Excel工具表对仪器白细胞分类及复检规则进行验证

谢婧雯，姜 函，陈 琼，盛朝凯，李小强

(重庆医科大学附属儿童医院检验科，重庆 400014)

深入了解血液分析仪白细胞分类计数性能是临床实践的重要工作[1]。为提高仪器白细胞分类的临床适用性，本研究根据行业标准，将Sysmex XE-2100血液分析仪白细胞分类结果与参考方法分类结果比较，同时验证实验室自定复检规则的适用性。数据分析过程中，利用Excel的数据统计分析和作图功能，制定出一套有高度实用性的分析工具和散点图绘制方法，实现了数据分析的程式化和自动化，为方法比对过程提供思路。

1 资料与方法

1.1一般资料 200份标本均为该院接受检查的儿童血液标本，其中100份来自健康体检儿童，100份来自包含各类白细胞分类异常的住院患儿，标本均采用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝。按照卫生行业标准WS/T246-2005文件中附表C.1临床性能研究的标本类型要求选择[2]。所有标本来源儿童年龄为0～16岁。

1.2白细胞分类计数 收集标本4 h内在Sysmex XE-2100 血液分析仪上完成检测。配套试剂、全血质控物及校准物由Sysmex公司提供。试验前先校准仪器、完成质控。同时每份标本在1 h 内推制血片作瑞氏染色、显微镜镜检。

1.3血涂片的制备及手工分类 每份标本按照WS/T246-2005文件制作3张涂片，并手工分类。

1.4性能验证方案

1.4.1性能比较试验 仪器法不准确度通过2种方法的比较来确定。对200份标本以仪器法测定，分别记录计数结果和细胞计数量；同时按照参考方法手工分类计数白细胞；每天测定50份，共分4 d完成。计算2种方法分类结果均值和不准确度，以美国临床和实验室标准化协会(CLSI)颁布的H20-A2版标准，判断仪器结果是否在95%CI内[3]。

1.4.2复检规则的有效性评估 复检的目的是不漏检形态学异常改变，以防导致临床漏诊、误诊[4]。以人工分类计数为标准，评估XE-2100仪器对白细胞分类结果检出的有效性，以及仪器报警系统功能有效性和复检规则适用性，利用Laboman分析软件统计数据。国际血液学复检专家组提供了41条报警规则，本研究实际选用其中23条规则。复查内容包括3系数量、形态、大小，以及染色性异常、异型淋巴细胞、原始细胞、聚集和寄生虫等。手工涂片阳性的判断标准包括：原始细胞≥1%，晚幼粒≥2%，早中幼粒细胞细胞≥1%，有核红细胞(NRBC)≥1%，异常淋巴细胞>2%等[5]。

1.5Excel工具表制作

1.5.1数据收集 根据不准确度的计算公式，计算不确定度[3]。其中需要参与计算的变量包括参考方法中血涂片A和B计数结果(XA和XB)和细胞总数nr，仪器法计数的两次分类结果(YC和YD)和计数细胞总数nt，分别填入Excel表中。

1.5.2数据分析与作图 在Excel2007表中，设定公式自动计算不确定度，包括xi均值、yi均值、T/nt、R/nr、SE及95%CI下限和上限，并设定条件格式判断单一数据是否合格。

为更直观地观察分类结果的可接受性，将数据设计作图。在Excel2007中，插入XY散点图，以参考方法计数结果为X轴，仪器法测定结果为Y轴。分别设置3个系列，X值均为参考方法计数结果，系列1的Y为参考方法结果95%CI下限值，系列2的Y为参考方法结果95%CI上限值，系列3为仪器法测定结果均值。系列1和系列2数据画趋势线，系列3以散点图显示仪器法分类结果，最后得到单一种类白细胞分类比较试验散点图。分别作中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞及分类计数比例>5%嗜酸性粒细胞分类结果图。

2 结 果

2.1白细胞分类仪器法与参考方法结果符合率比较 见表1。

表1 XE2100仪器白细胞分类与人工镜检分类符合率(n=200)

2.2Excel工具表 利用公式和Excel计算功能，通过对单元格的逐个填写，得到1张可以自动计算和判断白细胞分类性能验证资料和结果的Excel工具表。在使用该表时，只需要按照单元格计算要求填入对应的计数结果，就可以快速判断结果。

注：A表示中性粒细胞比较试验散点图；B表示淋巴细胞比较试验散点图；C表示单核细胞比较试验散点图；D表示嗜酸细胞比较试验散点图

图1白细胞分类计数结果比较试验散点图

2.3判断数据符合性的比较试验散点图 通过1.5.2中所述的绘图方式，得到血液分析仪的各种细胞分类结果与参考方法结果的比较试验散点图，通过图形，可以直观地看到符合数据在可信区间内，而不符合数据分布于2条范围趋势线外侧。见图1。

2.4仪器复检规则有效性评估 仪器法与人工镜检法相比，灵敏度为95.0%，特异度为56.4%，阳性预测值为68.1%，阴性预测值为91.9%，总有效率为75.5%，假阳性率为22.0%，假阴性率为2.5%；提示推片率达69.0%。触发复检规则报警提示的原因分布，异常淋巴细胞和未成熟粒细胞比例分别占40.8%和8.9%，列前2位。见表2。

表2 仪器报警提示与人工镜检细胞形态的情况统计(n，n=200)

3 讨 论

随着血细胞分类计数的技术不断更新，血细胞分类计数仪也越来越先进，大大降低了检验人员的劳动强度。然而，各类技术都只是间接反映细胞特征，得出的结论当然也是间接证据，只能作为筛查手段，而在机体处于复杂的病理情况下，势必会有一定的漏检或误判概率[6]。不同技术分类结果也有一定差异，这在各类临床分类验证研究中都得到了证实[7-9]。

本研究发现，本实验室仪器法假阳性率为22%，假阴性率为2.50%，满足验证要求[10]。但特异度较低，提示儿童推片率(69%)远远高于文献报道的成人推片率[4,11-12]。可能因为儿童体内淋巴细胞较多，且细胞核染色性偏向幼稚，所以仪器报警规则中，异常淋巴细胞和未成熟粒细胞比例分别占了40.75%和8.88%，是提示复检最多的类型。这也说明仪器对异常淋巴细胞和未成熟粒细胞的分类检测还存在一定缺陷，有待新的检测技术和方法来改善这一状况。符合率最低的是单核细胞(86%)，证明仪器对单核细胞的自动分类效果最差，需要手工分类证实的很多标本都属于这类细胞检查结果异常标本。

既往的血液分析仪的分类性能验证研究多采用手工计算的方式，标准文件WS/T246-2005中所拟定的方法也是手工登记、计算不准确度数据，这一工作流程繁琐而且不直观。本研究在实施过程中，充分利用Excel工具表，只需要填入2种方法计数的结果，就可以直接得到对数据合格性的最终判断，并可直观地反映到散点图上，也能直接计算合格率，并与标准文件比较。这一工具的使用，使得验证分析过程一劳永逸，大大提高了效率和直观程度，值得在临床上推广应用。同时还可利用血液分析仪自带数据分析软件Labman程序，比较计算仪器法与人工分类方法的性能特征，设定和调整复检规则，在保证分析筛选效能的前提下，降低复检率、优化临床工作流程。

参考文献

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[3]National Committee For Clinical Laboratory Standards.Reference leukocyte(WBC) differential count (proportional) and evaluation of instrumental methods-2nd edition:H20-A2[S].Waney,PA,USA:NCCLS，2007．

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[5]熊立凡，刘成玉．临床检验基础[M]．4版．北京：人民卫生出版社，2007．

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[11]陈亚芳.血细胞分析复检规则的建立及其应用[J].国际检验医学杂志，2015，36(9)：1297-1298．

[12]薛赢俊,邵华卿.自动血细胞形态预分类系统的性能验证方法的探索[J].检验医学与临床，2016，13(A02)：163-166．