不同剂量促卵泡素对成年和牛超数排卵效果的影响分析

孙凤俊 焦子康 薛建华 宣柏华 张佳谊

1 材料与方法

1.1 供体母牛选择 供体母牛是位于北京市怀柔区的和牛生物科技（北京）有限公司饲养的空怀和牛，年龄为三四岁。

1.2 药品与器械 促卵泡素（FSH）（贝尔尼奇公司FOLLTROPIN-V，400 mg NIH/瓶），黄体酮缓释剂阴道栓CIDR（新西兰DEC国际有限公司，黄体酮1．38 g/支），氯气前列烯醇（齐鲁动物保健品公司，0．322 g/支），黄体酮（P4）注射液（宁波市三生药业有限公司，2 mL∶50 mg/支）；苯甲酸钠雌二醇（EB）注射液（宁波市三生药业有限公司，2 mL∶4 mg/支）；冲卵液自配（含有10%FCS的PBS液），胚胎保存液及冷冻保护液均购自贝尔尼奇公司，采卵管为二路式采卵管（规格为18#）和集卵杯购自富士平公司。

1.3 超排方法与胚胎采集

1.3.1 超排处理方法 供体和牛超数排卵处理与胚胎采集于2017年3-4月在北京市怀柔区和牛生物科技（北京）有限公司和牛养殖场进行。供体牛超数排卵处理采用阴道栓+促卵泡素+PG方法进行。超数排卵具体方法：在发情周期任意一天上午给供体牛放置阴道栓，同时肌肉注射黄体酮注射液（P4）100 mg和苯甲酸钠雌二醇注射液（E2）2 mg，放栓当日为0 d，第5～8 d超排处理按着每天2次递减量肌肉注射Folltropin-V。促卵泡素采用Folltropin-V，连续4 d共8次递减剂量注射方法，每头供体牛超数排卵注射Folltropin-V总剂量分别为200、240、250、260 mg 4个组别[1]。

1.3.2 人工授精 供体牛放栓后第9 d早晚观察发情，站立发情后12 h进行第1次人工授精，精液为和牛常规冷冻精液，间隔12 h进行第2次输精。每次1支冻精，输精部位子宫体。

1.3.3 胚胎采集与质量鉴定 供体牛超排发情后第7 d（发情当天为0 d）采用非手术法采集胚胎。每侧子宫角使用250 mL左右冲卵液回收胚胎，反复冲洗六七次，回收液在集卵杯中，冲胚后，子宫内灌注25～30 mL碘甘油，并肌肉注射2支氯前列烯醇。在实验室内使用体式显微镜进行检胚，并根据形态学鉴定胚胎质量，并将胚胎分为A级、B级、C级、退化胚胎和未受精卵，其中A、B、C级胚胎为可用胚胎，退化胚胎和未受精卵为不可用胚胎。A、B级胚胎具体鉴定标准如下：A级，表示胚胎形态完整、轮廓清晰呈球形、结构紧凑，分裂球大小均匀、色调和透明度适中，无附着的细胞和液泡；B级，表示轮廓清晰、色调和细胞密度良好，可见到少量附着的细胞和液泡。

2 结果与分析

累计处理和牛供体34头，共获得总卵数299枚，头均获得总卵数8．79枚，第1～3组头均获总卵数分别为12．60、9．83、9．11枚，均高于第4组6．79枚，但差异不显著（P＞0．05）；34头供体累计获得可用胚198枚，头均获得可用胚5．82枚，1～3组头均获得可用胚分别为6．00、7．17、5．67枚，均高于第4组5．29枚，但差异不显著（P＞0．05），各组间也没有显著差异。然而，第1组不可用胚（6．60枚/头）和退化胚（6．20枚/头）显著高于其他各组(分别为2．67枚/头和0．67枚 /头，3．44枚 /头和 2．44枚 /头，1．50枚 /头和0．86枚/头)，2～4组各组间差异不显著（P＞0．05）。

3 讨论

供体牛超排时，外源激素FSH剂量和注射时间及方法是直接影响超排效果的重要因素。FSH剂量过大时，供体卵巢反应过度，影响卵母细胞质量，从而降低了超排效果；而FSH剂量过低，又起不到超排作用。

本试验对三四岁成年和牛供体应用Folltropin-V的剂量200～260 mg/头，低于成年荷斯坦牛供体的剂量（400 mg/头），平均可用胚也达到了5．82枚的良好效果。从试验结果可以看出，头均获得可用胚数量第1组260 mg组（6．00枚）、第2组250 mg组（7．17枚）和第3组240 mg组（5．67枚）均高于第4组200 mg组（5．29枚），但各组间差异不显著（P＞0．05）。从可用胚数量看出，随着FSH剂量的降低，超排效果也呈降低趋势。另外，从胚胎质量结果也可以看出，FSH剂量增加，不可用胚和退化胚数量也增多。说明促卵泡素剂量过大，会产生不利效果。因此，超排应根据不同品种牛供体对促卵泡素制剂的敏感性以及供体牛年龄和体质量等因素，确定适宜剂量，从而达到良好的超排效果。本试验超排供体牛数量较少，同时供体牛个体差异较大，因此还需进一步验证。

[1]刘善斋，刘洪渝，涂晓华，等．和牛母牛超数排卵及胚胎移植试验研究效果初报[J]．中国牛业科学，2012（5）：12-14，20．