藏药列赤阿汤颗粒制剂工艺及质量标准研究

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(西藏自治区藏医院开发应用研究所，西藏 拉萨 850000)

藏药列赤阿汤系传统藏药验方。本品始载于公元17世纪藏医药学家第司桑杰加措编著的《藏医医决补遗》中，属于95版《藏药部颁标准》中的成方制剂，由诃子(去核)、毛诃子、宽筋藤、獐牙菜、余甘子等5味藏药材制成，用于“陈普”病，“叱乃”病，风湿、类风湿性关节炎，痛风引起的关节红、肿、热、痛，活动受限等。原汤散服用时按照医生医嘱由患者自行煎煮后服用，因此煎煮次数、加水量、煎煮时间以及服用量等难以保证，由此出现影响治疗效果等问题。本次研究是在治疗物质基础不变前提下，本着方便、安全、疗效确切、质量可控为目标，把本品原汤散经提取、浓缩、制粒、包装并建立了质控标准等。

1 材料

1.1 仪器 WFH-201BJ 紫外可见投射反射仪(上海精科实业有限公司)；BT224S 十万分之一克电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；玻璃展开槽(200 mm×100mm)；TLC 常规预制板(200mm×100mm，青岛海洋化工厂分厂)；DZF-6053真空干燥箱及DHG-9145A电热恒温鼓风干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司);HH-S数显恒温水浴锅(江苏省金坛市医疗仪器厂)；AS20500BDT超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；prima-s15实验室纯水系统(上海和泰仪器有限公司)；U&M-Ⅱ多功能药用试验机(上海优译柯机械科技有限公司)。

1.2 试药 净药材诃子、毛诃子、余甘子、宽筋藤及獐芽菜从西藏自治区藏医院制剂室购买并由本院生药研究所格桑巴珠老师鉴定均为正品；试验用三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸、浓氨试液、冰乙酸等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 制剂工艺研究

2.1.1 提取溶剂 列赤阿汤为水煎煮后服用，为保持原汤剂的溶剂，故本颗粒剂提取溶媒确定为水。

2.1.2 提取工艺正交试验 以煎煮次数(A)、煎煮时间(B)和加水量(C)为3个因素，每个因素选取3个水平，采用L9(34)正交法进行正交试验，以出膏率为指标，优选提取最佳工艺条件。

表1 因素水平设计

2.1.3 试验方法及结果 称取处方药材的十分之一，按表1安排实验，将各次提取滤液合并后，加热浓缩至相对密度1.20g/mL～1.23g/mL(55～60℃)，移入100mL的容量瓶中并定容，防止室温后定容，测定前充分摇匀，分别测定出膏率，进行方差分析，结果见表2 、3、4。

从表2、表3、表4得出结论如下：A(次数)、B(时间)、C(加水倍)三因素中，对本次试验的影响大小为A﹥C﹥B，最佳工艺为：A3B2C3，即煎煮次数是关键因素，加水量是次关键因素，煎煮时间的影响较小。结果：最佳方案为药材加10倍量水浸泡1夜，水煎煮提取3次，每次1h。

表2 正交试验结果

表3 方差分析结果表

表4 方差分析结果表

2.1.4 颗粒成型工艺试验方法及结果

2.1.4.1 辅料选择 采用(按照最佳提取工艺提取流浸膏)与辅料(糊精)按不同比例制备软材，以软材干湿、制粒难易度及色泽均匀为指标进行辅料配比试验，方法与结果见表5和6。

结果：从表6可以看出，第三个辅料处方比例所制得的软材适合制粒，因此我们优选了R2作为列赤阿汤的制备处方比例。

表5 制剂辅料处方比例筛选方法

表6 制剂辅料处方比例筛选结果

2.1.4.2 颗粒干燥试验方法及结果 在恒温干燥箱中进行干燥并设定温度为60℃，用快速测定水分仪进行测定湿颗粒水分，测定结果如下表7。2015年版《药典》颗粒水分小于8%。故确定在60℃下烘干2.5h。

2.1.4.3 颗粒吸湿性试验方法及结果 取已恒重的称量瓶5个，在底部分别放入列赤阿汤颗粒，厚度约为2mm，准确称重后在室温下敞开放置24、48、72、96、120h后称重，结果显示：在室温下敞开放置时间越久，颗粒吸湿性越高，同时颗粒有湿润的现象，表明本品有吸湿性，需隔绝空气，故用铝塑复合膜包装。

2.1.4.4 颗粒流动性试验方法及结果 粉粒流动性测定：为保证工业化生产分剂量的准确性，要求颗粒具有良好的流动性。取干燥颗粒100g5份，采用固定圆锥底法，测定各目数颗粒的休止角。结果休止角分别为35.5°、36.0°、36.5°、36.5°、37.0°，说明物料具有较好的流动性，可以满足大生产要求。

2.2 质量标准

2.2.1 本品中獐芽菜鉴别方法及结果 供试品制备方法：取3批本品内容物2g，加甲醇30mL，超声提取30min(超声温度为60℃)，提取温度的高低影响鉴别斑点的亮度，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取獐牙菜阴性样品(缺獐牙菜)1.17g、獐牙菜对照药材细粉0.21g，加甲醇30mL同法制成阴性样品、对药材溶液。

鉴别方法：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述3种溶液各10μL，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10:1:0.4:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，但阴性样品在相同的色谱位置上没有显相同颜色的荧光斑点，见图1。

2.2.2 本品中宽筋藤鉴别方法及结果 供试品制备方法：宽筋藤主要含有生物碱，按照生物碱提取方法进行制样。取3批本品内容物2g，加入适量10%浓氨水，浸润10min，再加入甲醇30mL，超声提取60min(超声温度60℃)，提取温度高低影响生物碱的提取量，尤其是对照药材影响比较明显，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取阴性样品(缺宽筋藤)1g、宽筋藤对照药材细粉0.33g，加甲醇30mL同法制成阴性样品、对药材溶液。

鉴别方法：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述3种溶液各10μL，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(6：2：1.5)为展开剂，适量浓氨水装入小烧杯中，并放置展开槽另一侧，氨蒸气饱和15分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯(300nm及365nm)下检视。

结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。但阴性样品在相同的色谱位置上没有显相同颜色的荧光斑点，见图2。

3 讨论

3.1 通过正交法优化提取工艺并摸索出生产工艺环节的关键参数，使得本品在工艺无质的改变情况下研制成颗粒剂，建立了可控的质量标准。颗粒剂与原汤散相比具有患者免煎、服用剂量准确、质量可控等优势。当然，剂型上的优势并不足以说明临床疗效的优势，因此今后颗粒剂与原汤散两者在临床使用时，有关临床疗效的数据需要收集并加以分析，由此实现藏药汤剂创新研究工作拓展于临床疗效研究方面，同时为制剂创新研究工作的可行性提供有利的佐证。

3.2 原汤散剂没有建立相应的质控标准，通过此次研究建立了宽筋藤和獐芽菜薄层色谱鉴别和颗粒相应检查向下的检查标准，为产品质量控制提供了可靠、可行标准。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(四部)[S].北京：中国医药科技出版社，2015.通则.

[2]卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·藏药第一册[S].西藏：西藏人民出版社， 1995.275.

[3]西藏、青海、四川、甘肃、云南、新疆六省卫生局.藏药标准[S].西宁：青海人民出版社，1979.212.

[4]占堆，等.藏药成方制剂现代研究与临床用药 [M].成都：四川出版集团·四川科学技术出版社，2009.537-542.