头孢克肟脂质体的制备工艺研究

陈淑云 邱礼臻 庞国棉 李晓玲 朱岳鑫

（1广东省中医院广州中医药大学第二附属医院大学城药剂科 广东 广州 510006）（2广东药科大学药学院 广东 广州 510006）

头孢克肟（cefixime）是由日本藤泽药品工业株式会社于上世纪80年代初合成开发的β-内酰胺类第三代头孢类广谱抗生素[1-3]，其对淋球菌、链球菌、大肠杆菌、变形杆菌等多种菌属均有较强的杀菌能力，临床上广泛应用于敏感菌引起的多种疾病。目前，头孢克肟的剂型主要有胶囊剂、散剂、颗粒剂、片剂等形式，而头孢克肟易受外界环境（光、水、热等）影响，使其功能官能团发生降解，从而减小其抗菌活性和增加过敏风险，为能使头孢克肟药物剂型能减毒增效，扩大其临床应用范围，本文将对头孢克肟制成脂质体[4-6]，提高其稳定性和生物利用度，以期开发出一种适用于临床的新剂型。

1.试验和设备

1.1 实验试剂

头孢克肟原料药（湖北康宝泰精细化工有限公司提供）；头孢克肟对照品（中国药品生物制品鉴定所）；葡聚糖凝胶G-50(上海伯奥生物科技有限公司)；卵磷脂(国药集团化学试剂有限公司)；胆固醇(国药集团化学试剂有限公司)；胆酸钠(国药集团化学试剂有限公司)；其余试剂均为分析纯，水为双蒸水。

1.2 仪器设备

实验中主要的设备高效液相色谱仪HPLC（1260型，美国Agilent公司）；精密电子天平（JJ224BC型，江苏双杰测试仪器厂）；真空干燥箱（ZK-82A型，上海实验仪器总厂）；电热恒温水浴锅（HH-8A型，北京科伟仪器公司）；PH 计（PHS-3C型，上海仪电科学仪器公司）。WH-2微型漩涡混合仪(上海沪西分析仪器厂)；超声破碎乳化仪；SHZ-Ⅲ型循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂)；HP-01抽滤仪；恒温磁力搅拌器(TH2-82A上海)；PH值测定仪(PB-10)；600三用水箱。

2.实验方法与结果

2.1 头孢克肟含量测定

2.1.1 色谱条件 在全波长下对头孢克肟溶液进行扫描，其在254nm条件下具有最高吸收峰，HPLC所用色谱柱为Kromsail-C18柱（250*4.6mm，5um），流动相选用乙腈-0.2%磷酸二氢钠溶液(20∶80)（稀磷酸调节至4.0），柱温为35℃，进样量为20μL，流速为1.0mL/min。

2.1.2 标准曲线绘制 准确称取头孢克肟对照品10.00mg于20ml容量瓶，用20%乙腈定容至刻度线，摇匀即得浓度为0.5mg/ml的对照品溶液。分别量取对照品溶液母液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml置于10ml容量瓶中，并用20%乙腈稀释至刻度线，摇匀备用。按照‘2.1.1’项下色谱条件进样，记录头孢克肟浓度（X）相应的峰面积（Y），确定标准曲线：Y=2580.6X+202.14(R2=1.0000)，头孢克肟在浓度为50-350mg/L之间线性关系良好。

2.2 头孢克肟脂质体制备工艺

2.2.1 头孢克肟微囊评价指标 头孢克肟脂质体评价指标采用脂质体包封率（EE%）和载药量(LD%)进行综合评价。包封率测定方法采用葡聚糖凝胶层析法分离游离药物和脂质体，通过预实验确定收集含药脂质体洗脱液部位，精密量取4ml于10ml容量瓶中，用乙醇破乳后用20%乙腈定容，摇匀，按“2.1.1项下”进样测定峰面积，按“2.1.2项下”计算相应浓度C1：(ug/mL)。另取制备好的头孢克肟脂质体5.0ml直接用20%乙腈定容至200ml，精密量取4ml于10ml容量中，用乙醇溶液破乳后定容。摇匀，同样测定峰面积A，并计算药物浓度C2：(ug/mL)。包封率EE%=C1/C2：×100%。载药量取样本适量，按上述方法测药物浓度，载药量DL%=WD/WP×100%，其中WD为脂质体包裹的药物量，WP为载体用量。

2.2.2 头孢克肟脂质体制备工艺 定量称取胆固醇、卵磷脂、头孢克肟于圆底烧瓶中，加入l0.0ml氯仿-甲醇(1：1)复合溶剂于混合仪上充分溶解后，于35℃恒温水浴中旋转减压蒸发除去有机溶剂，形成类脂薄膜，继续用氮气吹干残余溶剂。再加入含有定量胆酸钠的水和介质溶液l0.0ml至烧瓶中，旋转继续洗膜l小时，使得脂质膜充分溶胀水化，得到脂质体混悬液。将混悬液分别置于冰水浴中探针式间断超声一段时间后，室温静置后用0.2um微孔滤膜滤过除去杂质即得头孢克肟脂质体。

2.2.3 优选头孢克肟脂质体制备工艺 根据预实验结果，确定影响头孢克肟脂质体制备的主要因素为药物：卵磷脂比、胆固醇：卵磷脂、胆酸钠：卵磷脂、水和介质pH值，针对4个主要因素选取主要水平，并以综合评分评价头孢克肟脂质体质量（综合评分=包封率×50%+载药量×50%）进行评价，采用L9（34）正交实验进行工艺优选。结果如下：

表1 正交试验主要因素与水平表

表2 头孢克肟脂质体制备正交试验结果

表3 头孢克肟脂质体综合评分方差分析表

由表2结果直观分析可得，以头孢克肟脂质体包封率和载药量综合评分为考察指标，三个因素影响程度依次为C＞B＞A＞D，且A3＞A2＞A1，B1＞ B2＞B3，C1＞C2＞ C3，D3＞D1＞D2可得出最佳工艺条件为A3B1C1D3。

由表3方差分析可得：以头孢克肟脂质体包封率和载药量综合评分为考察指标时，因素B和C对试验结果有显著性影响，因素A和D对实验结果均无显著性影响,因此最佳制备工艺为A3 B1C1D3，即药物：卵磷脂比为1：45、胆固醇：卵磷脂为1∶4、胆酸钠：卵磷脂为1∶1、水和介质pH值为7.5。

2.2.4 验证最优条件 采用正交试验结果最佳工艺制备6份头孢克肟脂质体进行验证试验，结果得到头孢克肟脂质体包封率、载药量和综合评分，见表4。验证试验中制备的头孢克肟脂质体包封率平均值为89.63%，其载药量为1.93%，综合评分为45.78%。

表4 头孢克肟脂质体工艺验证

3.讨论

通过正交试验[7-9]对头孢克肟脂质体工艺进行筛选，其综合评分为45.78%，而脂质体包封率平均值为89.63%，其载药量为1.93%，得到较为可靠的质量。包封率是脂质体质量控制的重要指标，反应药物被载体包封的程度及药物和载体的浓度，由于脂质体比药物粒子在体积上差异较大，故考虑用葡聚糖如Sephadex G-50柱层析作为区分和富集方法。经皮给药是药物通过皮肤吸收的一种给药方法，药物应用于皮肤上后，通过皮肤扩散，由毛细血管吸收进入体循环的过程称经皮吸收或透皮吸收。脂质体具有双重特性一亲水性和疏水性，因此可改善药物对皮肤的通透性，并可促进表皮及真皮组织的吸收，增加药物对角质层的穿透性。将头孢克肟制成脂质体，经皮给药可避免肝脏首过效应，且药物吸收不经胃肠道，同时能长时间持续扩散进入血液循环，减少用药次数，改善患者用药顺应性，提高治疗效果，是一种理想的剂型选择。本文制备的头孢克肟脂质体质量可靠，扩展了临床应用剂型，具有良好的前景。

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