EV71感染HFMD患儿中的细胞、体液及免疫因子水平变化分析

郭卫军

(鹤煤总医院检验科，河南 鹤壁 458000)

手足口病(Hand foot and mouth disease，HFMD)是临床常见的一种传染性疾病，是由肠道病毒诱发的急性传染病，其中常见感染病原体为肠道病毒71型 （enterovirus 71，EV71）、 柯萨奇病毒A16型，常发生于5岁以下的婴幼儿，以发热与手、足、口等部位的皮疹溃疡为主要临床表现[1]。EV71具有高度嗜神经性，起病急、进展快，患者临床表现程度具有差异性，病情轻者只会出现皮疹，重症患者常合并脑膜炎、肺水肿、心肌炎、呼吸循环衰竭等严重并发症，对患者的生命安全造成严重影响。临床发现[2]，手足口疾病的发病机制除了与病原体感染相关外，还与患者机体免疫机制存在密切联系。本研究对我院收治的82例HFMD患儿与30例健康儿童检测细胞免疫学指标、体液免疫学指标，并分析其在手足口疾病发展中的作用，为临床免疫支持提供实验依据，为临床治疗提供基础性资料。

1 研究对象及方法

1.1 纳入排除标准

1.2.1 纳入标准 ⑴HFMD患儿的诊断及病情分级标准参考卫生部2010年公布的《手足口病诊治指南》中的标准[3]；⑵患儿常见临床表现为发热、手足口部皮疹及溃疡，重症患儿可表现为肌痉挛、脑炎、肺水肿、心肺衰竭等；⑶本研究获得患儿家长的知情同意。

1.2.2 排除标准 ⑴患儿病情未经过实验室确诊；⑵合并先心病、急慢性全身性感染性疾病的患儿；⑶具有免疫缺陷性疾病的患儿。

1.2 研究对象 选取本院2012年2月－2015年12月收治的82例HFMD患儿进行研究，根据《手足口病诊治指南》中的标准分为轻症组61例、重症组21例，另选30例健康儿童作为对照组。

轻症组61例，男34例、女27例，年龄1～3岁，平均（2.0±0.5）岁。 重症组 21 例，男 12 例、女 9例，年龄 1～3 岁，平均（1.8±0.6）岁。 对照组 30 例患者，男 16 例、女 14 例，年龄 1～3 岁，平均（2.1±0.6）岁。三组对象的年龄、性别差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.3 观察指标及检测方法 对比三组的细胞免疫指标：CD3+、CD4+、CD8+、自然杀伤细胞（NK）；对比三组的体液免疫指标：免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白 G（IgG）、免疫球蛋白 M（IgM）、补体 C3、C4；细胞因子水平：白细胞介素－6（IL－6）、白细胞介素－10（IL－10）、肿瘤坏死因子 α（TNF－α）的差异。

所有患者确诊后24h内接受相关检查，清晨八点空腹抽取3ml肘静脉血，进行10min离心后提取血清，置入－20℃保存待检。采用酶联免疫吸附测定（ELISA)中双抗体夹心法测定白细胞介素－6（IL－6）、白细胞介素－10（IL－10）、肿瘤坏死因子 α（TNF－α）等细胞因子；采用日立全自动7080生化分析仪测定免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白 M（IgM）、补体 C3、C4 等体液免疫指标水平；采用Facscalibur型流式细胞仪测定CD3+、CD4+、CD8+等细胞免疫指标水平， 试剂盒均购自北京邦定生物医学公司。

1.4 治疗方法 轻症者使用西瓜霜喷剂 （批准文号：国药准字Z45021599，生产企业：桂林三金药业股份有限公司），1～2g/次，3 次/d。 重症者在使用西瓜霜喷剂基础上口服利巴韦林颗粒（批准文号：国药准字H51023510，生产企业：四川百利药业有限责任公司），10～15mg/kg/d。

1.5 统计学方法 正态分布的计量指标采用均数±标准差（±s）进行描述，三组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD－t检验；计数资料组间比较采用χ2检验；统计软件采用SAS9.1。

2 结果

2.1 三组细胞免疫水平比较 重症组、轻症组的CD3+、CD4+、NK 细胞比例均显著的低于对照组（P＜0.05），CD8+细胞比例显著的高于对照组（P＜0.05）；重症组的CD3+、CD4+、NK细胞比例均显著的低于轻症组（P＜0.05），CD8+细胞比例显著的高于轻症组（P＜0.05）；（表 1）。

表1 组细胞免疫水平比较（±s）

表1 组细胞免疫水平比较（±s）

注：与对照组比较 *P＜0.05，与重症组比较 #P＜0.05。

4.3±1.1*2.7±0.8*5.4±1.2 1 6.2 0 4＜0.0 0 1组别轻症组重症组对照组F值P值n 6 1 2 1 3 0 C D 3+（%） C D 4+（%） C D 8+（%） N K（%）5 7.2±7.4*#3 8.6±8.0*6 8.5±8.3 1 9.4 7 1＜0.0 0 1 2 7.4±5.3*#1 6.9±5.8*3 5.1±6.4 1 3.2 8 6 0.0 0 2 2 9.3±6.1*#3 4.0±5.3*2 5.2±5.7 8.9 6 1 0.0 2 8

2.2 体液免疫指标比较 重症组、轻症组患儿与对照组的IgA水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）；重症组、轻症组的IgG、IgM显著的高于对照组（P＜0.05），C3、C4 均显著的低于对照组（P＜0.05）；重症组、 轻症组的 IgA、IgG、IgM、C3、C4差异无统计学意义（P＞0.05）；（表 2）。

2.3 三组细胞因子比较 重症组、轻症组的IL－6、IL－10、TNF－α 显著的高于对照组（P＜0.05）；重症组IL－6、IL－10、TNF－α 显著的高于轻症组 （P＜0.05）；（表 3）。

表2 体液免疫指标比较（±s）

注：与对照组比较 *P＜0.05

0.21±0.07*0.20±0.06*0.28±0.05 11.395 0.009组别轻症组重症组对照组F值P值n 61 21 30 IgA IgG IgM 0.54±0.32 0.51±0.29 0.56±0.33 2.187 0.417 11.42±3.09*11.05±2.88*8.31±1.95 9.146 0.022 1.51±0.28*1.43±0.25*0.91±0.21 6.275 0.046 C3 C4 0.94±0.11*0.89±0.13*1.09±0.14 7.309 0.039

表3 三组细胞因子比较（±s）

表3 三组细胞因子比较（±s）

注：与对照组比较 *P＜0.05，与重症组比较 #P＜0.05。

8 3.5 7±2 6.5 9*#4 3 1.8 3±9 8.7 4*3 9.9 6±1 8.4 0 7 3.0 8＜0.0 0 1组别轻症组重症组对照组F值P值n 6 1 2 1 3 0 I L－6 I L－1 0 T N F－α 2 5.8 6±4.8 2*#6 2.4 0±9.3 5*1 5.8 9±3.1 7 2 7.8 5 4＜0.0 0 1 4 6.7 5±1 6.9 5*#1 7 1.5 0±5 2.4 1*2 3.8 0±1 1.4 4 4 9.3 6 1＜0.0 0 1

3 讨论

手足口病（HFMD）是由多种肠道病毒诱发的常见儿童传染病，5岁以下婴幼儿为易感人群[4，5]。诱发手足口疾病的肠道病毒主要为肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型，其中EV71病毒的传染性较强，隐性感染比例较大，传播途径较为复杂，传播速度较快，成为手足口的重要致病菌[6，7]。EV71病毒具有显著的嗜皮肤与嗜神经特性，对患者造成的临床病症程度不一致，病情轻者会出现自限性手足口病或疱疹性咽峡炎，病情较重者则会损害中枢神经、呼吸系统，诱发脑水肿、心肌炎、脑炎等临床病症，对患者的生命安全造成严重影响。EV71病毒导致手足口病的发病机制尚未明确，可能与患者免疫系统相关[8，9]。

先天性免疫是人类机体抗病毒感染的第一道防线，自然杀伤细胞（NK）作为关键细胞，在EV71手足口疾病中发挥重要作用。EV71感染后患者机体内NK细胞不断减少，会下调激活型受体NKG2D表达，上调抑制型受体CD94与NKG2A的表达以抑制NK细胞的活化，不能使其胞浆内PE、GrB与GNLY等细胞毒颗粒分泌至胞外，不能对已感染EV71的细胞发挥有效杀伤作用[10，11]。CD3+、CD4+、CD8+是一类具有免疫调节作用的T细胞亚群，能够通过细胞接触机制或细胞因子抑制机制调控免疫反应，发挥了T细胞的免疫调节作用，其中CD4+协调B淋巴细胞分化产生抗体，CD8+具有抑制抗体合成、分泌作用，两者的协调维持了人类机体的正常免疫应答[12，13]。本研究中，重症组、轻症组的CD3+、CD4+、NK细胞比例均显著的低于对照组，CD8+细胞比例显著的高于对照组 （P＜0.05）；重症组的CD3+、CD4+、NK细胞比例均显著的低于轻症组，CD8+细胞比例显著的高于轻症组 （P＜0.05），这说明EV71感染所致手足口患者免疫系统紊乱，其免疫水平随着病情的加重而不断变化。

IgG是唯一通过胎盘的一种免疫球蛋白，在小儿出生6个月后因代谢分解而逐渐消失，直至学龄期机体内的IgG成分接近于成人，IgG能够针对蛋白质多肽抗原产生免疫应答，具有中和游离外毒素、病毒，能够发挥吞噬细胞的作用，是下呼吸道的重要保护性抗体[14]。IgM是机体初次体液免疫反应的重要免疫球蛋白，其半衰期为5d，在血液中的存在时间较短，机体免疫应答反应会导致其水平升高[15]。C3、C4作为补体系统中的重要分子，是衡量机体炎性的重要指标，其水平变化与患者的炎症反应、机体免疫力具有密切联系。本研究发现，重症组、轻症组患儿与对照组的IgA水平无差异性，重症组、轻症组的IgG、IgM显著的高于对照组，C3、C4均显著的低于对照组；重症组、轻症组的 IgA、IgG、IgM、C3、C4 相比无差异性， 这表明EV71感染所致的手足口病抗病毒抗体均属于IgG、IgM，其水平降低会降低患者呼吸道黏膜的防御能力，无法阻止病毒入侵体液而加重病情。本研究还发现，重症组、轻症组的 IL－6、IL－10、TNF－α显著的高于对照组；重症组 IL－6、IL－10、TNF－α 显著的高于轻症组（P＜0.05），这提示 EV71 感染手足口病患者血清中 IL－6、IL－10、TNF－α 等炎症因子随着病情的加重，其水平不断上升，由于IL－6、IL－10、TNF－α对中性粒细胞、巨噬细胞、免疫功能细胞具有激活作用，过度表达会刺激患者局部炎症反应，加重病情。因此，临床根据免疫学指标的变化，针对性治疗手足口患儿，轻症者采用西瓜霜喷剂，清热解毒、消肿止痛，利于消除口腔溃疡。重症者口服利巴韦林颗粒，该药物属于合成的核苷类抗病毒药，是广谱抗病毒药物，进入被病毒感染的细胞后会迅速磷酸化，损害病毒RNA合成，选择性的抑制病毒复制，缓解临床病症。

综上所述，EV71病毒感染HFMD患儿多存在显著的免疫功能紊乱，表现为患儿的细胞免疫水平降低、体液免疫反应增强。临床治疗时应在缓解患者临床病症的同时改善其免疫水平，增强患者机体免疫力。但由于本研究的样本量、随访时间有限，尚未对药物治疗的疗效进行分析，有待于进一步深入探究。

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