东刘志平

(1.东北林业大学野生动物资源学院，哈尔滨，150040；2.哈尔滨华隆蓝狐育种有限公司，哈尔滨，150129；3.陕西佛坪国家级自然保护区管理局，佛坪，723400；4.东北林业大学医院，哈尔滨，150040)

蓝狐(Alopexlagopus)发情期阴道细菌感染为养狐场常见疾病，多表现为外阴可见脓状分泌物。其预防与治疗多凭经验使用抗生素，因没有针对性，同时长期、滥用抗菌药物宜造成细菌对许多药物产生耐药性，所以效果往往不佳。绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌及阴道加德纳氏菌等均可引起蓝狐繁殖障碍，且往往一种细菌感染后，造成机体免疫力降低，从而促使其他细菌继发感染，表现出复杂的临床症状，带来严重的危害和损失[1]。

常规诊断、治疗多采用分离致病菌后再做药敏试验的方法，如此耗时较长，往往耽误治疗。本次研究旨在应用快速药敏试验减少细菌耐药性分析所需的时间，准确筛选出有针对性的药物，为蓝狐阴道细菌性疾病的早期治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料

试验用蓝狐阴道分泌物20份，分别来自哈尔滨市某养狐场20只母狐，于2017年4月5～7日无菌采集。20份样本颜色不一，包括绿色、红色、黄色及白色，形态有脓状、胶冻状。对样本分别编号，装入EP管，置于-20℃冰箱内冷冻保存。

1.1.2 药敏纸片

共12种，包括氨苄西林、青霉素、亚胺培南、头孢他啶、头孢西丁、氯霉素、四环素、氧氟沙星、头孢呋辛、阿奇霉素、恩诺沙星、多粘菌素B。均购自北京奥博星生物技术有限责任公司。

1.1.3 培养基、试剂

普通营养琼脂培养基购自青岛海博生物科技有限公司、生理盐水由实验室自行配制。

1.2 方法

药敏试验采用纸片扩散法[2]。在20份样品中分别加入少量灭菌生理盐水充分稀释，各取5 μL稀释液到新的EP管中，混匀后取50 μL均匀涂布于直径90 mm的普通营养琼脂培养基上，待自然干燥后，用无菌镊子将各药敏纸片贴在培养基表面，每个平板均匀分布贴6张，置37℃恒温培养24 h后，分别测定各抑菌圈直径，以抑菌圈直径的大小判定细菌对药物的敏感度。

2 结果

2.1 药敏试验结果

所检测的12种抗生素中，细菌对亚胺培南敏感性最高，无耐药菌株产生，抑菌圈直径为26 mm；对头孢西丁和头孢呋辛有一定敏感性，抑菌圈直径分别为8 mm和12 mm；对氨苄西林、青霉素、头孢他啶、氯霉素、四环素、氧氟沙星、阿奇霉素、恩诺沙星和多粘菌素B具有较强的耐药性，耐药率为100%，表现为0抑菌圈(表1)。

表1 药敏试验结果

Tab.1 Results of antibiotics susceptibility test

2.2 治疗结果

根据药敏试验结果，使用敏感性最高的药物亚胺培南对20只阴道分泌物异常的母狐进行治疗，1 g/只·d，静脉滴注。1周后，20只母狐阴道分泌物均明显减少或消失，且再无症状出现(图1～4)。

图1 治疗前Fig.1 Before the treatment

图2 治疗前Fig.2 Before the treatment

图3 治疗后Fig.3 After the treatment

图4 治疗后Fig.4 After the treatment

3 讨论

随着蓝狐规模化养殖业的不断扩大和人工授精技术的广泛应用，母狐发情期生殖系统细菌性疾病频频发生，现已成为影响母狐繁殖率的重要因素。Gierloff 和Lefmann在1976年首次报道丹麦养狐场发生的绿脓杆菌引起母狐化脓性子宫内膜炎[3]。高玉兰等[4]、尹燕博等[5]、苏振渝等[6]也相继证实了母狐人工授精的二次污染可引起绿脓杆菌感染。1987年，严忠诚等[7]从我国进口狐的流产胎儿及其流产狐的阴道分泌物中分离到阴道加德纳氏菌共145株，感染率0.9%～21.9%。于国内外首次揭示，该菌是引起母狐空怀和流产的重要原因之一。除此之外，大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌和葡萄球菌等均可引起母狐发生空怀、死胎和流产。以上多种细菌性疾病的发生日益频繁、越来越普遍，尤其是以绿脓杆菌感染为主的混合感染，已成为影响蓝狐养殖疫病的主要原因之一，严重地威胁到蓝狐养殖业的持续发展。

近年来，大量研究报道表明，随着多重耐药菌在世界范围内的散播，细菌耐药日趋严重，准确且快速的抗菌药物敏感性试验结果对于指导治疗临床各种类型细菌感染显得更加重要[8]。常规方法需将病料接种于培养基分离培养后进行药敏试验，而本研究所采用的直接药敏试验省去繁琐的步骤，方便易操作，临床适用性强，可提前2 d报告结果。通过亚胺培南的临床应用，表现出较好的治疗效果，有效地控制了疫情的发生。当母狐阴道分泌物异常或增多时，通过该方法一次性筛选出对混合细菌都敏感的两种或两种以上的药物，为临床治疗提供有效的依据，对及早制定正确的治疗方案具有重要意义。