蒲桃枝叶化学成分预试及其总酚、总黄酮含量测定

1.嘉应学院医学院，广东 梅州 514031；2.嘉应学院医学院附属医院药剂科，广东 梅州 514031

蒲桃(SyzygiumJambos)为桃金娘科(Myrtaceae)蒲桃属常绿乔木，主产于我国广东、广西、海南、云南、台湾等省区[1]，是岭南地区民间习用药材，已收载于《广东省中药材标准》[2]。蒲桃药用历史悠久，其不同药用部位均可供药用，其中蒲桃叶可以清热解毒，主治口舌生疮、疮疡、痘疮；蒲桃茎功效为温中散寒、降逆止呕、温肺止咳，用于胃寒呃逆、肺虚寒咳[3]。现代药学研究表明，蒲桃及同属其他植物具有显著的降血糖、抗氧化、抗炎止痛、保肝及抑制白血病细胞等活性作用[4-7]。目前，以蒲桃为主的上市复方药有“石岐外感茶”、和“前列宁胶囊”等，具有清热解毒等功效，其中，复方“石岐外感茶”被评为广东省岭南文化遗产，在广东非典时期广受消费者欢迎。然而，目前国内外对蒲桃属植物的研究多集中于海南蒲桃、洋蒲桃、丁香等少数品种，对蒲桃枝叶的现代化学成分、质量标准、药理活性等方面的研究还处于起步阶段[4]。实验测定蒲桃枝叶的化学成分类型及其总酚和总黄酮的含量，为其进一步开发利用提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 药材 蒲桃枝叶于2017年6月采自广东省梅州市阴那山自然保护区，经嘉应学院医学院天然药物化学教研室林大都鉴定为桃金娘科(Myrtaceae)蒲桃属常绿乔木蒲桃(Syzygiumjambos)的枝叶，标本存放于嘉应学院医学院天然药物标本馆(编号：201706112)。

1.2 试剂 福林酚试剂(1N)(批号：20160117，上海金穗生物科技有限公司)，没食子酸对照品(批号：20170410，上海金穗生物科技有限公司)，芦丁标准品(批号：20160111，上海金穗生物科技有限公司)。95%乙醇、甲醇、石油醚(60～90 ℃)、三氯甲烷、正丁醇、浓盐酸、氨水、浓硫酸、镁、冰乙酸、醋酐、硼酸、碘化铋钾、碘、磷钨酸、碘化钾、铁氰化钾、三氯化铝、三氯化铁、硅钨酸、间二硝基苯、磷钼酸、氢氧化钾、溴酚蓝、香草醛、盐酸羟胺、酒石酸钾钠、乙酸镁 氢氧化钾、2,4-二硝基苯肼、亚甲基蓝、4-氨基安替比林、亚硝酰、铁氰化钠、对二氨基苯甲醛、3,5-二硝基苯甲酸、氯化钠、氧化铝、茚三酮、吡啶、苯甲酸、亚硝酸钠、硫酸铜、硝酸铝等均为分析纯。

1.3 仪器 JP-100S型超声波清洗器(深圳市洁盟清洗设备有限公司)；UV-1800型紫外-可见分光光度计(岛津企业管理(中国)有限公司)；N-1100V型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)；BT125D型电子分析天平(德国Sartorius公司)；BS110s型电子分析天平(德国Sartorius公司)。

2 方法与结果

2.1 实验方法

2.1.1 蒲桃枝叶化学成分预实验

2.1.1.1 石油醚提取液的制备 称取粗粉 5 g，置于50 mL烧杯中，加石油醚20 mL，振荡摇匀，密闭并多次振摇，室温放置1 d，过滤，得石油醚提取液，供挥发油、油脂、甾体和三萜类成分的检测[8-9]。

2.1.1.2 乙醇提取液的制备 取蒲桃枝叶粗粉 10 g，加入95%乙醇100 mL，加热回流提取1 h，过滤，滤液分为两份：一份为乙醇供试液用作黄酮类、蒽酮类、有机酸、香豆素和强心苷、内酯类等成分的检测；一份经减压浓缩等醇浸膏，取0.5 g醇浸膏于10 mL试管中，加入3 mL 2% HCl 溶液，超声溶解，过滤，得醇浸膏酸水液，用作生物碱的检测[8-9]。

2.1.1.3 水供试液的制备 取蒲桃枝叶粗粉 10 g，置于200 mL的三角烧杯中，加入100 mL蒸馏水，室温浸泡过夜，滤取10 mL滤液用作氨基酸、多肽和蛋白质的检测。剩余的浸液及药渣在70 ℃水浴上热浸1 h，过滤，滤液用于糖、多糖及其苷类、有机酸、鞣质类、酚类等成分的检测[8-9]。

2.1.2 总黄酮含量的测定

2.1.2.1 芦丁标准曲线的绘制 参考文献[10]方法以芦丁浓度(X)为横坐标，吸光度(Y)为纵坐标，绘制芦丁标准曲线。

2.1.2.2 样品含量的测定 准确称取蒲桃枝叶药材粗粉5.0 g，置于100 mL三角烧瓶中，加入95%乙醇50 mL，室温超声提取3次，合并滤液，滤渣洗涤3次，过滤，转移至1000 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密吸取供试品溶液2.0 mL于25 mL棕色容量瓶中，后续处理方法同2.1.2(1)项，测定供试品溶液的吸光度值(A)。

2.1.2.3 没食子酸标准曲线的绘制 参考文献方法[11]以没食子酸吸光度(Y)为纵坐标，没食子酸质量浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线。

2.1.2.4 总酚含量测定 准确称取蒲桃枝叶药材粗粉5.0 g，置于100 mL三角烧瓶中，加入95%乙醇50 mL，室温超声提取3次，合并滤液，滤渣洗涤3次，过滤，转移至1000 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密吸取供试品溶液0.1 mL于10 mL棕色容量瓶中，后续处理方法同2.1.3(1)项，测定供试品溶液的吸光度值(A)。平行测定3次。

2.2 实验结果

2.2.1 化学成分预实验 采用试管实验法、纸色谱法对2.1.1项下所得的蒲桃枝叶石油醚提取液、乙醇提取液、水提取液分别进行化学成分检查，通过各种不同成分特有的颜色反应和沉淀反应，初步鉴定供试液可能含有的化学成分及其类型。实验结果见表1～3。

表1 蒲桃枝叶石油醚提取液化学反应结果

“+” 示阳性结果， “-” 示阴性结果

表2 蒲桃枝叶乙醇提取液化学反应结果

“+” 示阳性结果， “-” 示阴性结果

表3 蒲桃枝叶水提取液化学反应结果

“+” 示阳性结果， “-” 示阴性结果

2.2.1 蒲桃枝叶总黄酮和总酚含量 在本实验条件下，芦丁回归方程为Y=0.0131X-0.0003，相关系数(R2=0.9976)，结果表明芦丁含量在0.00 ～ 49.26 μg/mL范围内呈良好的线性关系。没食子酸回归方程为Y= 0.1056X+0.0257 (R2=0. 9974)，结果表明没食子酸含量在0.00～10.01 μg/mL范围内呈良好的线性关系；根据回归方程得到蒲桃枝叶中总酚含量为24.71%，总黄酮含量为20.77%。结果见表4。

表4 蒲桃枝叶中总酚和总黄酮含量测定结果 (n=3)

3 讨论

中药及天然药物是药物的重要组成部分，其防病治病的物质基础是其中所含的大量骨架结构多样和生物活性广泛的的有效成分。据报道，上市的新药中有超过 1/3 直接或间接来源于天然产物，而在合成药物中，也有相当一部分是借鉴了天然产物的骨架结构或药效团[12-13]。我国具有丰富的中药及天然药物资源，且有传统的中医药理论体系，并具有长期的临床应用经验。因此，从药用植物中寻找和开发创新药物是一条适合我国的新药研发途径。

本研究对梅州山区野生蒲桃枝叶可能含有的化学成分进行初步研究和分析，并测定了蒲桃枝叶乙醇提取物中总酚和总黄酮的含量。实验结果表明，蒲桃枝叶中可能含有糖、多糖、苷类、黄酮、酚类、鞣质、内酯、香豆素、甾体、三萜、油脂等多种化学成分，其中总酚含量为24.71%，总黄酮含量为20.77%。初步确定了蒲桃枝叶中可能存在的化学成分，为其化学成分、质量标准、药理活性及药物开发的研究提供科学依据。

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