2017年河南省水产养殖主要致病菌药物敏感性监测分析

（河南省水产技术推广站，郑州 450008）

在水产养殖动物的众多疾病中，细菌、真菌、霉菌性疾病约占总发病率的50%以上，也是导致养殖生产经济损失的主要原因。对于由致病微生物引起的水产动物疾病，抗生素治疗是主要手段，而药物敏感性试验是确定抗生素类药物使用剂量的唯一依据。但是长期以来，由于我国没有开展水产养殖动物药物敏感性普查，没有掌握其对各种抗菌药物敏感性变化规律，导致水产养殖业者科学用药没有依据，渔药滥用成了普遍现象，水产品质量安全得不到有效保障，制约了水产养殖业健康可持续发展。为了解河南省内人工养殖鱼类主要致病菌药物敏感性情况，帮助我省执业兽医师（水生）科学选择和使用水产抗菌素类药物，我站于2017年4月～10月，从河南省人工养殖黄河鲤和斑点叉尾鮰比较集中的区域选择示范点，采集患病的鱼并分离致病菌，测定其对水产用抗菌素类药物的敏感性。具体分析情况如下：

1 材料与方法

1.1 供试药物

测试所用药物包括磺胺二甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、氟苯尼考、恩诺沙星、盐酸环丙沙星、强力霉素、硫酸新霉素、盐酸土霉素、硫氰酸红霉素、氨苄西林钠、甲砜霉素和交沙霉素，共计14种药物。测试所用抗菌类药物样品均由全国水产技术推广总站提供。

1.2 供试菌株

2017年4～10月，分别从河南省洛阳孟津县白鹤镇、郑州荥阳王村黄河滩、郑州中牟县雁鸣湖镇、开封水稻乡回回寨村、新乡延津县胙城乡龙祥养殖基地等12个养殖池塘饲养的黄河鲤鱼和斑点叉尾鮰体内，分离到57株菌株，其中27株维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)，1株未定种的气单胞菌(Aeromonas spp.)、1株嗜水气单胞菌 (Aeromonas hydrophila)、1 株豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、8 株不动杆菌 (Acinetobacter spp.)、1株琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii)、1株沃氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)、4 株芽孢杆菌（Bacillus spp.）、4 株其他杆菌、5株球菌和4株其他细菌。

1.3 供试菌株最小抑菌浓度的测定

将供试药物采用适宜的溶媒溶解后，用灭菌生理盐水分别稀释至所需浓度。在无菌条件下，取96孔板，在第1～12孔分别加入100 μL的MH液体培养基，取100 μL的药物原液加入第一孔中，混匀后吸取100 μL加入第二孔，混匀后吸取100μL至第3孔，以此方法稀释至第11孔，吸取100 μL弃掉。分别在1～10孔、12孔加入100 μL浓度约为1.2*106cfu/mL的活菌液，其中11孔为不加菌液对照，12孔为不加药物对照，每种药物做两个平行，置于28℃培养5d，通过肉眼判定，无菌生长孔对应最低药物浓度，即为药物的最小抑菌浓度 (minimum inhibitory concentration，MIC)。

2 结果

2.1 维氏气单胞菌对抗菌药物的敏感性

27株维氏气单胞菌对各种抗菌药物敏感性如表1所示。

2.2 气单胞菌对抗菌药物的敏感性

表1 维氏气单胞菌对各种抗菌药物的敏感性

1株未定种的气单胞菌、1株豚鼠气单胞菌和1株嗜水气单胞菌对各种抗菌药物敏感性如表2所示。

2.3 不动杆菌对各种抗菌药物的敏感性

表2 未定种的气单胞菌、1株豚鼠气单胞菌和1株嗜水气单胞菌对各种抗菌药物的敏感性

8株不动杆菌、1株沃氏不动杆菌和1株琼氏不动杆菌对抗菌药物的敏感性见表3。

2.4 芽孢杆菌及其他杆菌对各种抗菌药物的敏感性

表3 不动杆菌对抗菌药物的敏感性

4株芽孢杆菌及4株其他杆菌对抗菌药物的敏感性见表4，其他杆菌包括1株棒状杆菌、1株微小杆菌、1株弗氏柠檬酸杆菌和1株肠杆菌。

2.5 球菌对抗菌药物的敏感性

表4 芽孢杆菌及其他杆菌对抗菌药物的敏感性

5株球菌（1株葡萄球菌、1株耐辐射奇异球菌、2株粪肠球菌、1株微球菌）对抗菌药物的敏感性如表5所示。

2.6 其他

表5 球菌对抗菌药物的敏感性

表6 4株其他细菌对抗菌药物敏感性

在试验过程中还分离到4株其他细菌，分别是1株欧文氏菌、1株分散泛菌、1株类志贺邻单胞菌和1株克雷伯氏肺炎菌，对抗菌药物的敏感性测定结果如表6所示。

3 分析与建议

3.1 关于水生动物致病菌药物敏感性的分析

本次分离到的27株维氏气单胞菌，对盐酸环丙沙星、恩诺沙星和强力霉素MIC值在0.10～50 mg/L之间，在所测试的抗菌药物中，为较敏感的药物；对磺胺二甲嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑和磺胺间甲氧嘧啶MIC值均在100 mg/L以上，为敏感性最低的药物；对氟苯尼考、硫酸新霉素、硫氰酸红霉素和甲砜霉素具有相似的敏感度，MIC值位于0.39-50 mg/L之间；盐酸土霉素、氨苄西林钠和交沙霉素MIC值≥0.39 mg/L，敏感度相对氟苯尼考、硫酸新霉素、硫氰酸红霉素和甲砜霉素的敏感度较低。其他30株菌株对各种抗菌药物的敏感性与维氏气单胞菌具有相似的结果，对四种磺胺类药物敏感性最低，对盐酸环丙沙星、恩诺沙星和强力霉素敏感性较高。

3.2 关于目前选择用药的建议

从目前的检测结果表明，养殖户在选择用药时，恩诺沙星和强力霉素为首选抗菌药物，氟苯尼考、硫酸新霉素、硫氰酸红霉素和甲砜霉素可以考虑选用，尽量不要选择磺胺类药物。在鱼病发生，最科学、最有效的用药方式还是测试致病菌的MIC值，确定治疗药物及用量。

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