泰州地区猪弓形虫血清流行病学调查

张步彩, 管远红, 李 永, 刘培根, 陶建平

(1. 扬州大学兽医学院, 江苏 扬州225009 ;2. 江苏农牧科技职业学院, 江苏 泰州225300)

龚地弓形虫(Toxoplasma gongdii)是一种细胞内寄生的人兽共患寄生性原虫,其寄生宿主非常广泛,包括人类在内200 多种哺乳动物和鸟类,呈世界性流行[1]。 猫首次感染弓形虫后,可向环境排出数百万个卵囊[2]。 有猫经常出入的养殖场,其弓形虫抗体阳性率往往较无猫出入的养殖场要高[3]。 弓形虫对猪有较强的致病性,猪暴发弓形虫病常可涉及到整个猪场,死亡率高达60%以上[4]。 我国猪的弓形虫病时有报道,各地猪的弓形虫血清阳性率不尽一致。 为了全面准确地掌握泰州地区猪弓形虫病的流行情况,采用间接血凝试验对泰州市的海陵、高港、姜堰、兴化、泰兴、靖江等6 个区、市的猪血清进行了弓形虫抗体检测,其目的为泰州地区猪弓形虫病的防控提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试剂 弓形虫间接血凝试验冻干抗原、标准阳性血清、标准阴性血清、稀释液,均购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.2 猪血清的采集与分离 在泰州6 个区、市选择不同养殖规模猪场采集血液,饲养头数小于100 头的统计为小型猪场,大于500 头的统计为规模化猪场[5]。 每头猪采集血液2 ～2.5 mL。 将采集的新鲜血液加到1.5 mL 无菌EP 管中,放入37 ℃恒温培养箱中静置30 min,自行析出血清后再将EP 管放入4 ℃冰箱中,充分析出血清。 3 000 r/min 离心5 min后,用移液枪吸取位于EP 管中上层的血清至另一个新的无菌EP 管,做好标记后置于-20 ℃保存,待检。 检测前,将待检血清放入56 ℃水浴锅中孵育30 min。 共采集775 份血清。

1.3 弓形虫抗体检测 在96 孔有机玻璃板上进行检测,弓形虫IHA 诊断制剂按瓶上标示毫升数加入灭菌蒸馏水稀释摇匀,1 500 r/min ～2 000 r/min 离心5 ～10 min,弃上清液,加等量稀释液摇匀,置4 ℃下静置24 h 后使用。

加稀释液：用微量加样器在96 孔有机玻璃反应板的每孔中加0.075 mL 稀释液。 每个样品加稀释液4 孔;每块板上均设阳性血清、阴性血清、空白对照。

加待检血清、阳性对照血清、阴性对照血清：第1 孔加相应血清0.025 mL。

稀释：检测时稀释至第3 孔,对照血清稀释至第7 孔。 检测的第4 孔和对照的第8 孔为稀释液对照。

加诊断液：将诊断液摇匀,每孔加0.025 mL 诊断液,加完后将反应板置微型振荡器上振荡1 ～2 min,取下反应板,盖上一块与反应板大小相近的玻璃置37 ℃作用2 ～3 h 后观察结果。

1.4 结果判定标准 在阳性对照血清效价不低于1∶1 024,阴性血清除第1 孔有前滞现象“ +”,其余孔和稀释液对照孔均为“ -”的前提下,对被检血清进行判定。 被检血清抗体效价达到或超过1∶64 为阳性。 “ ++”为阳性终点。

判定标准：“ ++++”表示100%红细胞均匀地呈膜状凝集在孔底表面,边缘整齐、致密;“ +++”表示75%红细胞呈膜状均匀凝集在孔底表面,而不凝集红细胞于孔底中央集中成很小的圆点; “ ++”表示50%红细胞凝集稀疏,不凝集红细胞于孔底中央成较大圆点;“ +”表示25%红细胞凝集孔底,不凝集红细胞于孔底中央集中成大圆点; “ -”表示所有红细胞均不凝集,孔底中央呈规则的集中最大圆点。

2 结果

2.1 不同养殖规模猪场弓形虫抗体检测结果 阳性率为7.61%。 其中,规模化猪场阳性率为4.68%(25/534),小型猪场阳性率为14.11%(34/241);育肥猪的总阳性率为9.94%,断奶仔猪总阳性率为5.24%,母猪总阳性率为8.57%,公猪阳性率为2.70%;小型猪场育肥猪、断奶仔猪、母猪阳性率分别为17.31%、9.78%、15.56%;规模化猪场育肥猪、断奶仔猪、母猪、公猪阳性率分别为6.25%、3.09%、5.26%、2.70%。 见表1。

表1 泰州地区不同养殖规模猪场弓形虫抗体检测结果

2.2 不同地区猪弓形虫抗体检测结果 泰州6 个区、市775 份猪血清弓形虫抗体检测结果：海陵、高港、姜堰、兴化、泰兴、靖江的阳性率分别为7.26%、8.22%、6.20%、6.82%、9.60%、7.56%,其中,小型猪场阳性率分别为12.77%、15.00%、13.16%、11.63%、20.00%、12.12%,规模化猪场阳性率分别为3.90%、5.66%、3.30%、4.49%、4.71%、5.81%。见表2。

3 讨论

本次调查采集泰州地区猪血清775 份,检测弓形虫抗体阳性数为59 份,占总调查猪血清样品的7.61%,孔猛等[6]对泰州兴化猪弓形虫病流行情况调查,检测113 份猪血清,阳性血清为16 份,阳性率14.2%。 本次调查,采自泰州兴化132 份血清,阳性血清9 份,占总调查血清数的6.82%,结果明显低于孔猛调查的阳性率。

表2 泰州不同地区猪弓形虫抗体检测结果

从饲养模式方面比较。 徐斌[7]调查发现,散养户猪弓形虫感染阳性率为75.46%,规模场阳性率为69.96%。 许正茂等[8]对新疆巴州部分地区猪感染弓形虫病现状调查发现,散养猪场阳性率为16.83%,规模化养殖场为9.94%,散养猪场阳性率显著高于规模化猪场。 本次调查也同样发现规模化猪场阳性率为4.68%(25/534),小型猪场阳性率为14.12%(34/241),规模化猪场的阳性率明显低于小型猪场阳性率。 原因分析：一是猫、鼠、蚊和蝇对弓形虫病传播的影响。 郑斌等[9]调查发现,新乡地区的猪弓形虫感染与猪场有猫、鼠和狗的存在、动物流产史等因素相关;二是饲养密度对弓形虫病感染率的影响。 王正松[10]调查发现,饲养密度大的猪场猪群弓形虫病的阳性率为24.8%,密度小的阳性率为16.2%;三是卫生、消毒措施对弓形虫病传播的影响。 规模化猪场做到科学的卫生与消毒措施,小型猪场则不易做到;四是规模化猪场科学应用磺胺类药物,对弓形虫有一定的抑制作用,小型猪场用药则存在无科学合理性。

从样本种类方面比较。 李英[11]等调查发现,互助县地区1 ～4 月龄猪群中弓形虫的感染率为0%,而5 ～8 月龄的感染率为11.86%,9 ～12 月龄的感染率为18.91%,与1 ～4 月龄的猪相比差异极显著,表明随着月龄增加其感染率有上升趋势。 王正松[10]调查发现,不同周龄对弓形虫感染率不同,7周龄以内猪群的感染率较低, 为8.8% (0 ～46.2%)、12 ～16 周龄为16.5%(0 ～44.4%)。 本次调查发现,小型猪场育肥猪、断奶仔猪、母猪阳性率分别为17.31%、9.78%、15.56%;规模化猪场育肥猪、断奶仔猪、母猪、公猪阳性率分别为6.25%、3.09%、5.26%、2.70%。 无论是小型猪场还是规模化猪场,育肥猪阳性率最高,这与李英、王正松的调查相一致。