猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗田间试验

猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine， TGEV)是引起猪腹泻的重要病原，主要引起两周龄以内仔猪发生以急性腹泻、脱水及高死亡率为特征的猪传染性胃肠炎(TGE)，该病给世界各国养猪业造成了巨大经济损失。我国从20世纪50年代起就有猪传染性胃肠炎的报道，并且一直以来在我国养猪场时有发生，尤其是冬季和早春寒冷季节常呈地方性暴发流行，给我国养猪业造成极大的危害。猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea virus，PEDV）是引起一种急性、高度传染性病毒性肠道疾病，多在寒冷的冬季发生，临床上主要以呕吐、严重腹泻、脱水和高死亡率为特征。该病最早于1971年在英国发现，随后在整个欧洲蔓延，1978年比利时分离到病毒。我国于1973年首次出现，1995年开始使用猪流行腹泻与猪传染性胃肠炎二联灭活疫苗和弱毒疫苗，对该病的控制起到了积极的作用。但2010年10月以来猪流行性腹泻在我国多个省份暴发流行，并且表现出新的特征。

本产品前期实验室研究结果显示猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗（JL株+ HN-1株）具有良好的安全性，为了进一步明确该灭活疫苗在田间应用的安全性，课题组开展了本项研究，旨在为猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗（JL株+ HN-1株）的现地应用提供一定的理论依据。

一、材料与方法

1.材料

（1）疫苗。猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗（JL株+ HN-1株），5批中试产品，批号为201701、201702、201703，201704，201705，由哈药集团生物疫苗有限公司制备；

（2）检验用强毒。猪传染性胃肠炎病毒（JL株），批号为TGEV-Q-201601，病毒含量107.50TCID50/0.2 ml；猪流行性腹泻病（HN-1株），批号：PEDV-Q-201601，病毒含量107.38TCID50/ml，由哈药集团生物疫苗有限公司制备、鉴定、保存；

（3）试验动物。3～5日龄仔猪8 400头；怀孕79～86日母猪800头，分别由猪场1、猪场2、猪场3提供，常规饲养管理。

2.方法

（1）仔猪安全性试验设计及方法。用5批猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗（JL株+ HN-1株），批号为201701、201702、201703，201704，201705进行田间安全性试验，分别在3个规模化猪场进行，采取平行分组设计和随机化分组原则，对3～5日龄仔猪进行单剂量接种、单剂量重复接种和超剂量接种安全试验。①仔猪一次单剂量接种：经颈部肌肉接种3～5日龄仔猪，1.0 ml/头（1倍使用剂量），共接种3 600头；②仔猪单剂量重复接种：经颈部肌肉接种3～5日龄仔猪，1.0 ml/头，14日后以同样方式再接种1次，共接种500头；③仔猪一次超剂量接种：经颈部肌肉接种3～5日龄仔猪，2.0 ml/头（2倍使用剂量），共接种500头。仔猪安全性试验设计见表1。

（2） 母猪安全性试验设计及方法。用5批猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗（JL株+ HN-1株），批号为201701、201702、201703，201704，201705进行田间安全性试验，分别在3个规模化猪场进行，采取平行分组设计和随机化分组原则，对妊娠79～86日龄母猪进行单剂量接种、单剂量重复接种和超剂量接种安全试验。①母猪一次单剂量接种：经颈部肌肉接种妊娠79～86日龄母猪，2.0 ml/头（1倍使用剂量），共接种500头；②母猪单剂量重复接种：经颈部肌肉接种妊娠79～86日龄母猪，2.0 ml/头，14日后以同样方式再接种1次，共接种300头；③仔猪一次超剂量接种：经颈部肌肉接种妊娠79～86日龄母猪，4.0 ml/头（2倍使用剂量），共接种300头。母猪安全性试验设计见表2。

表1 仔猪田间安全性试验设计

表2 妊娠母猪仔猪田间安全性试验设计

（3）安全性评价指标。①临床状况：每日系统观察注射疫苗后临床状况，包括精神状态、行为活动、粪便、采食、饮水等，与未注射试验疫苗的空白对照组进行比较，评估试验疫苗对猪的不良反应；②局部与全身反应：注射后7日内每日观察注射疫苗猪的全身反应（包括过敏反应、应激反应等）及局部不良反应（包括红、肿、硬结等）、按照附录中局部和全身反应分级标准进行评价，与未注射疫苗的空白对照进行比较，评估试验疫苗对猪的不良反应；③生长性能：注射后28日，从3个猪场试验疫苗组和空白对照组抽取试验猪各30头，称量体重，对比试验疫苗组和空白对照猪生产性能差异情况，评估试验疫苗对猪生长性能的影响；④对怀孕期猪进行跟踪观察：至产仔后，记录母猪注射疫苗后的临床症状，局部与全身反应及产仔情况，有无流产、死产和死胎现象；仔猪体重增长情况。

二、结果

1.对3～5日龄仔猪的安全性。5批中试产品以不同剂量（一次单剂量、单剂量重复、一次超剂量）接种3～5日龄健康仔猪，3个试验猪场共计接种8 400头。在接种后观察期内，仔猪采食、精神、大小便等均正常，体温亦未见异常变化，接种部位无肿块形成和炎症反应，表明5批疫苗对仔猪均是安全的。具体见表3。

表3 仔猪田间安全性试验观察结果

2.对妊娠79～86日龄母猪的安全性。5批中试产品以不同剂量（一次单剂量、单剂量重复、一次超剂量）接种妊娠79～86日龄母猪，3个试验猪场共计接种800头，对接种母猪的临床表现和体温进行观察和测定，并统计产仔成绩。结果5批中试产品接种的母猪在整个观察期间采食、精神、大小便等均正常，体温亦未见异常变化，接种部位也无肿块形成和炎症反应。疫苗免疫组和对照组妊娠母猪的生产性能均未见影响，产仔正常，所产仔猪的出生平均体重和1个月平均断乳体重无差异，说明5批中试产品对妊娠母猪是安全的。具体见表4～6。

表4 妊娠母猪田间安全性试验观察结果

三、讨论

该研究应用GMP生产线生产的5批猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗（JL株+ HN-1株），进行田间安全性试验。通过在3个猪场对3～5日龄仔猪进行单剂量接种、单剂量重复接种和超剂量接种安全试验。在接种后观察期内，仔猪采食、精神、大小便等均正常，体温亦未见异常变化，接种部位无肿块形成和炎症反应，生产性方面与非试验猪群均无显著差异，试验表明本产品对仔猪的安全性良好。

表5 妊娠母猪田间安全性试验产仔情况结果

表6 妊娠母猪田间安全性试验所产仔猪体重记录（kg）

通过在3个猪场对妊娠79～86日龄母猪进行单剂量接种、单剂量重复接种和超剂量接种安全试验。在接种后观察期内，母猪采食、精神、大小便等均正常，体温亦未见异常变化，接种部位也无肿块形成和炎症反应，且所有接种母猪的生产性能均未见影响，产仔正常，试验表明本产品对妊娠母猪的安全性良好。

参考文献（略）