免疫组化病理技术质量控制管理在制作病理组织切片中的应用效果

李 楣

（重庆市第十三人民医院，重庆 400053）

组织病理检查是临床上常用的诊断方法，其应用的范围较广。免疫组织化学技术又被称为免疫细胞化学技术，是指用标记后的通用性抗原或抗体，在组织细胞的原位通过抗原或抗体的免疫反应和组织化学的呈色反应，对相应的抗原或抗体进行定性、定位、定量测定的一项免疫学检测方法。免疫组织化学技术是制作病理组织切片中常用的技术。在使用免疫组织化学技术制作病理组织切片的过程中，任何一个环节出现问题都会影响到病理组织切片的整体制片效果，从而影响后期的病理检验结果。为了进一步提高制作病理组织切片的有效率，笔者对30片乳腺组织标本及30片肝组织标本在免疫组织化学技术质量控制管理下制作病理组织切片，取得了很好的效果。

1 资料与方法

1.1 一般材料

本次研究的对象为30片乳腺组织标本和30片肝组织标本。这60片组织标本均来自于重庆市第十三人民医院的手术室或病理活检室。将这60片组织标本随机分为参照组和研究组，每组各有30片组织标本。两组组织标本的状态相比，P＞0.05，可进行对比。

1.2 研究方法

本次研究使用的试剂为甲醛、苏木精、二甲苯、无水乙醇、硫酸铝、碘酸钠、石蜡及相关的免疫组化试剂。本次研究使用的仪器有徕卡RM2235轮转式组织切片机、全自动组织脱水机、包埋机及生物组织摊烤片机等，使用的干燥箱是由天津市泰斯特仪器生产的202-1AB型恒温干燥箱，使用的图像分析仪是由日本进口的OLYMPUS BX41+Image pro plus图像分析仪。本次研究制作病理组织切片的标准面积为1.5 cm×1.5 cm。为参照组组织标本使用传统方法制作病理组织切片。具体的方法是：1）对组织标本进行固定。在组织标本离体后的30 min内，将其放入固定液中或进行低温保存。然后，将组织标本放入浓度为10%的中性缓冲甲醛溶液中进行8～24 h的固定处理，固定液量为组织块体积的4～10倍。2）对固定后的组织标本进行抗原修复。使用热修复法对固定后的组织标本进行抗原修复，通过热效应引导抗原。进行抗原修复的温度应≥100℃，进行抗原修复的时间为3～15 min，修复液的pH值为7.5～8.5。3）严格按照操作步骤对修复后的组织标本进行切片。具体要求是：⑴脱蜡要充足。⑵增加试剂时要均匀、足量，试剂的面积要比切片组织的界限宽出0.05～0.35 cm，以防止发生边缘效应。⑶合理地控制组织标本在浸液时的温度及烘烤切片时的温度。为研究组组织标本在免疫组化病理技术质量控制管理下制作病理组织切片。具体的方法是：1）在室温下对组织标本进行常规的脱蜡切片后，将其放入浓度为3%的双氧水中浸泡20 min，用PBS（磷酸盐缓冲液）冲洗切片3次，5 min/次，持续15 min。2）将700 ml pH值为6.0的柠檬酸缓冲液融入1000 ml的烧杯中，将溶液加热至沸腾后放入标记有CK19抗体、Ki-67抗体、HBcAg抗体、HBsAg抗体的切片，再加热15 min，然后在每一个切片上滴加一抗后，将其放在40℃的冰箱内过夜孵育。3）用pH值为7.4的PBS冲洗切片3次，5 min/次，持续冲洗15 min。4）在室温下，在每个切片上滴加二抗孵育15 min，再用pH值为7.4的PBS冲洗切片3次，5 min/次，持续15 min。5）将切片放入DAB（显色剂）中显色5～10 min，再使用苏木精对切片进行衬染、水洗，最后用脱水透明中型树胶对切片进行封固处理。

1.3 病理组织切片质量评价标准

在显微镜下观察两组病理组织切片的质量。将病理组织切片分为优质片、良质片和差质片三个等级。1）优质片：编号清晰，薄厚适宜，色彩鲜亮，对比明确，易于观察。2）良质片：编号清晰，有较少的褶皱，无污染及活气泡，色彩较为鲜亮，比较容易观察[1]。3）差质片：编号不清晰，有较多的褶皱或气泡，颜色不清晰，对比不明显，不易于观察。有效制片率=（优质片数+良制片数）/总片数×100%。

1.4 统计学分析

将本次研究的数据录入到SPSS20.0软件中进行处理，计量资料用（±s）表示，采用t检验，计数资料用%表示，采用χ²检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

与参照组病理组织切片相比，研究组病理组织切片的有效制片率更高（P＜0.05）。详见表1。

表1 两组组织标本有效制片率的比较

3 讨论

免疫组织化学技术是进行病理学检查的常用技术[2]。严格控制病理组织切片的制作质量，是提高临床病理学检查准确性的关键。本次研究的结果显示，与参照组病理组织切片相比，研究组病理组织切片的有效制片率更高。这说明，在制作病理组织切片的过程中实施免疫组化病理技术质量控制管理的效果显著，可有效地提高病理组织切片的有效制片率，为进行病理检验的可效性和准确性提供保证。笔者对本次研究的结果总结如下：1）取材是制作病理组织切片的基础。在取材时常见的问题有：⑴选择病变组织的体积不当（如病变组织变形、坏死等）[3]。⑵对病变组织的位置记录或描述不当。因此，在取材时应注意以下事项：⑴在选择病变组织标本时，要科学地确定取材的体积。⑵在取材后，要及时处理组织标本。⑶在记录时，要清晰地描述组织标本的具体情况。⑷在取材时，要避免污染组织标本。2）新鲜的组织标本仅在适当固定的前提下，能够保持其原有的细胞固有形态。但是，由于细胞中含有多种水解酶，在细胞缺氧时，水解酶会分解、破坏组织细胞中的蛋白质，使组织发生自溶的现象[4]。因此，在制作病理组织切片时需注意以下事项：⑴在切下组织标本后，需快速地将离体的组织放入固定液中，以便对标本进行全面的固定。⑵在对组织标本进行脱水、浸蜡，包埋及切片的过程中，需按照实际情况选择相应的试剂，以增强对组织标本进行处理的效果，确保病理组织制片的质量。3）在进行免疫组化染色的过程中，需注意染色的工作路径，以保证病理组织切片的染色效果，避免出现无色片或假阳性片等情况[5]。因此，在制作病理组织切片时需注意以下事项：⑴在进行抗原高压修复的过程中，需选择良好的染色剂，以保证染色的效果和着色的质量，从而提升病理组织切片的着色能力。⑵在进行免疫组化抗原阴性与阳性对比试验期间，需要注意对病理组织切片进行染色的时间。⑶在进行染色的过程中，需严格按照规范性流程进行操作，避免污染病理组织切片，以保证病理组织切片的制片质量。

综上所述，在制作病理组织切片的过程中实施免疫组化病理技术质量控制管理的效果显著，可有效地提高病理组织切片的有效制片率，为临床病理检验的准确度达标奠定良好的基础。