ATP荧光检测技术对纤维支气管镜清洗消毒效果评价的研究

杨绍丽，吴文莉，王静，徐晶

（昆明市中医医院，云南　昆明　650000）

随着纤维支气管镜技术的不断发展，其被广泛应用于感染性、非感染性呼吸道疾病的诊断、治疗，如不明原因的胸腔积液、脓胸、气胸、胸腔内异物等[1]。对于感染性呼吸道疾病，常见的病原体有细菌、病毒、真菌，其中院内感染最常见的病原体为克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌，且多为耐药菌，一旦发生交叉感染，临床抗感染治疗难度极大[2-3]。院外感染常见的病原体为支原体、病毒、军团菌，由于我国肺结核的高流行趋势，结核杆菌也是一种常见病原体[5-6]。支气管镜作为一种介入诊疗工具，使用过程中可能对呼吸道造成一定损伤，因其材质特殊、结构复杂精细，使用后若清洗消毒不彻底，或对特殊患者使用过的内镜未进行特殊处理，可能会导致医院交叉感染的发生[4]。三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）荧光检测作为一种既可以反映被测物体微生物负载量，又可以反映有机物残留量的技术，因其方便、快捷的优点，已被广泛运用于食品卫生、环保、医疗卫生等领域。本研究采用ATP荧光检测和滤膜法细菌培养计数两种方法对纤维支气管镜进行检测，对比两种检测结果差异，以探讨ATP荧光检测技术对纤维支气管镜清洗消毒效果现场评价的可行性，现报道如下。

1　资料与方法

1.1临床材料

1.1.1采样方法选取本院肺病脾胃病科、重症医学科、内镜中心三个部门共9支纤维支气管镜，随机抽取“使用期间清洗消毒后”、“保存备用”、“使用后未清洗”三种不同保存状态的纤支镜，冲洗其内腔面获得洗脱样本，再分别利用ATP荧光检测技术和滤膜法细菌培养的方法对洗脱样本进行检测。纤支镜清洗消毒流程按照《软式内镜清洗消毒技术规范》WS507-2016进行，采样依据《医院消毒卫生标准》GB15982-2012中要求进行。

1.1.2采样部位从活检口注入采样溶液冲洗内镜内腔面并全量收集，得到样本。

1.2采样步骤

1.2.1ATP荧光检测法采用3M Clean-Trace ATP荧光检测仪，监测工具包括：水质采样棒、连接器、样品收集杯、50ml无菌注射器和无菌水，采样方法参照GB15982-2012。检测过程：①取出冷藏（2～8℃）的采样棒包装袋（使用前需让其在室温下平衡10 min），持续按住ATP检测仪器上的红色按钮开机后，使仪器主菜单显示“测量样品”，待用；②将内镜末端插入样品收集杯中，将连接器宽头连接到导光部；③用注射器吸取40 ml无菌水（无菌水量约为采样管管腔容积的两倍），将注射器与连接器进行连接，按下吸引阀门，把无菌水缓慢注入管路（持续时间约为5～10 s），然后收集到样品收集杯中（注意内镜末端不要接触样品收集杯中的液体样本）；④拔下注射器，吸入60 ml空气后再与连接器进行连接，按下吸引阀门，将空气全部注入管路，以便充分收集采样液；⑤从包装袋中取出采样棒，抽出采样环，将其头部浸入样液中，并轻轻敲击采样环柄以排出气泡，此过程中始终确保采样环的上领口与液面齐平；⑥将采样好的采样环慢慢插回采样管，用力向下推压顶端的红色手柄使采样环彻底插入，激活荧光反应；⑦激活后，以45°的幅度迅速振荡采样棒至少5 s，以混合底部的反应液；⑧打开3M荧光检测仪的样品室，将采样棒插入其中，将盖子按下至正好卡住，按下“选择”键，数秒后屏幕会将结果以“相对光单位（Relative Light Unit，RLU）”显示出来，读数并记录。

1.2.2实验室微生物培养法采样工具包括：由昆明市疾病预防控制中心配制含相应中和剂的液体和采样瓶、50 ml无菌注射器、酒精灯和标记笔。检测过程：①点燃酒精灯制造无菌环境，取清洗消毒后的纤维支气管镜，用无菌注射器抽取50 ml含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲洗内镜管路，然后将其收集于采样瓶中（注意内镜末端不要接触采样瓶），充分混匀，将样本瓶做好标记后4 h内送实验室；②取样本液1.0 ml接种平皿，将冷至40～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15～20 ml，（36±1）℃恒温箱培养48 h，测定细菌总数（CFU/件）；③剩余样本液在无菌条件下用滤膜（0.45µm）过滤浓缩后，将滤膜接种于凝固的营养琼脂平板上，置（36±1）℃温箱培养48 h，测定细菌总数。由市疾控中心出具相应的检测结果报告。

1.3评价标准

1.3.1ATP荧光检测法按3M公司器械产品说明书推荐阈值，软式内镜腔面≤200 RLU为合格。

1.3.2实验室微生物培养法依据GB15982-2012，消毒内镜细菌菌落数≤20 CFU/件为合格。

1.4统计学方法结果采用SPSS 20.0进行统计分析，率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

本研究利用ATP荧光检测与滤膜法细菌总数测定两种方法检测，共获得样本各522例。其中，清洗消毒后纤支镜内面样本各488例，保存备用纤支镜内面样本各25例，使用后经床侧预处理但未清洗消毒纤支镜内面样本各9例。滤膜法细菌总数测定：清洗消毒后488例样本，不合格6例，保存备用样本25例，不合格0例，总合格率98.83%；使用后经床侧预处理但未清洗消毒样本9例，不合格6例，不合格率66.67%。ATP荧光检测法：清洗消毒后488例样本，不合格8例，保存备用样本25例，不合格0例，总合格率98.44%，使用后经床侧预处理但未清洗消毒样本9例，不合格9例，不合格率100.00%。两种方法检测结果差异不具有统计学意义，见表1。

表1　两种检测方法不同时机检测结果Table 1　Results of two detection methods at different times

纤支镜清洗消毒后ATP荧光检测不合格的样本8个，检测数值最高为550.00 RLU、最低为225.00 RLU，中值为296.00 RLU；滤膜法细菌总数测定不合格样本6个，均为25.00 CFU/件。使用后未清洗纤支镜内面冲洗样本ATP荧光检测不合格样本9个，结果数值最高为6822.00 RLU，最低为430.00 RLU，中值为2 930.00 RLU；滤膜法细菌总数测定不合格样本6个，最高菌落数6 300.00 CFU/件，最低菌落数为530.00 CFU/件，菌落数中值为5 000.00 CFU/件。滤膜法细菌总数测定结果有466个样本的菌落数为0 CFU/件，ATP荧光检测结果至少为1.00 RLU，但不超过200.00 RLU；其中有36个样本两种检测方法的结果均不为零，但在允许范围内。从两种检测结果数值的四分位间距看，ATP荧光检测结果波动较大，微生物数量超标的样本ATP荧光检测的结果显著增高，见表2。

表2　两种检测方法不同状态不合格样本检测结果Table 2 Test results of unqualified samples in different states of two detection methods

3　讨论

有研究对清洗消毒处理不合格的内镜进行细菌培养后，检出的病原体有铜绿假单胞菌、鲍氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌、真菌、结核杆菌等[5]。而现行《医院消毒卫生标准》GB-15982～2012对纤维支气管镜的监测仅为3个月1次，细菌总数检测所需时间为48 h，耗时长，不及时，滞后性等原因，无法指导现场清洗消毒工作的改进，因此，找到一种快捷、高效、准确的监测方法尤为重要。2016年国家卫计委颁布并执行的《软式内镜清洗消毒技术规范》WS 507-2016推荐可采用ATP生物荧光测定等方法对内镜的清洗质量进行评价。本研究结果显示：纤维支气管镜清洗消毒后的腔面，滤膜法细菌培养计数和ATP检测合格率分别为98.83%和98.44%，与有学者报道经规范、集中清洗消毒的纤维支气管镜合格率为98.75%～99.08%[6]的结果相近。经卡方检验，两种检测方法的样本合格率差异不具有统计学意义，ATP荧光检测可作为一种有效的快速检测方法，对于纤维支气管镜清洗消毒效果的现场评价具有一定的应用价值，与其他学者研究结果一致[7]。同时，我们还从两种检测不合格样本四分位间距进行了统计，发现不合格样本使用ATP检测结果波动较大，有学者认为，可能是受到其他有机物或体细胞ATP的影响[8]，也可能是因为不同微生物的ATP含量不同所致[9]，但都从另一个侧面说明ATP检测灵敏度较高。当然，ATP的检测方法也有不足之处，例如：当检测结果不合格时不能甄别病原菌种类，不能鉴定该细菌的耐药性；使用ATP检测时，室内温度、样本中的微生物量过低或过高均会影响检测结果，需要根据检测目的选择不同灵敏度的检测仪器[10]。此外，目前关于该检测技术的采样方法、阈值判断标准等尚无权威的标准或指南，需要进一步进行探索。