盐酸罗沙替丁醋酸酯缓释片的药动学研究

吴功强

摘 要：盐酸罗沙替丁醋酸酯是临床上广泛应用于胃及十二指肠溃疡的H2受体拮抗剂。盐酸罗沙替丁醋酸酯为前体药物，在体内它通过小肠、血浆和肝脏的脂化作用，迅速转化成其活性代谢物罗沙替丁，在口服给药后的血浆样品不能检出，因此，所有的药动学研究均是检测生物样品中罗沙替丁的含量来实现。罗沙替丁是盐酸罗沙替丁醋酸酯的初级代谢产物。笔者在此研究服用盐酸羅沙替丁醋酸酯缓释片及缓释胶囊后的药物动力学特征，进行生物等效性评价。

关键词：盐酸罗沙替丁醋酸酯；缓释片；药动学研究

前言：早期的出版物中描述了多种盐酸罗沙替丁醋酸酯生物样品分析的方法，包括气质联用、高效液相色谱、液质联用。因为高效液相色谱法操作简便，其灵敏度及适用性可以满足生物样本分析的要求，所以笔者采用高效液相色谱法进行血浆中罗沙替丁浓度的测定。笔者在此描述了一种简便的高效液相色谱法，将其用于检测血浆中罗沙替丁的浓度。

1.盐酸罗沙替丁醋酸酯缓释片的药动学研究发展情况

盐酸罗沙替丁醋酸酯，是日本脏器制药株式会社研制开发，1986年在日本上市的中长效抑酸药物。体内通过水解作用脱乙酰基迅速转化为其活性代谢产物罗沙替丁，选择性阻断组胺H2受体，临床主要用于预防和治疗由于胃酸高分泌状态引起的消化系统疾病，如胃溃疡、十二指肠溃疡、吻合部溃疡、反流性食管炎、急性胃炎、慢性胃炎急性发作。该药尚未在国内上市，只能通过研究来检测体内活性代谢产物罗沙替丁的浓度，计算药动学参数，揭示该药在中国人体内的药动学特征，为临床合理用药提供依据。本研究采用高效液相色谱法进行血浆中罗沙替丁浓度的测定。同时选择了一种简便的高效液相色谱法，将其用于检测血浆中罗沙替丁的浓度，其具有较宽泛的线性范围（100～6000μg·L-1），以及良好的精密度和准确度。

2.盐酸罗沙替丁醋酸酯缓释片的药动学研究的具体方法

2.1受试者的选择条件和标准

试验方案需经正规医院的医学伦理委员会讨论通过，本次研究选取32名参与者，其中男女各16名，身高（165.3±7.9）cm，体质量（56.3±6.5）kg，年龄（20.6±1.3）岁。均无药物过敏史，无肝、肾疾病史，精神状态良好，全面体格检查均正常（包括肺部听诊、肝脾触诊、心电图、心率、血压、肝肾功能、血尿常规等），排除了一切可能影响本次研究的所有因素，旨在获得最准确的研究结果，为临床合理用药提供依据。在被告知所有与药物有关可能的不良反应后，自愿签署知情同意书。受试者在受试前2周内未服过任何药物，从开始进入试验后直至试验结束，禁烟酒及任何饮料。

2.2储备液及标准液的配制

研究需要使用的罗沙替丁及咖啡因储备液用纯化水配制成符合0.1g·L-1的溶液。罗沙替丁储备液连续稀释制得质量浓度分别为1、2、4、8、15、30和60mg·L-1的工作标准液。向空白血浆中分别加入不同质量浓度的罗沙替丁工作标准液，得到血浆中药物质量浓度分别为100、200、400、800、1500、3000和6000μg·L-1的样品，制得标准曲线。用同样的方法制得质量浓度分别为200、800及6000μg·L-1的质控样品。咖啡因（内标物）用纯化水稀释至最终质量浓度为3000μg·L-1的内标溶液。所有的溶液在4℃冰箱中冷藏保存。接着取出经冷冻保存的血浆，室温下溶化，精密吸取100μL置于4mL试管中，分别加入内标溶液10μL、甲醇水溶液50μL（甲醇-水体积比1∶1）和pH值11的磷酸盐缓冲液100μL，再加入正己烷-二氯甲烷-异丙醇（体积比30∶1∶1.5）萃取溶剂3mL，涡旋混合10min，3000r·min-1离心10min，吸取上层有机相置于干净试管中，50℃氮气流下吹干。残渣加入流动相100μL，涡旋5min复溶[2，6-7]，得供试液。色谱条件为色谱柱，流动相：甲醇-水（含0.1%甲酸）（37∶63）；流速：0.2mL·min-1；柱温：30℃；进样量：10μL。质谱条件为离子化方式：ESI；扫描方式：选择反应监测（SRM）；离子极性：正离子；检测离子：罗沙替丁[M+H]+，m/z307.0→107.碰撞能34eV；内标（石杉碱甲）[M+H]+，m/z243.2→210.9，碰撞能30eV；扫描时间：0.5s；电喷雾电压：4.8kV；毛细管温度：320℃；源内碰撞CID：9V；鞘气流速：38arb；辅助气流速：3arb。

2.3方法学验证

先进行方法特异性的相关试验：考察6个不同个体的空白血浆色谱图、空白血浆样品外加罗沙替丁及内标的色谱图（质量浓度3000μg·L-1）以及用药后的血浆样品色谱图，记录罗沙替丁及内标物的保留时间分别4.7min和5.6min，二者的分离度大于1.5，空白血浆中内源性物质不干扰罗沙替丁及内标的测定。记录信噪比为3∶1时的样品质量浓度为最低检测限。其次通过对不同储存时间和温度的罗沙替丁血浆样品进行分析来评估其稳定性。将制备后的低（200mg·L-1）、中（800mg·L-1）和高（6000μg·L-1）3种质量浓度的血浆样品在不同的条件下放置，每个条件每一质量浓度3个样品。将储存后的样品按“2.2”条方法进行处理，所得样品与内标的峰面积比，与新鲜配制的血浆样品处理后的峰面积比进行比较，计算其百分率。短期稳定性：将罗沙替丁血浆样品于室温下放置4h后，进行分析；长期稳定性：将罗沙替丁血浆样品于-20℃冰箱中冷冻保存，放置21d后取出进行分析；处理后样品稳定性：将处理后罗沙替丁血浆样品于室温放置8h后进行分析。采用双周期交叉试验设计，每个受试者空腹抽取空白血4mL，每组分别给予自制盐酸罗沙替丁醋酸酯缓释片及市售盐酸罗沙替丁缓释胶囊150mg，给药后分别于0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h取血3mL，血样用肝素抗凝，离心取血浆，于-20℃冰箱中冷冻保存。间隔两周后，交叉给药，同时间点采血。

3.药动学参数测定

32例受试者在分别了自制的盐酸罗沙替丁醋酸酯缓释片及市售盐酸罗沙替丁缓释胶囊150mg后，经DAS2.0统计软件拟合，符合开放二室模型，血浆罗沙替丁主要药动学参数，经对数转换后受试制剂的AUC0→24 在参 比制剂的80%～125%内，受试制剂的AUC0→∞ 在参比制剂的80%～125%内，受试制剂的ρmax 在参 比制剂的75%～133%内，两药生物等效。经重复测量设计的方差分析，自制盐酸罗沙替丁醋酸酯缓释片与市售缓释胶囊的生物等效性分析在性别间差异无显著性（P>0.05）。

结语：盐酸罗沙替丁醋酸酯是一种目前国内正处于临床研究阶段的新药，在体内迅速转化成其活性代谢物罗沙替丁。笔者运用液-液萃取后高效液相色谱检测的方法，用于测定人类血浆内罗沙替丁的含量，其具有适合的灵敏度、精密度及准确度。同时该分析方法简便，在进行大量的生物样品分析时，方便快速。应用该方法进行了自制盐酸罗沙替丁醋酸酯缓释片与市售缓释胶囊的生物等效性分析，其结果符合中国食品药品监督管理局相关指南的要求，二者生物等效。

参考文献：

[1]刘巍巍，王淑君，李研.盐酸罗沙替丁醋酸酯缓释片的药动学研究[J].中国药剂学杂志，2017，15（2）：41-44.

[2]吕秀玲，吴琼珠，柯学.盐酸罗沙替丁醋酸酯胃内滞留片的制备及体外释药特性[J].中国药科大学学报，2011，42（5）：418-422.