欧李仁提取物体外降糖作用研究

张 玲，张江宁，丁卫英，杨 春，王宇婷

（山西省农业科学院农产品加工研究所，山西太原 030031）

0 引言

α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶是影响体内对碳水化合物消化和吸收的2种关键酶，抑制这2种酶的活性，可以限制胃肠道对碳水化合物的降解和对葡萄糖的吸收，从而可以有效地抑制餐后血糖的快速升高[1-2]。不仅能够调节糖类代谢，又能延缓糖尿病的发生和发展。目前，糖尿病尚无理想的治疗方法，传统的降糖药长期服用会有一定的毒副作用，所以从天然产物中提取高效的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制剂成为近年来的研究热点[3]。研究表明，具有抑制这2种酶的天然产物中大多都富含黄酮、多酚、多糖等，如杨梅果实酚类物质[4]、海藻多糖[5]、花粉黄酮[6]等。

欧李（Cerasus humilis（Bge.）kernel）为蔷薇科樱桃属，是我国特有的一个古老野生灌木果树树种，其果实富含矿质营养，其中钙含量为当今水果之冠，故又名钙果。欧李果实近年来的开发应用及深加工多集中于果汁、果脯、果酒、果醋等的制备中[7]。果实加工后会产生大量的果仁，而果仁也具有很高的营养和药用价值[8-10]。欧李仁也是我国医书中记载的一种常用药（郁李仁），可治疗津枯肠燥、食积气滞、腹胀便秘、水肿、脚气、小便不利等[11]。对欧李仁提取物降糖作用进行初步研究可为欧李资源的综合利用，以及从天然产物中提取高效的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制剂的开发与应用提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

欧李仁，采自山西农业大学园艺果园；苦杏仁苷、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、pNPG（4-硝基苯基-B-D-吡喃葡萄糖苷）阿卡波糖，Sigma公司提供；DNS显色剂和其他试剂均为分析纯。

粉碎机、离心机、756型紫外-可见分光光度计、磁力搅拌器、旋转蒸发仪等。

1.2 试验方法

1.2.1 乙醇和水提取液的制备

称取样粉10 g，分别用200 mL 75%乙醇和水在45℃下磁力搅拌提取3 h，超声波提取20 min，以转速4 800 r/min离心10 min；收集上清液、浓缩并定容至100 mL。

1.2.2 乙醇和水提取液活性成分含量测定

主要包括苦杏仁苷的测定[12]、粗多糖的测定[13]和总黄酮的测定[14]。

1.2.3 对α-葡萄糖苷酶活性抑制能力的测定

参考文献[15]并稍作改动。依次在试管中加入400 μL pH值6.8的磷酸缓冲液，200 μL样品溶液和200 μL α-葡萄糖苷酶溶液（0.13U/L），混匀，于37℃条件下水浴反应15 min，而后加入2.5 mmol/L的pNPG溶液400 μL，继续在37℃条件下水浴反应15 min，最后加入5 mL 0.1 mol/L的碳酸钠溶液终止反应。于波长405 nm处测定其吸光度。以阿卡波糖作为阳性对照，制作标准曲线。

式中：A1——缓冲溶液+α-葡萄糖苷酶溶液+样品溶液+pNPG溶液+Na2CO3溶液；

A2——缓冲溶液+样品溶液+pNPG溶液+Na2CO3溶液；

Ac——缓冲溶液+α-葡萄糖苷酶溶液+

pNPG溶液+Na2CO3溶液。

1.2.4 对α-淀粉酶活性抑制能力的测定

参考文献[16]并稍作改动。将0.5 mL待测样品与0.5 mL的α-淀粉酶溶液加入试管中，在37℃条件下水浴反应30 min，加入1%的淀粉溶液1 mL，继续在37℃条件下水浴反应15 min，水浴反应结束后，立即加入1 mL DNS显色剂，沸水浴5 min后冷却至室温。加入10 mL蒸馏水稀释混匀，于波长540 nm处测定其吸光度。以阿卡波糖作为阳性对照，制作标准曲线。

式中：B1——α-淀粉酶溶液+样品+淀粉溶液+DNS显色剂；

B2——α-淀粉酶溶液+样品+DNS显色剂；

Bc——α-淀粉酶溶液+淀粉溶液+DNS显色剂。

2 结果与分析

2.1 欧李仁提取物活性成分测定

欧李仁提取液活性成分见表1。

表1 欧李仁提取液活性成分/mg·100 mL-1

从表1可以得知，欧李仁乙醇提取液的总黄酮、粗多糖和苦杏仁苷均高于水提取液，尤其是苦杏仁苷含量，乙醇提取液其含量可达62.6 mg/100 mL。

2.2 阿卡波糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制能力的分析

阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶抑制率的影响见图1，阿卡波糖对α-淀粉酶抑制率的影响见图2。

图1 阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶抑制率的影响

图2 阿卡波糖对α-淀粉酶抑制率的影响

从图1可知，质量浓度为10 mg/mL的阿卡波糖对0.132 U/mL的α-葡萄糖苷酶抑制率可达到78.89%，随着质量浓度降低，其抑制率也逐渐下降，8倍稀释后其抑制率下降为36.39%。

从图2可知，质量浓度为1 mg/mL的阿卡波糖对1 U/mL的 α-淀粉酶的抑制率可高达93.52%；同样随着稀释倍数的增加，其抑制率也逐渐下降，8倍稀释后其抑制率下降为54.78%。

从图1和图2可以看出，阿卡波糖对α-淀粉酶的抑制率明显高于对α-葡萄糖苷酶的抑制率，此结论与文献[17]的研究结果相同。

2.3 欧李仁提取物对α-葡萄糖苷酶抑制能力的分析

欧李仁不同提取物对α-葡萄糖苷酶抑制率的影响见图3。

图3 欧李仁不同提取物对α-葡萄糖苷酶抑制率的影响

从图3得知，欧李仁乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率高于水提物和10 mg/mL的阿卡波糖的抑制率。同样质量浓度下，未经稀释的乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率可达到80%以上，而水提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率则小于80%，与质量浓度10 mg/mL的阿卡波糖对0.132 U/mL的α-葡萄糖苷酶抑制率相近。随着质量浓度下降，乙醇提取物、水提取物和阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率也逐渐降低。

2.4 欧李仁提取物对α-淀粉酶抑制能力分析

欧李仁不同提取物对α-淀粉酶抑制率的影响见图4。

图4 欧李仁不同提取物对α-淀粉酶抑制率的影响

从图4可知，欧李仁乙醇提取物对α-淀粉酶的抑制率明显高于水提物的抑制率。同样质量浓度下，未经稀释的乙醇提取物对α-淀粉酶的抑制率可高达95%以上，而水提取物对α-淀粉酶的抑制率为74%左右，乙醇提取物质量浓度经8倍稀释后，其抑制率还可达到58%左右，相当于0.14 mg/mL左右的阿卡波糖对α-淀粉酶的抑制率，而水提取物同质量浓度下，其抑制率已下降为37%左右。同样，随着质量浓度下降，乙醇提取物、水提取物和阿卡波糖三者对α-淀粉酶的抑制率也逐渐降低。

3 结论

以欧李仁为原料，α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率为指标，并以阿卡波糖作为阳性对照，研究其醇提物和水提物的降糖作用。欧李仁活性提取物对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶都有一定的抑制作用，欧李仁乙醇提取物对这2种酶的抑制率高于水提物，这可能是因为其醇提物中总黄酮、粗多糖、苦杏仁苷等活性成分的含量高于水提物。另外，欧李仁乙醇提取物原质量浓度下对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率为84.05%和95.95%，分别相当于对12 mg/mL左右的阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率和1 mg/mL左右的阿卡波糖对α-淀粉酶的抑制率，表明欧李仁提取物有一定的降糖作用，其体内降糖机理还有待进一步研究。

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