黑老虎栽培技术及其混伪品鉴定研究进展

杨锐培　王洁　王德勤

摘要综述了近10 多年国内外学者对黑老虎的栽培技术及其潜在混伪品的性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别的研究进展，为黑老虎的规范化种植与合理开发利用提供参考。

关键词黑老虎； 生药鉴定；混伪品；栽培技术

中图分类号R282.71文献标识码

A文章编号0517-6611（2018）08-0026-03

Research Advances in Culture Technique of Kadsura coccinea and Identification of Its Adulterants

YANG Ruipei1，WANG Jie2，WANG Deqin1 et al（1.Hutchison Whampoa Guangzhou Baiyunshan Chinese Medicine Co.，Ltd.，Guangzhou，Guangdong 510515；2.Shenzhen Peoples Hospital，Shenzhen，Guangdong 518020）

AbstractThe research results on Kadsura coccinea at home and abroad are reviewed in the fields of its culture technique，and the research advances in morphological identification，microscopic identification，physicochemical identification of its adulterants.It can provide reference for standardize planting and rational development and utilization of Kadsura coccinea.

Key wordsKadsura coccinea；Biological identification； Adulterants；Culture technique

黑老虎藥材基原为五味子科南五味子属植物厚叶五味子Kadsura coccinea（Lem.） A.C.Smith的干燥根或异形南五味子K.heteroclita（Roxb.） Craib的干燥藤茎，又名饭团藤、大血藤、黑老虎、人头泡、冷饭蔷、臭饭团、酒饭团，最早记载于《黄帝内经》[1-2]。据《中国植物志》[3]记载产于广东、广西、云南、贵州、江西等地，多分布于海拔1 500～2 000 m的林地，越南也有分布。黑老虎之名出自《岭南采药录》，《广西药植名录》称之为血藤[4]。性味温、辛、微苦，具有行气活血、散瘀通络之功效，主治肠胃性疾病以及风湿性关节炎、痛经、产后瘀血腹痛等症；其根、藤入药，其提取物具有抗肿瘤、抗艾滋、抗肝炎、抗氧化和神经保护等作用[5-9]。但目前研究主要集中在中药化学和药理学等方面[10-14]。

近年来，黑老虎的根作为强腰壮肾丸、舒筋健腰丸、舒筋风湿酒和壮血片等的重要原料药；其果实含丰富微量元素和氨基酸，具有抗氧化作用，可直接食用和开发饮料；其植株多做观赏性植物，在国内、外已开始通过提取和加工等多种手段开发美容和保健品，对黑老虎的需求越来越大[15]。由于过度采挖及其自身生长、繁育特性等原因，黑老虎野生资源临近枯竭，产量难以满足需求。另外，由于黑老虎果实作为水果经济价值要比挖根做药材高出许多，受市场供求关系影响，黑龙虎作为药材销售较少，另外由于种苗质量参差不齐，价格虚高，市场上药材以假乱真的情况时有发生。石焱芳等[16]指出在广东省中药材标准中黑老虎的来源应为木兰科植物厚叶五味子的干燥根，并且认为现在市场上有大量称之为黑老虎的药材其实并非来源于同一科属，而是产于越南、缅甸等国，还有少量来自我国各地。

黑老虎作为药材时伪品暂未见报道，但从广西玉林、广东清平、江西樟树等药材市场上调研情况来看，多以黑风藤等价格较便宜的藤类根部充当黑老虎根作药用，其与黑老虎的化学成分、药理活性差异较大，使用不当即可发生严重不良反应。故黑老虎的鉴别和栽培具有重要意义，现综述中药黑老虎及其潜在伪品鉴别和其栽培技术的研究进展。

1鉴定研究

由于黑老虎可做药材使用的资源不多，临床需求量又非常大，市场混伪品时常可见。早在20 世纪90 年代就有学者关注黑老虎的鉴别研究，致力于规范药材的来源，为保障市场药材的质量以及确保黑老虎临床应用的安全有效做出贡献。

1994年，谭立英等[17]总结黑老虎药材的性状鉴别、组织鉴别（根和藤茎的横切面）、药材粉末鉴别和理化鉴别方法。张春辉等[18]在薄层鉴别的基础上，又基于高效液相技术针对黑老虎中原儿茶酸建立了含量测定方法。王秀芹等[19]基于2015版中国药典薄层色谱法建立黑老虎药材的定性鉴别方法。同时，徐亮[11]利用日本南五木脂素A对照品对17批次的黑老虎进行薄层鉴定和基于高效液相色谱法技术以日本南五木脂素 A、乙酰基日本南五木脂素 A、二氢愈创木脂素、kadsuralignan I对照品建立对 17 批不同产地黑老虎特征谱图的检测方法，还按照 2010 版《中国药典》的相关要求测定黑老虎药材中的浸出物、水分、灰分、重金属和有害元素以及农药残留等的含量，初步建立黑老虎的质量标准。

1.1性状鉴别

黑老虎[1，3，11]主根呈圆柱形，直径1～5 cm。表面色泽黑褐或灰褐，常见多数纵皱纹和横裂纹，皮孔椭圆形。质地坚韧，不容易被折断，断面呈粗纤维性，皮部为棕色，容易剥离。木质部为浅棕色，可见放射状导管小孔密布。气微香，味微苦涩。

黑风藤[17]为番荔枝科瓜馥木属植物黑风藤Fissisfigma polyanthum （Hook.f.et Thoms.） Merr.，民间以根和藤入药。主根呈圆柱形，长20～60 cm，直径2～8 cm，表面色泽灰黄或棕褐，体轻，质地较硬，不容易折断，断面呈纤维性。切片为椭圆形的斜切片，厚1～2 cm，外皮色泽灰褐，皮厚2～3 mm，色泽棕，易与木质部分离；木部色泽灰白，有放射状纹理和密集小孔。气微，味苦而涩。

黑老虎与黑风藤的主要区别是黑老虎主根略为扭曲，直径略小。侧根上有许多须根。表面色泽为黑褐或灰褐，同时还可见多数纵皱纹和横裂纹，弯曲处常裂成横沟，具椭圆形皮孔。

1.2显微鉴别

1.2.1黑老虎。黑老虎[14]藤茎横切面：木栓层为4列细胞，皮孔明显，栓内层为4～8列细胞组成，常散有石细胞。中柱鞘部位可见少量石细胞，微木化的纤维群断续成环。韧皮部窄，薄壁细胞含有少量的石细胞，形成层明显。木质部射线宽广；导管散在，类圆形，直径39～195 μm。髓部发达，由较大的薄壁细胞组成，并散有石细胞。

黑老虎[11，14]药材粉末鉴别：本品粉末介于红棕色和黑褐色之间。纤维单一或成束，草酸钙小方晶密布在纤维壁中，构成嵌晶纤维，直径为20 ～80 μm。多破碎的网纹导管和具缘纹孔导管，直径为30～50 μm。淀粉粒单粒或复粒。石细胞类方形或椭圆形，偶有嵌晶，壁孔明显。

1.2.2黑风藤。

黑风藤[20]茎横切面：表皮细胞1 列，长方形，棕黄色，小茎有非腺毛。皮层细胞5～10列，长圆形，棕黄色，部分细胞间有空隙。韧皮部为披针形，韧皮射线由内向外渐宽，薄壁细胞可见棕黄色分泌物质。木质部宽广，约为茎的2 /3，木射线细胞1～3 列，长方形，导管单或几个相连，呈放射状分布，直径36～156 μm。射线细胞散有草酸钙小方晶。髓部小，由圆形或多角形薄壁细胞组成。

黑风藤[21]药材粉末：本品粉末呈淡黄色。纤维成束或分离，韧皮纤维壁较厚，微木化，直径20～36 μm；木纤维壁较薄，木化，胞腔较大。具缘纹孔导管，淡黄色，直径23～126 μm。草酸钙方晶散在或分布在细胞中，直径15～26 μm。非腺毛细胞2～6 个。石细胞方圆形或不规则形，孔沟明显。

1.3理化鉴别

1.3.1显色鉴别[17]。

取样品粉末1 g，加蒸馏水10 mL，混匀，浸泡30 min，滤过，备用。另取试管2只，各取滤液l mL，一只滴入三氯化铁试液3～5滴；另一只滴入碘化秘钾试液5滴。黑老虎供试品溶液遇三氯化铁试液有棕色沉淀生成，遇碘化秘钾试液有红棕色沉淀生成，而黑风藤无此特征性反应。

1.3.2泡沫鉴别 [17]。取样品粉末1 g，加蒸馏水10 mL浸泡30 min，滤过；取滤液2 mL，置于试管内，用力激烈振摇，黑老虎供试品溶液会有大量泡沫生成，并且在2 h内不会消失，而黑风藤无此特征性反应。

1.3.3薄层色谱鉴别。

方法1[12，18-19]。取样品粉末各1 g，加甲醇20 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水 20 mL 使其溶解，再用氯仿振摇提取2次，每次 30 mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇 2 mL使溶解，再加在中性氧化铝柱（100～200 目，4 g，内径约 1.5 cm）上，用甲醇 30 mL 洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇 0.5 mL 使溶解，作為供试品溶液备用。取黑老虎对照药材 1 g，同法处理后作为对照药材溶液。薄层色谱法试验，吸取上述 3 种溶液 5 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（7∶12∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷 5 %香草醛硫酸溶液，在 105 ℃加热至斑点显色清晰。黑老虎供试品溶液与对照药材溶液色谱相应的位置有相同的紫红色斑点，而黑风藤供试品色谱中无此特征斑点。

方法2[22]。取样品粉末各1 g，加甲醇30 mL，超声处理1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取黑风藤对照药材1 g，同法处理后作为对照药材溶液。薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开剂为石油醚─甲酸乙酯─甲酸（15∶5∶0.4），展开，取出，晾干，再置于紫外灯（365 nm）下检视，黑风藤供试品溶液与对照药材溶液色谱相应的位置有相同颜色的荧光斑点，而黑老虎供试品色谱中无此特征斑点。

1.4黑老虎与其混伪品黑风藤之间通用的可行性

广州白云山和记黄埔中药有限公司黑老虎主要作为强腰壮肾丸、舒筋健腰丸的重要原料药，而在现行局颁标准中，对壮腰健肾丸的含量测定方法是对原儿茶醛、原儿茶酸进行测定[18-19]。关于黑老虎和黑风藤的药材质量研究较少，其中黑老虎收载在《广东省中药材标准》《中华本草》和《广西瑶族习用药材质量标准》，而黑风藤还没有法定的质量标准[22]。大量的文献调研显示，原儿茶酸和原儿茶醛是黑老虎、金毛狗脊、桑寄生、鸡血藤和金樱子等药材的共有成分，而黑风藤中暂未发现原儿茶酸和原儿茶醛[23-24]。市面上由于黑风藤价格较黑老虎价格低，时有用其根冒充黑老虎药材使用的情况，但从来源、性味、功效、化学成分和药理作用等多个角度分析，二者区别较大，其通用可行性和鉴别方法有待进一步深入研究。

2栽培技术研究

2.1种苗繁殖技术

吴智涛[26]指出黑老虎育苗方式有实生育苗、嫁接育苗、扦插育苗和压条育苗4种，其中后2种相对其他技术要求高，根系也稍差；而采用种子育苗的苗木根系较发达，环境的适应能力更强，移栽成活率更高。若选用嫁接育苗技术时可用黑老虎和涨风藤（Kadwura heteroclite）的实生苗为砧木。

黑老虎在实际生产中多以种子育苗为主，但由于其喜湿，故而在生态环境湿度大的条件下，更有利于种子萌发、幼苗生长。同时其根系浅，不耐瘠，要求种植在地势平缓、土层厚、保水保肥、质地疏松、排水优良的砂质壤土中。龙世林等[25]对黑老虎的单株雌花占比率调查指出其为雌雄同株单性花常绿植物，其调查结果与吴智涛[26]的冷饭团雌雄花比例约为1∶4相符。

赵艳等[27]分析不同种子处理效果指出0.5 % CaCl2+50 μg/mg GA混合溶液浸种能较好地提高出苗率，使出苗整齐、健壮，出苗率比40 ℃的温水浸泡对照提高8 %。尹艾萍等[28]针对不同种源的黑老虎实生容器苗制定其苗木分级标准，指出相同培育条件下不同种源的苗木藤高、地茎存在极显著差异，因而在不同地区苗木标准应有所不同。

2.2营养生理

在黑老虎的野生居群生长方面，付玉嫔等[29]研究影响黑老虎野外生长的主要因素，黑老虎和许多木质藤本植物一样具有进行远距离克隆繁殖的特点，藤茎从林冠垂落到地面产生根系或根系沿林下地面不断伸长再产生根系的方式克隆出新的藤茎。黑老虎居群在幼年阶段较高的集群强度有利于存活和发挥群体效应，而成年时由于个体增大，自疏作用增强，集群强度降低则利于获得足够的环境资源。

段永泉等[30]和黄锁义等[31]认为黑老虎是一种生长在较高海拔、喜湿润气候、常见于山林里和水沟边的常绿木质藤本植物。通过原子吸收光谱法检测显示，云南和广西黑老虎含铁、锰、铜、镁、锌、钙等多种人体所需微量元素。漆小雪等[32]报导不同光照对黑老虎生长及叶片SPAD值的影响，指出黑老虎属于喜阴植物，光照在30%～50%是其最适宜的遮荫度，强光和弱光都不利于黑老虎的生长发育。陈银华[33]提出在营养生长期，黑老虎的管理为定植后插竹竿，打顶，促发分枝，同时应注意及时摘心打顶，保证藤蔓的均匀分布。

2.3栽培技术措施

邓冬梅等[34]对粤北黑老虎的高产栽培技术进行阐述。早在2006年唐辉等[35]开展黑老虎野生驯化和引种栽培的试验研究。表明野生冷饭团驯化为栽培品种是成功的，对其进行人工栽培并规模化发展是可行的。吴智涛等[26]详细介绍黑老虎的栽培技术，主要包括造地林选择、林地清理、整地施肥、适时播种移栽、合理密植、加强肥水管理、抚育管理、整形修枝、 注意病虫害防治。付玉嫔等[29]通过调查研究，总结了云南黑老虎的居群结构和居群发展动态，指出黑老虎这一植物居群目前更新的方式主要为克隆繁殖，种子自我更新能力极弱，居群数量少，正处于衰退状态，且目前还在不断、大量的利用野生资源的现状都预示着该居群的生存和发展十分堪忧。应该积极倡导对黑老虎野生资源的保护、收集保存和尽快开展人工引种驯化。陈银华[33]和陶光林等[36]报导黑老虎定植分为春植和秋植，春植时间为2月下旬至3月上旬之间植株萌芽前，秋植时间为10月下旬至11月上旬。秋植的好处在于根系分裂生长提早，有利于加快第2年树体的生长发育。

2.4病虫害防治

吴智涛[26]和陈银华[33]均认为黑老虎在抗病害方面能力强，暂未见危害性病害。而其他病害主要是叶枯病，防治措施为加强田间的管理和通风透光，发病初期可用波尔多液按1∶1∶100 喷施，每7 d喷1次，连续喷施数周即可。田定科[38]和陶光林等[39]给出了红蜘蛛（危害植株嫩梢和叶）、卷叶虫（危害叶部，适成卷叶，影响果实生长）、鳞翅目粉蝶（6月中下旬至11月下旬为害叶部、果实）、鞘翅目叶甲科的蓝翅瓢萤叶甲（4月底至5月初为幼虫危害，6月中下旬为成虫危害，为害叶部）的详细防治方法。

邓冬梅等[34]和邓定洪[40]认为虫害主要有白蚁，主要為害根部，要用石灰、草木灰或蚂蚁药等，而尺蠖主要为害叶和花蕾，防治可用氯氰菊酯和阿维菌素。

3结语

黑老虎作为我国传统中药，应用广泛，其主要化学成分较为复杂，普遍认为木脂素类和三萜类是其主要的生物活性成分，同时还含有倍半萜、挥发油、甾体类等化学成分[26]和木脂素类、三萜类化合物。而黑风藤属于稀用中药材[16]，化学成分研究不够深入，化学成分不够明确，未能找到合适的化学成分对照品，所以进行薄层色谱研究时只能以黑老虎和黑风藤各自的对照药材为对照。

从以上黑老虎及其混伪品的鉴别分析来看，黑风藤与黑老虎在性状上较相似、差异较小；在显微鉴别、薄层鉴别及理化鉴别方面，黑老虎与其混伪品均有较为独立的鉴别方法。故中药黑老虎在购买及使用时，一定要仔细辨别真伪，防止因误用、冒用、错用伪品而发生药品不良反应，乃至中毒。

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