猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗血清学效力检验与靶动物免疫攻毒保护相关性研究

藏玉婷，张春媛

（ 哈药集团生物疫苗有限公司研发中心，哈尔滨 150069）

猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）是引起猪腹泻的重要病原，主要引起两周龄以内仔猪发生以急性腹泻、脱水及高死亡率为特征的猪传染性胃肠炎（TGE），该病给世界各国养猪业造成了巨大经济损失[1]。我国从20世纪50年代起就有猪传染性胃肠炎的报道，并且一直在我国养猪场时有发生，尤其是冬季和早春寒冷季节常呈地方性爆发流行，给我国养猪业造成极大的危害[2]。猪流行性腹泻病毒可以引起猪流行腹泻（PED），该病多在寒冷的冬季发生，临床上主要以呕吐、严重腹泻、脱水和高死亡率为特征[3]。

早期预防对控制TGE和PED十分重要，使用疫苗预防接种有较大的实践意义，我国于1973年首次出现，1995年开始使用猪流行腹泻与猪传染性胃肠炎二联灭活疫苗和弱毒疫苗，其对该病的控制起到了积极的作用，但2010年10月以来，猪流行性腹泻在我国多个省爆发流行，并且表现出新的特征[4-6]。因此，本文分离了现地流行毒株制备猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗（JL株+HN-1株），以明确该灭活疫苗中和抗体效价与靶动物攻毒保护相关性为目的进行了研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 疫苗

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗（JL株+HN-1株），3批实验室产品，批号为201601、201602、201603，由哈药集团生物疫苗有限公司制备。

1.1.2 检验用强毒

猪传染性胃肠炎病毒JL株，批号为TGEV-Q-201601，病毒含量107.50TCID50/0.2 mL；猪流行性腹泻病HN-1株，批号：PEDV-Q-201601，病毒含量107.38TCID50/mL，由哈药集团生物疫苗有限公司制备、鉴定、保存。

1.1.3 试验动物

TGEV、PEDV中和抗体均≤1∶4母猪所产3～5日龄健康仔猪，购自黑龙江省哈尔滨市郊某猪场，品种为长白。

1.2 试验方法

1.2.1 分组与免疫

将3批疫苗分别经颈部肌肉接种于3～5日龄的仔猪20头·组-1，共免疫60头，另设20头作为对照，试验分组情况见表1。

1.2.2 抗体检测

仔猪免疫后14及21 d，分别采集10头·组-1免疫仔猪和10头对照仔猪的血液，对每组的其中5头仔猪血清中TGEV中和抗体进行测定；每组的另5头仔猪测定血清中PEDV中和抗体。

1.2.3 免疫攻毒

免疫后14 d，将测定TGEV中和抗体的仔猪分别口服猪传染性胃肠炎病毒JL株攻毒，每头2.0 mL，将测定PEDV中和抗体的仔猪分别口服猪流行性腹泻病HN-1株攻毒，每头2.0 mL；免疫后21 d，将测定TGEV中和抗体的仔猪分别口服猪传染性胃肠炎病毒JL株攻毒攻毒，每头3.0 mL，将测定PEDV中和抗体的仔猪分别口服猪流行性腹泻病HN-1株攻毒，每头3.0 mL；攻毒后连续14 d观察临床发病情况；以无临床症状作为保护，计算各组的保护率。

2 试验结果

2.1 仔猪免疫后TGEV中和抗体检测与攻毒保护结果

仔猪免疫后14、21 d，每组随机选5头仔猪分别采血，测定TGEV中和抗体，并口服猪传染性胃肠炎病毒JL株攻毒。

由表2、表3可知，免疫后14 d至少4/5免疫猪产生了≥1∶32的TGEV中和抗体；免疫后21 d所有免疫仔猪的中和抗体效价都≥1∶32，而对照仔猪的中和抗体效价均≤1∶4。攻毒结果表明，当TGEV中和抗体达到1∶32时可完全保护仔猪不发病。

2.2 仔猪免疫后PEDV中和抗体检测与攻毒保护结果

仔猪免疫后14、21 d，每组随机选5头仔猪分别采血，测定PEDV中和抗体，并口服猪流行性腹泻病HN-1株攻毒。

由表4、表5可知，免疫后14 d各仔猪均产生了低水平的PEDV中和抗体，只有少数仔猪的中和抗效价达到了1∶16；免疫后21 d所有免疫仔猪的中和抗体效价都≥1∶16，而对照组仔猪的中和抗体效价均≤1∶4。攻毒结果表明，当PEDV中和抗体效价达到达到1∶16时完全保护免疫仔猪抵抗PEDV强毒的攻击。

表1 试验仔猪分组免疫攻毒情况

表2 仔猪免疫后14 d TGEV中和抗体与攻毒保护的相关性

表3 仔猪免疫后21 d TGEV中和抗体与攻毒保护的相关性

续表

表4 仔猪免疫后14 d PEDV中和抗体与攻毒保护的相关性

表5 仔猪免疫后21 d PEDV中和抗体与攻毒保护的相关性

3 结 论

TGEV中和抗体水平与靶动物免疫攻毒保护具有相关性，当TGEV中和抗体水平≥1∶32时，能完全保护免疫仔猪抵抗TGEV强毒的攻击；达1∶22时可部分保护免疫仔猪抵抗TGEV强毒攻击。

PEDV中和抗体水平与靶动物免疫攻毒保护同样具有相关性，当PEDV中和抗体水平≥1∶16时，能完全保护免疫仔猪抵抗PEDV强毒的攻击；达1∶13时可部分保护免疫仔猪抵抗PEDV强毒攻击。

对于TGEV，免疫后14 d所有免疫仔猪均可检测到TGEV中和抗体（1∶16～1∶40），但免疫组免疫仔猪抵抗TGEV强毒的攻击保护率＞80%，免疫后21 d中和抗体效价明显上升，所有免疫仔猪的TGEV中和抗体均≥1∶16（1∶32～1∶64），能完全保护免疫仔猪抵抗TGEV强毒的攻击。而对于PEDV，免疫后14 d所有免疫仔猪均可检测到PEDV中和抗体（1∶8～1∶16），但免疫组免疫仔猪抵抗PEDV强毒的攻击保护率仅为40%，免疫后21 d中和抗体效价明显上升，所有免疫仔猪的PEDV中和抗体均≥1∶16（1∶16～1∶32），能完全保护免疫仔猪抵抗PEDV强毒的攻击。

[参考文献]

[1] 殷震,刘景华.动物病毒学（第二版）[M].北京:科学出版社,1997.

[2] 王宪文,毕英佐,于康震,等.猪传染性胃肠炎病毒基因工程研究进展[J].上海畜牧兽医通讯,2004（2）:2-4.

[3] 杨春华,王强,王毅,等.猪流行性腹泻的诊断与科学防治[J]. 畜牧与饲料科学,2009,30（7/8）:34-36.

[4] 钱永清,邹勇.猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎病及其防制[J].国外畜牧学-猪与禽,2007,27（1）:57-60.

[5] 佟有恩,马思奇,李伟杰,等.猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻二联弱毒疫苗的研究[J].中国预防兽医学报,1999,21（6）:406-410.

[6] 施标,董世娟,朱于敏,等.中国猪流行性腹泻病毒分子流行病学研究进展[J].中国农业科学,2013,46（20）:4 362-4 369.