运用微生物过滤器（Millif l ex Plus）膜过滤法微生物的检验及应用分析

潘凌子 大连市血液中心 血型室 （辽宁 大连 116001）

微生物检验是运用微生物学相关理论与方法，对待检测样本中微生物种类、性质、数量及其影响进行检验与分析的过程。膜过滤法微生物检验技术作为近年来广泛应用于各行业领域的一种全新微生物检验技术，具有适用范围广、检测结果可永久保存、检验结果准确度高以及可获得定量检测结果等一系列优势，应用效果备受肯定。本文即针对膜过滤法微生物检验技术及其应用问题展开分析与探讨。

1.膜过滤法微生物检验概述

以得到定量检测结果。

2.膜过滤法微生物检验应用

基于膜过滤法进行微生物检验是目前国际范围内所公认的一种微生物标准检验方法，在西方国家药典标准、EPA、以及FDA等组织中得到了肯定，目前在环境、食品及饮料、制药、以及化品等工业品质检测控制领域中得到了非常广泛的应用[1,2]。

在微生物检验领域中，与常规直接检验方法相比，应用膜过滤法检验主要具备以下几个方面的优势：第一，可提高所检测样品的覆盖范围，具有更好的适用性价值；第二，可以通过膜过滤浓缩效应的方式，提高微生物检验的准确度；第三，可以通过保存带菌落滤膜的方式永久保存检验检测记录；第四，可以将滤膜上所培养菌落与检测样品直接对应，

2.1 实验试剂与仪器

实验试剂主要包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌，均由上海东琴环保生物科技有限公司提供；蓝色素、红色素均由上海东琴环保生物科技有限公司提供；沙氏琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基由上海抚生实业有限公司提供。实验仪器为微生物过滤器，仪器型号为Millif l ex Plus，由默克公司提供。

2.2 样品前处理

精密称取1.0g剂量色素样品置入9.0mL剂量无菌生理盐水中，充分混合均匀后备用。用5.0mL剂量生理盐水对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌以及白色念珠菌菌种斜面进行冲洗，以菌悬液终浓度2.0×103～3.0×104CFU/mL为最终调整标准[3-5]。

2.3 实验方法

2.3.1 常规法

将0.1mL剂量菌悬液与9.9mL剂量无菌生理盐水充分混合均匀后静置备用，吸取1.0mL剂量混合物2份至无菌平板中，分别置入15.0mL～20.0mL剂量胰蛋白胨大豆琼脂培养基，在36.0˚C恒温箱中进行培养，培养时间为2～3d。针对白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL剂量沙氏琼脂培养基，在30.0˚C恒温箱中进行培养，培养时间为3d～5d。回收实验中将0.1mL剂量菌悬液与9.9mL剂量无菌生理盐水稀释后色素样品中，充分混合均匀后静置备用，吸取1.0mL剂量混合物2份至无菌平板中，分别置入15.0mL～20.0mL剂量胰蛋白胨大豆琼脂培养基，在36.0˚C恒温箱中进行培养，培养时间为2～3d。针对白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL剂量沙氏琼脂培养基，在30.0˚C恒温箱中进行培养，培养时间为3～5d。

表1. 蓝色素中各菌种检验结果对比表

2.3.2 膜过滤法

将0.1mL剂量菌悬液与9.9mL剂量无菌生理盐水充分混合均匀后静置备用，吸取1.0mL剂量混合物2份至无菌平板中，将每份样品均移至带滤过膜与含50.0mL剂量洗液的膜过滤装置内进行过滤处理。用150.0mL～500.0mL剂量洗液进行清洗。然后将薄膜移至2个不同TSA平皿表面，在36.0˚C恒温箱中进行培养，培养时间为2～3d。针对白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL剂量沙氏琼脂培养基，在30.0˚C恒温箱中进行培养，培养时间为3～5d。回收实验中将0.1mL剂量菌悬液与9.9mL剂量无菌生理盐水充分混合均匀后静置备用，吸取1.0mL剂量混合物2份至无菌平板中，将每份样品均移至带滤过膜与含50.0mL剂量洗液的膜过滤装置内进行过滤处理。用150.0mL～500.0mL剂量洗液进行清洗。然后将薄膜移至2个不同TSA平皿表面，在36.0˚C恒温箱中进行培养，培养时间为2～3d。针对白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL剂量沙氏琼脂培养基，在30.0˚C恒温箱中进行培养，培养时间为3～5d。

表2. 红色素中各菌种检验结果对比表

2.4 实验结果

实验结果如下表（见表1～2）所示。结合表中数据可见：常规法对各种菌种的回收率均低于50%，不符合检测要求，主要原因是色素中含有抑菌物质导致颜色干扰，菌落数难以准确辨识。而应用膜过滤法对各种菌种的回收率均高于70%，符合标准要求，提示本方法对色素微生物检验具有良好可行性。

本文在分析膜过滤法微生物检验技术基本原理与优势的基础之上，以牙膏膏体色素原料中的微生物检验为例，对比分析常规检验方法与膜过滤法在微生物检验方面的应用价值，经实验结果证实膜过滤法对色素微生物检验具有良好可行性，望能够引起各方人员的关注与重视。

参考文献

[1] 张裕民.食品微生物检验中两种均质方法的比较[J].食品与药品,2015,17(4):287-290.

[2] 刘淑艳,马惠蕊,蒋丹,等.最可能数的精确计算及其在食品微生物检验中的应用[J].中国卫生统计,2011,28(5):516-519.

[3] 杨波.食品微生物检验质量控制[J]. 工程技术(文摘版),2017,8(10):273.

[4] 陈雯雯,段文峰,刘洋,等.新技术在食品微生物检验检测中的应用[J].上海师范大学学报(自然科学版),2016,45(1):121-126.

[5] 钟晓红.食品微生物检验技术及未来发展趋势研究探讨 [J].工业,2017,4(3):233.