曝气水中邻氨基苯酚的HPLC检测方法

陈鸿申，肖 飞，王 睿，张明生 *

(1.贵州大学 生命科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州省分析测试研究院， 贵州 贵阳 550002)

邻氨基苯酚(o-Aminophenol)，化学名为2-氨基苯酚，溶于水、乙醚或酒精，微溶于苯。纯品是白色针状结晶，久置时转变成棕色或黑色。邻氨基苯酚是一种重要的化工中间体，广泛应用于染料、医药、印刷业以及生物领域[1]。近年来人们利用邻氨基苯酚作为脂肪酸的化学修饰试剂分析脂肪酸[2]，由邻氨基苯酚与羰基化合物制成的Schiff碱及其某些金属配合物在催化行为、磁学性质和酶模拟等方面也有着重要作用[3]，此外，邻氨基苯酚还作为有机和染料中间体，用于生产酸性媒介蓝R、硫化黄棕、荧光增白剂EBF等，是金、银的检定试剂[4]。

近年来，邻氨基苯酚在有机合成和分析试剂中的大量应用[5-7]，产生了可能会损害人体健康的苯酚、间甲酚等化合物[8-12]，尤其是人们将其使用后，直接排入水体，造成了严重的环境污染，因此，及时监测水生环境中的邻氨基苯酚至关重要。

目前虽有邻氨基苯酚检测方法的报道，但实际操作起来较为繁琐，且检出限有时达不到检测要求[13-18]。因此，本研究建立了曝气水中邻氨基苯酚的高效液相色谱检测方法，以期为环境中邻氨基苯酚的检测分析提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1仪器 Waterse2695/2998高效液相色谱仪(美国Waters公司)；移液枪(GILSON，法国)；Al204电子天平；温度调节装置。

1.1.2试剂 邻氨基苯酚标准品(纯度为100%)由环境保护部固体废物与化学品管理技术中心提供；乙腈(优级纯)购置于美国Fisher Scientific公司；纯净水(屈臣氏)集团(香港)有限公司。

1.2 方法

1.2.1标准溶液的配置 准确称取样品0.0100 g邻氨基苯酚标准品于100 mL容量瓶中，用曝气自来水超声溶解并定容，配制成浓度为100 μg/mL的受试物储备液。再逐级稀释成所需系列的标准工作溶液，-20℃避光保存备用。

1.2.2定量分析及计算 定量分析方法：建立外标曲线，通过比较样品溶液中组分峰面积，在标准曲线上直接读出样品溶液中的浓度。

样品定量计算：采用外标法对邻氨基苯酚进行定量计算，工作曲线公式为：y=ax+b，其中y表示色谱峰响应的峰面积，单位为微伏·秒。x表示样品浓度，单位为mg/L。a为工作曲线的斜率，单位为(微伏·秒M·s)/(mg/L)。b为工作曲线的截距，单位为微伏·秒。

1.3 分析条件

高效液相色谱柱：Thermo Hypersil GOLD， Dim(mm)：250×4.6， 5 μm， part No. 25005-254630；柱温：25℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；流动相A为纯水，流动相B为乙腈(A∶B = 48%∶52%)；检测器：PDA，234 nm；运行时间5.5 min。

2 结果与分析

2.1 线性和范围

将1.2.1中的储备液用曝气自来水稀释成浓度为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 μg/mL的系列受试物溶液，然后分别取1.5 mL所配制的受试物溶液，按1.3的仪器操作条件上机测定。绘制校正曲线(图1)，得出线性回归方程y = 30535 x - 1708.8，R2= 0.9997。分析结果见表1，校正曲线见图1，图谱见图2、图3。

表1 邻氨基苯酚浓度与对应峰面积Tab.1 Concentration and the corresponding peak area of o-aminophenol

图1 邻氨基苯酚的校正曲线Fig. 1 Calibration curve of o-aminophenol

图2 邻氨基苯酚标准曲线典型图谱Fig.2 Typical chromatogram of o-aminophenol

图3 邻氨基苯酚空白典型图谱Fig.3 Typical chromatogram of blank test

2.1 重复性

选浓度为1.0 μg/mL的邻氨基苯酚溶液用于方法重复性试验，由表2可知，6次重复分析，邻氨基苯酚的峰面积RSDArea=0.36%，满足定性分析和定量分析的要求。

2.3 准确度

按1.2.1中标准溶液的配置方法，准确称取样品0.0100 g邻氨基苯酚标准品于100 mL容量瓶中，配制成浓度为100 mg/L的样品储备液。将该样品储备液稀释100倍后，用于准确度分析。由表3可知，5次平行分析，单次测定值与5次测定的平均值偏差在0.06%～1.7%范围内，准确度能够满足试验要求。

表2 邻氨基苯酚重复性分析结果Tab.2 The results of repetitives of o-aminophenol

表3 邻氨基苯酚的准确度分析结果Tab.3 The results of accuracy of o-aminophenol

2.4 回收率

通过基质加标的方法，在相同的基质中分别加入不同含量的样品，混匀后用于回收率试验，比较其实测浓度与理论浓度的差别，即回收率。5次不同浓度的回收率分析结果在98.0%～104.8%范围内，满足试验要求(表4)。

表4 邻氨基苯酚的回收率试验分析结果Tab.4 The results of recovery rate of o-aminophenol

2.5 稳定性

选取浓度为0.90 mg/L和1.8 mg/L的受试物溶液用于稳定性测定，分别于0 h、6 h、12 h和24 h取样分析。分析结果显示，该样品在12 h内能够在曝气自来水中保持稳定，即实时浓度保持在原浓度的80%以上(表5)。

表5 邻氨基苯酚的稳定性分析结果Tab. 5 The results of stability of o-aminophenol

注：表5中C0表示0 h时的样品浓度，Cn表示在其他时间的样品浓度。

2.6 检出限和定量限

选取0.2 mg/L的样品工作液用于检出限和定量限试验，平行分析6次，由S/N计算出LOD和LOQ。6次分析平均结果，邻氨基苯酚的LOD为0.08 mg/L，LOQ为0.27 mg/L(表6)。

3 结论与讨论

邻氨基苯酚作为酚类化合物，是一种重要的化工中间体，广泛应用于染料、医药、印刷业以及生物领域，同时在有机合成和分析试剂中也有大量应用，该过程会产生大量的酚类化合物，如苯酚、间甲酚等可损害人体健康的化合物，给环境造成严重的污染，因此，对暴露于环境中的邻氨基苯酚进行监测极其重要。芳香胺类的定量分析一般可采用重氮化方法，用重氮化方法测定芳香胺类的纯度，得到的结果是总胺量，因此正确性较差。高效液相色谱是一种高效能分析技术，由于不受样品挥发性和热不稳定性的限制，因而适合于分析高沸点、热不稳定及强极性化合物[14]。

表6 邻氨基苯酚的检出限和定量限分析结果Tab.6 The results of detection limit and the quantitative of o-aminophenol

本研究改进了已报道的HPLC方法，从线性范围、重复性、准确度、加标回收率、检出限和定量限等进行方法验证。试验结果表明在波长234 nm、流速1.0 mL/min 、柱温为25℃操作条件下，邻氨基苯酚在0.2～10.0 μg/mL曝气生态水中呈现良好的线性关系，即y = 30535 x - 1708.8，R2= 0.9997。此外，重复性(峰面积RSDArea=0.36%)、准确度(0.06%～1.7%)、加标回收率(98.0%～104.8%)、检出限和定量性(LOD=0.08mg/L、LOQ=0.27 mg/L)等试验结果均能满足邻氨基苯酚的定性分析和定量分析。本方法具有重复性好，检出限低、出峰时间快，分离特性好等优点，可为环境中邻氨基苯酚的分析检测提供参考。

参 考 文 献：

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