G试验和GM试验联合检测对肺侵袭性真菌病的诊断价值

李璐，柳楠楠

侵袭性真菌病即指真菌侵入人体组织、血液，在这些部位生存、繁殖，致使器官和组织损坏或产生炎症反应的一类疾病[1]。肺侵袭性真菌病即真菌侵袭肺部，损伤了肺部功能，造成肺部出现病理变化[2]。患者常表现为咳嗽、干呕、头晕、失眠、无力、胸闷等症状。国内研究发现以念珠菌为主的酵母样真菌和以曲霉为主的丝状真菌为最常见的病原菌[3]。为探讨G试验和GM试验联合检测对肺侵袭性真菌病的诊断价值，本研究选取2016年8月～2017年8月在本院拟诊为肺侵袭性真菌病患者设为观察组，同时设立对照组（非感染组），对两组人员各项指标进行了检测，同时对各项指标在肺侵袭性真菌病中的诊断价值进行观察，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年8月～2017年8月在本院拟诊为肺侵袭性真菌病患者60例为观察对象。纳入标准：①存在真菌感染的高危因素；②存在临床感染的证据。排除标准：①临床资料不全者；②不愿参与本项研究者。根据纳入排除标准共纳入侵袭性真菌肺感染者60例，男35例，女25例，年龄36～68岁，平均（54.15±5.25）岁。对照组纳入病例数60例，男30例，女30例，年龄35～70岁，平均（54.18±5.41）岁，其中40例疑似侵袭性真菌感染，20例排除肺部感染，两组患者的临床资料比较差异无统计学意义，有可比性。本项研究经医院伦理委员会评审通过，且所有患者均知情同意。

1.2 仪器与试剂 MB-80微生物快速动态检测系统，MK3酶标仪，T02智能恒温仪，高速离心机，振荡器。（1，3）-β-D葡聚糖检测试剂盒，血清半乳甘露聚糖试剂盒。

1.3 方法 G试验：通过振荡将100μL血清与0.9 ml样品处理液混匀，加热10 min（70℃），放置冷却槽内5 min，同时在主剂中加入600μL主剂溶解液进行溶解，混匀之后放置一边，做待用准备。将100μL冷却完毕的处理液与100μl主剂移至试管内，将两者混匀，插入MB-80微生物快速动态检测系统中反应，反应结束后仪器自动计算出血清中（1,3-β）-葡聚糖的含量。

GM试验：将100μl处理液加至300μl待测血清中，将两者混匀，水浴3 min（100℃），然后对其进行离心，离心10 min后取上清液，进行备用。在每个ELISA检测孔中添加50μl结合液和经过处理的50μl上清液，在37℃环境下放置60 min。各孔加入350μl清洗液后，将其吸干，每孔再次加入200μL显色液，常温下避光放置半小时，每孔加入100μl终止液；在450 nm波长下，在酶标仪上读取吸光度值。

1.4 统计学方法 本研究数据均用SPSS11.5统计软件处理。计量资料用“x±s”表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者BALF GM、G实验检测结果的比较 肺侵袭性真菌感染组患者的血清GM、BALF GM和血清G试验实验结果高于对照组（t=-7.390、-16.462、-84.653，P＜0.001），见表1。

表1 两组患者BALF GM、G实验检测结果的比较（x±s）Table 1 Comparison of BALFGM,Gtest results in two groups of patients(x±s)

2.2 不同检测方法对肺侵袭性真菌病的诊断特异性和灵敏度比较 血清GM、BALF GM和血清G试验联合检测的特异性和灵敏度明显高于单项检测，见表2。

表2 不同检测方法对肺侵袭性真菌病的诊断特异性和灵敏度比较Table2 Diagnostic specificity and sensitivity of different detection methods for pulmonary invasive mycosis

2.3 肺侵袭性真菌病患者血实验室指标与BALF GM、G实验检测结果的相关性 肺侵袭性真菌病患者的WBC、NEU%和CRP水平与血清GM、BALF GM和血清G试验单相和联合检测的准确性正相关，见表3。

3 讨论

真菌通过感染气管、支气管和肺部组织等途径，在气道黏膜和肺部引发炎症，进而造成肺部组织出现病理性损害的现象，称之为肺侵袭型真菌病[4-6]。在该疾病中较为常见的病原菌为念珠菌为主的酵母样真菌和以曲霉为主的丝状真菌，常见于重症监护室的患者、器官移植者及血液系统肿瘤患者[7]。随着近年来广谱抗生素和糖皮质激素应用的增加，导致侵袭性真菌的发病率逐年增高[8-11]。传统的诊断方法如针吸或病理组织活检，由于其操作有创伤性、敏感度低、检出率低等因素，给临床早期诊断带来了一定困难。

表3 肺侵袭性真菌病患者血实验室指标与BALF GM、G实验检测准确性的相关分析Table3 Correlation Analysis of blood laboratory indicators of patients with pulmonary invasive fungal disease and the accuracy of BALFGM and Gtest

肺部经受真菌感染时，（1,3-β）-葡聚糖通过释放作用，出现在体液中，常通过G试验进行侵袭性真菌（念珠菌属、曲霉属、毛孢子菌等）感染的早期诊断，但只能提示有无真菌侵袭性感染，并不能确定为何种真菌。而且抗生素的应用和输注白蛋白会使患者体内葡聚糖含量增高，造成G试验假阳性率增高。GM检测的原理为：曲霉菌的菌丝在生长过程中，GM抗原从最薄弱的菌丝顶端释放，是一类最早释放的抗原，其释放的多少与菌量呈正相关。GM试验对诊断侵袭性曲霉感染特异性高，常可在患者临床症状出现前几天就获得阳性结果，也可以作为治疗效果的参考指标之一。但是免疫功能正常的患者，白细胞会吞噬半乳甘露聚糖抗原，造成GM试验假阴性率增高。血清GM、BALF GM和血清G试验联合检测特异性和灵敏度明显高于单项检测，差异有统计学意义（P＜0.05），降低了假阳性和假阴性率，弥补了各自的缺点。本实验中G试验的敏感度高于GM试验，GM试验的特异度高于G试验。若两者联合检测均阴性，可以排除侵袭性真菌感染。若两者联合检测均阳性，则侵袭性真菌感染的可能性很大，尤其是曲霉菌感染。此外实验室检测WBC、NEU%和CRP三项指标的水平越高，代表其遭受病原菌侵袭的可能性越大，因此肺侵袭性真菌病患者的WBC、NEU%和CRP水平与血清GM、BALF GM和血清G试验单相和联合检测的准确性呈正相关。

通过以上讨论分析，G试验和GM试验联合检测在对肺侵袭性真菌病的诊断中具有较高敏感性和特异性，可作为临床重要的辅助诊断指标。

参考文献

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