重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）免疫SPF鸭免疫持续期试验

冯艳男，孙德君，秦立鑫，胡瑞鸿，丛秋实

（ 哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）

禽流感病毒属甲型流感病毒，在禽类中高致病性的属于H5、H7亚型。禽流感H5属于A类传染病，给我国养禽业带来严重威胁[1-2]。水禽感染后发病率和死亡率较高。随着 H5N1Re-8株生产，重组禽流感病毒 H5亚型三价灭活疫苗（H5N1，Re-6株+Re-7株+Re-8株）在水禽上的应用逐渐增加[3-6]。本试验通过重组禽流感病毒 H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）免疫SPF鸭， 观察临床效果和抗体检测结果，以此判断该重组禽流感病毒 H5亚型三价灭活疫苗对免疫SPF鸭的保护情况，为该疫苗在水禽上应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

1.2 疫苗

试验用疫苗为市售的某厂家生产的重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）产品批号为201718，生产日期为20170209。

1.3 检验用血清

检测用Re-6株、Re-7株和Re-8株标准阳性血清、抗原购买于维科生物技术有限公司。

1.4 试验方法

选用14日龄SPF鸭20只分2组，每组10只，其中第1组10只腿部肌肉注射重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）0.5 mL·只-1，第2组对照组10只不免疫。两组SPF鸭在不同隔离器中饲养。每7 d采血一次；60 d后，每14 d采血一次，直至120 d。采血后分离的血清置于-20℃保存备用。按现行《中国兽药典》附录中的红细胞凝集抑制试验法进行HI抗体效价测定，并计算HI抗体效价平均值。

SPF鸭，购于维科生物技术有限公司，隔离器饲养。

2 试验结果

重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）免疫SPF鸭，血清中HI抗体消长规律结果见附表、附图。

附表 SPF鸭免疫禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）抗体效价平均值log 2

附图 SPF鸭免疫禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)抗体效价平均值

根据检测数据结果可知，此疫苗1次免疫SPF鸭后第7天开始产生抗体，第14天抗体效价平均值约达到6.0 log2，第35天达到抗体高峰值，此后逐渐下降，第120天抗体效价平均值下降到约7.0 log2。根据以上数据可知，一次免疫保护期为约120 d。

3 讨论

SPF鸭采用重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）免疫SPF鸭后，抗体效价平均值在同一时间点上Re-6株、Re-7株和Re-8株抗体水平稍有差异，免疫后7～35 d时抗体效价平均值差异较小，35d后Re-8株的抗体效价平均值要比Re-6株、Re-7株的抗体效价平均值要高一些。试验结果表明，1次免疫禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）对鸭具有良好的免疫原性，1次免疫可以提供4个月的保护。但此试验数据是对SPF鸭使用此疫苗的数据分析结果，在现地应根据不同品系的鸭及抗体消长情况制定合理的免疫程序。

[参考文献]

[1]GB/T18936-2003.高致病性禽流感诊断技术[S].北京:中国标准出版社,2003.

[2] 刘梅,龚建森,李文良,等.H5亚型禽流感灭活疫苗免疫后鸡血凝抑制抗体动态变化观察[J].中国家禽,2005,9（1）:136-138.

[3] 董卫峰,陈兴,徐翠红,等.禽流感（H5N1亚型、Re-1株）疫苗免疫鹅、鸭的效果观察[J].中国家禽,2009,31（11）:43-44.

[4]刘安芳.水禽,流感病毒扩大器—浅谈水禽流感的综合防制[J].中国动物保健,2008（7）:86-89.

[5] 沈欣悦,程旭,刘梅,等.重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1 RE-8株N1亚型）对鸭和鹅的免疫效果观察[J].中国动物传染病学报,2013,21（4）:40-45

[6] 王明芳,邓国华,杨孝朴,等.两株鸭源H5N1 RE-8株N1亚型禽流感病毒的序列分析及致病性研究[J].中国预防兽医学报,2012,34（11）:854-858.