复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠神经缺损行为及糖脂代谢的干预作用*

沈俊逸，赵智明，刘春丽，壮雨雯，徐文俊，蔡 辉

南京军区南京总医院中西医结合科，江苏 南京 210002

脑梗死是目前继癌症和心血管疾病之后危害人类生命健康的第三大疾病。每年全球约有1 500万人发病，死亡率高达17%～35%，而存活下来的患者中3%～6%遗留残疾［1-3］。糖尿病致代谢紊乱是引发脑梗死的一个独立危险因素［4-7］。正常机体如果长期处在高血糖环境中脂类的代谢过程会发生紊乱、异常，进而引起蛋白质过度糖基化。而蛋白质的过度糖基化会使蛋白质的结构、溶解性、配位结合等理化性质发生改变。这些过度糖基化的蛋白终产物不能在体内有效代谢降解，沉积于血管内壁，久之，加速了血管病变［8-11］。中药复元醒脑汤在治疗糖尿病脑梗死中显示出了良好的治疗效果，本研究通过糖尿病脑梗死大鼠模型观察复元醒脑汤对其血糖、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的调节作用以及对神经缺损行为的影响，现报道如下：

1 材料与方法

1.1动物与试剂健康雄性SD大鼠150只，体质量(250±25)g，购自上海杰思捷实验动物有限公司，动物合格证：SCXK(沪)2011-009；2，3，5- 氯化三苯基四氮唑(TTC)购于正大青春宝药业；水合氯醛购于上海国药集团化学试剂公司；链脲佐菌素(STZ)购于美国Sigma公司。

1.2动物分组将实验大鼠按随机数字表法随机均分为正常组、假手术组、模型组、西药治疗组、中药治疗组，每组30只。

1.3模型制备腹腔注射STZ 50 mg/kg后采用高能量高脂肪食物饲养2周复制糖尿病大鼠模型。

1.4脑梗死模型制备在STZ致糖尿病模型的基础上，采用线栓法制备糖尿病脑梗死动物模型［11］。

1.5灌胃给药中药治疗组大鼠灌胃复元醒脑汤［人参(单煎)10 g，三七 10 g，石菖蒲 12 g，水蛭10 g，益母草 30 g，生南星 15 g，制大黄(后下)9 g，浓度 388 g/L］10.4 g/kg(体质量)/d，2 次 /d，连续14天。西药治疗组灌胃二甲双胍(君力达制药有限公司，批号：H20058567，规格：0.5g×12 粒×4板)27 mg/kg(体质量)，2 次 /d；尼莫地平(中美上海施贵宝制药有限公司，批号：11080056，规格：20mg×12片×2板)2.16 mg/kg(体质量)，2次 /d，连续 14天。模型组、假手术组灌胃等容量生理盐水。

1.6血糖、胆固醇和甘油三酯检测注射STZ 1周后大鼠尾静脉采血测血糖值。脑梗死造模前后测定各组大鼠血脂水平，应用氧化酶法测定大鼠血清总胆固醇浓度；使用甘油磷酸氧化酶法测定大鼠血清中TG的浓度。

1.7神经缺损行为体征评价造模成功后大鼠完全清醒，术后3小时及7天根据Bederson神经缺损行为体征评分法对大鼠神经缺损行为体征进行综合等级评分。将大鼠提尾悬空1米，观察前肢屈曲情况，具体评分标准0级(0分)：无明显神经缺损症状；Ⅰ级(1分)：实验动物脑梗死对侧前肢回收屈曲内收，同时实验动物同侧前肢向地面伸展；Ⅱ级(2分)：实验动物Ⅰ级体征+实验动物俯卧于桌面时，从脑梗死侧向对侧推动大鼠时阻力降低；Ⅲ级(3分)：实验动物Ⅱ级体征+实验大鼠行走时向脑梗死对侧肢体旋转(呈追尾状)，甚至会倾倒。分值大于或等于Ⅰ级时表明实验动物模型制作成功。

1.8统计学方法采用SPSS 16.0分析数据，计量资料以(±s)表示，不同组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较用LSD-t分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1大鼠造模生存例数入组150只大鼠，每组30只，正常组死亡2只。另外120只大鼠在糖尿病造模成功后，在高脂饲料喂养的条件下死亡20只。剩余糖尿病模型大鼠100只分为4组，每组25只。假手术组2只死亡；模型组10只死亡；西药治疗组9只死亡；中药治疗组7只死亡。因此各实验组入组数据例数分别为正常对照组28例，假手术组23例，模型组15例，西药治疗组16例，中药治疗组18例。

2.2复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠血糖水平的影响注射STZ 1周后，各组大鼠空腹血糖高于正常组；手术(线栓)后7天，糖尿病模型(假手术组、模型组、中药治疗组、西药治疗组)与正常组相比，血糖浓度显著升高(P＜0.01)；手术后7天，与模型组相比，中药治疗组和西药治疗组大鼠血糖浓度降低(P＜0.01)，说明西药和中药均有降低糖尿病模型大鼠血糖的作用，见表1。

表1 各组大鼠手术前后血糖变化情况(±s) mmol/L

表1 各组大鼠手术前后血糖变化情况(±s) mmol/L

注：＊＊表示与正常组比较，P＜0.01；##表示与模型组比较，P＜0.01；△表示与术前比较，P＜0.01

组别 只数 术前 术后7天正常组 28 8.03±1.27 7.71±1.20假手术组 23 24.60±4.36 28.29±3.65＊＊△模型组 15 24.26±3.53 32.35±4.12＊＊△西药治疗组 16 26.76±5.08 22.13±3.71##＊＊△中药治疗组 18 24.01±4.87 20.72±3.44##＊＊△

2.3复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠血清TC水平的影响与正常组相比，各组大鼠脑梗死术前血清中TC浓度提升(P＜0.01)。手术后7天假手术组、模型组、西药治疗组大鼠血清TC含量未降低，与模型组相比，中药治疗组TC浓度下降，差异具有统计学意义(P＜0.01)，见表2。

表2 各组大鼠手术前后TC变化情况 mmol/L

2.4复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠血清TG的影响与正常组大鼠相比，各组大鼠脑梗死术前血清TG浓度提升(P＜0.01)。手术后7天假手术组、模型组、西药治疗组大鼠血清中TG未降低，与模型组相比，中药治疗组大鼠血清TG浓度降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，见表3。

表3 各组大鼠手术前后TG变化情况 mmol/L

2.5复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠神经缺损行为的影响造模结束后假手术组和正常组大鼠神经功能缺损评分均为0分；模型组、中药治疗组及西药治疗组均出现不同程度的神经行为学异常，主要表现为右侧霍纳征(上睑下垂，瞳孔散大)和左侧前肢为主的瘫痪，表现为提尾时左侧肢体屈曲内收紧贴胸壁，行走时失去正常的状态，呈现出左侧转圈，或向左侧倾倒等。各组大鼠神经功能缺损评分均高于正常组、假手术组，提示脑梗死模型造模成功；灌胃治疗7天后中药治疗组与西药治疗组大鼠Bederson评分降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，见表 4。

表4 各组大鼠手术后Bederson评分比较 分

3 讨论

糖尿病并发脑梗死以其居高不下的致残率和病死率严重威胁着人类健康。糖尿病会增加脑卒中的风险，糖尿病患者血糖控制受损，脑梗死灶更容易扩大，持续高血糖条件下糖类的有氧代谢过程发生障碍，生成大量有害物质乳酸，造成乳酸性酸中毒，最终诱发正常细胞内的高渗状态，细胞缺氧，从而加剧缺血脑组织损害［12］。Kwon 等［13］报道，相比于糖尿病患者，糖尿病脑卒中患者发病率更高，同时脑卒中会引发认知障碍［14］。丁承宗等［15］通过大量CT分析显示糖尿病引发的脑梗死患者中超过一半伴随多发腔梗灶，并累及大脑中动脉支配区。

清代医家沈金鳌认为“元气虚为中风之根也。”脑梗死的发病主要以元气虚损为本,痰瘀互结及痰热生风为核心病机。痰、瘀为元气虚导致的中间病理产物，贯穿中风始终,痰瘀互阻，生热化风，风火相煽，乃发“风”。据此，本研究以补益元气为主，佐逐瘀化痰、泄热熄风、醒脑开窍之法，自拟复元醒脑汤，方中人参大补元气为君，扶正祛邪，为治本之药；石菖蒲芳香走窜，功擅豁痰辟秽，开窍宁神；胆南星清热化痰之力强，且能熄风定惊，擅祛顽痰、风痰；三七化瘀止血，活血定痛；水蛭为化瘀峻品，消癥破结通经。张锡纯认为本品“破瘀血而不伤新血，专入血分而不损气分”，以上共为臣药。大黄苦降，功专通腑泻下，又具有清热泻火，凉血解毒之功，且有逐瘀通经之功效，与三七通涩并用，活血止血，导湿热、瘀热外出，热毒下泄，使气血调达，经络通畅；益母草为血家圣药，不仅能活血调经，且有利尿消肿，清热解毒之功，尤善解郁平肝，活血祛风，均为佐药。诸药合用，方小力专，共奏“复元醒脑，逐瘀化痰，泄热熄风”之功。

本研究表明复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠的神经缺损有修复作用。很多学者认为血脂的增高是脑梗死的诱发因素，但是血脂异常与脑梗死之间的关系尚未阐明。高TC和TG易诱发动脉粥样硬化。动脉粥样硬化引起血栓形成，进而引起脑梗死。高血脂会引起多种凝血因子升高，增加血小板凝集，当血管内皮细胞受损时会引发血栓形成［16-18］。STZ诱导联合高脂饲料喂养的糖尿病脑梗死大鼠血脂水平较高［19］，降低中药治疗组大鼠血清TG和TC低于模型组，提示复元醒脑汤对血脂有较好的干预作用，与模型组相比复元醒脑汤能够降低糖尿病脑梗死大鼠的血糖水平。