剑川县老君山镇乌骨羊小反刍兽疫免疫效果的调查与分析

施剑春 刘 青 邓卫东

（1.大理市畜牧工作站，云南大理 671000； 2.弥渡县弥城镇畜牧兽医站，云南弥渡 675600；3.云南农业大学 动科院，云南昆明 650201）

小反刍兽疫（paste debs pests ruminants，PPR）俗称羊瘟，又名小反刍兽假性牛瘟（pseudo rinderpest）、肺肠（gastroenteritis）、口炎肺肠炎复合症（gastro-enteritis complex），是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病。在自然条件下主要感染绵羊、山羊和美国白尾鹿等小反刍动物，主要感染小反刍动物，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征。该病作为一种重大的跨国界传播性动物疫病，世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物疫病，在我国被列为一类动物疫病，PPR 主要通过直接接触传染，患病动物的排泄物和分泌物是主要传染源，尤其是感染后隐蔽带毒的羊更为危险。易感动物发病率可达100%，严重暴发时，死亡率可达100%。我国在2007年首次在西藏发现该病以来，先后在新疆、贵州、湖南以及黑龙江等地暴发流行，给当地养羊业造成了巨大经济损失，2014年4月，云南首次暴发PPR疫情。该病是OIE 法定报告动物疫病，也是全球计划根除的动物疫病。《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020）》将PPR 列为重点防范的外来动物疫病，并拟在2016～2020 年间根除该疫病。目前，该病尚无有效治疗方法，主要通过早期诊断和疫苗免疫进行控制。

老君山镇位于剑川县西北部，东依老君山，西靠雪斑山，南邻马登镇，北与怒江兰坪县相连，是大理州和剑川县对外交往的一个重要“窗口”。老君山镇面积238km2，乡政府驻富乐村，海拔2450m，年均温10℃，年均降水量960mm。直距金华镇32km，辖10个行政村、31个自然村，有白、彝、傈僳等民族。畜牧业除了主要以生猪、家禽、黄牛养殖为主以外，还有一种地方稀有物种资源—乌骨羊，2017年全镇乌骨羊存栏约1200只，市场价平均4000～5000元/只，若有疫情发生，会给当地养殖户带来严重的经济损失，同时，世界各国对畜禽遗传资源的保护与开发利用均给予了高度重视，因此，特开展此次乌骨羊小反刍兽疫免疫效果评价调查，用阻断ELISA方法检测小反刍兽疫抗体[11-12]，为切实掌握与评估老君山镇乌骨羊小反刍兽疫免疫效果和制定防控措施提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 疫苗与检测剂

小反刍兽疫疫苗是新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产的PPR 弱毒活疫苗，批准文号：兽药生字（2016）310014026；检测试剂为中国动物卫生与流行病学中心（青岛）提供的小反刍兽疫阻断ELISA 抗体检测试剂盒，批号为：201709。

1.2 试验动物

2017年5月和11月分别抽取剑川县君山镇辖区内临床无小反刍兽疫症状且已经免疫过小反刍兽疫疫苗的4个养殖场共240份健康乌骨羊血清（其中乌骨绵羊128份、乌骨山羊112份），离心分离血清，编号待检，-20℃保存。两次采集的羊只固定不变，血清抗体检测期间试验动物不对外出售。

1.3 仪器

单道移液器、多道移液器、生化培养箱、洗板机、酶标仪、普通离心机、一次性移液器吸头等均由云南省动物疫病预防控制中心实验室提供。

1.4 试验方法

用阻断ELISA抗体检测试剂盒说明书进行检测。

① 在A1 和B1 抗原包被孔中加入阳性血清50μl/孔，在C1和D1抗原包被孔中加入阴性血清50μl/孔，在E1和F1 抗原包被孔中加入稀释液50μl/孔，在样品孔中加入稀释液25μl/孔，在样品孔中再加入分别对应的待检血清25μl/孔。

② 37℃孵育60 min。

③ 弃去反应孔中的液体，每孔用洗涤液清洗4次，洗涤液（×1）300μl/ 孔，每次除去洗涤液后，在吸水纸上拍打，除去残留的液体，最后一次拍干。

④ 加酶结合物按1∶5 倍稀释酶标单抗，每孔加50μl/孔，37℃孵育30 min。

⑤ 重复步骤③。

⑥ 每孔加底物溶液50μl，室温避光10～15 min。

⑦ 每孔加终止液50μl，用酶标仪在450 NM 波长下测定各孔OD450NM值。

1.5 结果判定

当阳性对照阻断率（PB）大于60，阴性对照阻断率（PB）小于或等于40，试验有效。计算待检样品阻断率（PB），待检样品阻断率（PB）大于50 判为阳性，小于等于50 则判为阴性。统计阳性样品数即为免疫合格数。

2 结果

2.1 血清抗体检测结果

（1）两次检测都是采集了固定不变的240只相同的乌骨羊的血清，其中第一次（免疫后6个月）抗体阳性量222份，平均阳性率92.5%；第二次（免疫后12个月）抗体阳性量210份，平均阳性率87.5%（见表1）。

（2）同一次检测结果显示，不同品种血清抗体平均阳性率差不多，其中免疫后6个月的乌骨绵羊平均阳性抗体率92.19%，乌骨山羊平均阳性抗体率92.86%；免疫后12个月的乌骨绵羊平均阳性抗体率85.94%，乌骨山羊平均阳性抗体率89.29%（见表1）。

表1 小反刍兽疫血清抗体检测结果 只、%

2.2 免疫效果调查

2.2.1 疫情调查

免疫前，检测所采集的240只乌骨羊群，均未出现疑似小反刍兽疫临床症状，免疫后至今，辖区内也未发生疑似小反刍兽疫病例。

2.2.2 不良反应调查

240只羊群，在接种小反刍兽疫疫苗24h后未出现不采食等不良现状，抽测20只羊的体温位38.4℃～39.2℃之间，体温正常；免疫24d后均未出现流产、死亡的现象。

3 结果分析

检测结果显示，不同品种不同检测时间的血清抗体阳性率都在70%以上，达到国家规定的大于70%]的标准，调查结果显示免疫后免疫羊群未出现疑似小反刍兽疫病例，无不良反应，由此可以推断全镇乌骨羊小反刍兽疫疫苗效果比较良好，适应强，副作用小。小反刍兽疫抗体可持续时间长达12个月，后期情况还需进一步观察，关键是必须对免疫后的羊群定期进行采样监测，根据免疫抗体的消长水平来确定免疫时间。

4 讨论

（1）从两次检测结果来看，发现小反刍兽疫血清抗体合格率都达到了国家农业部兽医局提出抗体合格率不低于70%的要求，说明免疫效果整体较好，基本上构建了有效的免疫屏障。

（2）本次使用新疆天康畜牧生物技术股份有限公司的PPR 活疫苗对本辖区内的健康乌骨羊只进行免疫接种，接种后未见PPR新病例和不良接种反应，表明PPR 活疫苗的副作用小，免疫效果好，安全可靠。

（3）从中可以发现近年来当地政府和畜牧兽医主管部门对动物疫病防控方面比较重视，结合本地区和周边动物疫病流行情况制定科学有效的免疫方案，宣传比较到位，切实做好动物疫病防控工作；防疫人员能够按照免疫注意事项就行免疫操作，操作水平较高；养殖场管理人员的依法防疫、自觉防疫意识强，积极配合主管部门开展好辖区内的动物疫病防控工作，同时还反映出饲养环境和管理水平等能够跟得上规模化养殖的要求。

（4）从羊群品种来说，乌骨山羊的免疫抗体平均转阳率比乌骨绵羊稍微高一些，目前推测可能是乌骨山羊对PPR病毒易感性较高所致。根据有关报道指出，山羊注射PPR疫苗后产生的抗体效果要显著高于绵羊。因此，不同羊群品种注射疫苗后所表现出来的免疫应答效果也不尽相同。

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