牛羊布病的诊断及防治

通辽市科尔沁左翼后旗农畜产品质量安全检验检测站 028100

1 病原

布鲁氏菌为革兰氏阴性短杆菌，大小为0.6～1.3um×0.5～0.7um，散在分布，无芽孢及鞭毛，在条件不利时有形成夹膜的能力。该菌难以着色，吉姆萨染色呈紫色。该菌属包括6个种19个生物型。按生化和血清学反应可分为马尔他布鲁菌(羊型)、流产布鲁菌(牛型)和猪布鲁菌(猪型)，另外还有森林鼠型、绵羊附睾型和犬型。感染人者主要为羊、牛和猪型。其中致病力最强的为羊型，其次为猪型，牛型最弱。传染源是患病的羊、牛、猪，病原菌主要存在于病畜的组织、粪便、尿液、乳汁、产道分泌物、羊水、胎盘及皮毛内。消化道、呼吸道和生殖道是主要的感染途径，也可通过损伤的皮肤和黏膜感染，常呈地方性流行。人主要通过皮肤、黏膜、消化道和呼吸道感染，尤其以感染羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌最为严重。猪种布鲁氏菌感染人较少见，犬种布鲁氏菌感染人罕见，绵羊附睾种布鲁氏菌和沙林鼠种布鲁氏菌基本不感染人。

2 临床症状

（1）牛的潜状期为2周至6个月。母牛最明显的临诊症状是流产，通常发生于妊娠后的6～8个月。流产前数日表现出分娩预兆，阴道黏膜潮红肿胀，有粟粒大红色的结节，阴唇及乳房肿胀，不久即发生流产。流产胎儿多为死胎，有时产下弱犊，往往存活不久。大多数母牛流产后伴发胎衣停滞和子宫内膜炎，从阴道内流出污秽不洁的红褐色恶臭分泌物，持续2～3周，有的病例长期不愈，不能妊娠。非妊娠牛常常发生关节炎和局部肿胀，多见于膝关节。病公牛发生睾丸炎、附睾肿胀、关节炎及局部肿胀，配种能力降低。牛布鲁氏菌病的病程为慢性经过，可延续数年之久。明显症状消失后，如不伴发慢性子宫炎可自愈。

（2）妊娠病母羊的主要临床症状是流产，多发于妊娠后的3～4个月。流产前的症状一般不明显，部分病羊在流产前2～3天呈现胃肠弛缓和精神沉郁症状，常喜伏卧，食欲减退，饮欲增加，体温升高，阴道流出黏液性或黏性血样分泌物，还可能有乳房炎、关节炎、滑膜炎及支气管炎症状。病公羊经常发生睾丸炎、附睾炎及多发性关节炎。

3 诊断

（1）母牛最显著的临诊症状是流产。流产前数日除表现出阴唇和乳房增大、肷部与肋部下陷及生殖道发炎等分娩预兆外，流产时胎水多清薄，但有时浑浊含有脓样絮片。公牛有时可见阴茎潮红肿胀，更常见的是睾丸炎、附睾炎、腱鞘炎和滑液囊炎。妊娠母羊流产常发生在妊娠后的90～110天，食欲减退、精神萎顿、起卧不安，阴道中流出黄色或灰黄色黏液，流产母羊发生子宫内膜炎，排污秽恶露。也有早产、产死胎、乳房炎、关节炎、跛行、公羊睾丸炎和附睾炎等。

（2）病理学诊断。该病的主要病变为生殖器官的炎性坏死，脾、淋巴结、肝、肾等器官形成特征性肉芽肿(布病结节)，有的可见关节炎。胎儿主要呈败血症病变，浆膜和黏膜有出血点和出血斑，皮下结缔组织发生浆液性和出血性炎症。

（3）细菌学诊断。流产胎儿的胎衣和胃内容，病畜的肝、脾、乳房、腹股沟及下颌骨等处的淋巴结，子宫和睾丸等组织都是布鲁氏菌分离的好材料[1]。将其制成涂片，使用柯兹罗夫斯基染色法染色，通过显微镜观察，可见单个、成对或成堆存在的红色球杆状细菌，其他细菌被染成绿色或蓝色[2]。也可将采取的病料接种于培养基、敏感的动物或未受精的鸡卵进行分离培养。虽然细菌学检查是确诊人畜间布鲁菌病最可靠的方法，可鉴定布鲁菌的各生物型，但是组织中含布鲁菌的量比较少，又很难获得未污染的样本[3]。进行血和组织培养时，因敏感性低、耗时和生物安全要求较高等因素，使这种诊断方法不宜推广，常规检测应用时受到了限制。

（4）血清学诊断。血清学诊断的基本原理是用已知的布鲁菌抗原检测被检动物血清中的抗体确定是否被感染，结合临床症状等分析发病情况。临床中常用的血清方法有虎红平板凝集试验和试管凝集试验等，这些血清学方法各具优点、各有不足，所以临床中同时使用几种方法来综合分析其检测结果。

①虎红平板凝集试验。取一洁净玻璃板，用玻璃铅笔划分为4cm2的方格，在玻璃板上标记各受检血清号，然后加相应血清30ul，接着在受检血清旁滴加抗原30ul，用牙签将各格中的血清和抗原混匀，轻轻转动玻璃板，5分钟后在对照组完全成立的条件下判读结果。

徐春厚等人在1995年报道，使用虎红平板凝集试验、试管凝集试验、二巯基乙醇试管凝集试验和致敏红细胞凝集试验检测了32份奶牛血样，比较了这4种诊断方法的优缺点、符合率和检出率，结果发现虎红平板凝集试验检出的阳性率最高，占90.63%，其他3种诊断方法基本类似；这4种诊断方法的阴阳性符合率仅为50%，二巯基乙醇试管凝集试验与试管凝集试验，这两者与致敏红细胞凝集试验的符合率偏低。由此看出，诊断布鲁菌病不可单用一种检测方法来判定，必须结合几种检测方法来综合判定，因为有可能出现非特性结果[4]。1981年吕南平报道，虎红平板凝集试验与抗球蛋白试验要比试管凝集试验、半胱氨酸试验敏感性高，而虎红平板凝集试验比抗球蛋白试验的操作程序要简单得多。虎红平板凝集试验简便易行、成本低廉，适用于布鲁菌病大面积检测和流行病学调查，我们国家将其作为布鲁菌病诊断的初筛检测方法。

②试管凝集试验。用0.5%石炭酸生理盐水稀释牛血清 1∶25、1∶50、l∶100 及 l∶200，检验羊血清时，稀释度为 1∶12.5、l∶25、1∶50 及 1∶100， 稀释后加入 l∶20 倍稀释抗原，置37～38℃温箱中20～22小时，取出在室温中静止2小时判定结果。试管凝集试验是各国诊断布鲁菌病的常规血清学诊断方法，至今仍在临床中广泛使用。1997年冯元璋描述，试管凝集试验是比较敏感、特异和稳定的诊断方法，它可以检测人畜血清中三类免疫球蛋白：IgG、IgM 和 IgA，IgG2、IgM 是其主要检测的抗体，而且此诊断方法检测IgM的敏感性明显高于IgG2，因此试管凝集试验可作为人畜间布鲁菌病的早期诊断[5]。此诊断方法简便，判定容易，特异性较强，具有很高的诊断价值，是我国诊断布鲁菌病法定的诊断方法。但是此诊断方法因受各种因素影响，可能会出现假阳性或假阴性的结果，而且有些感染动物的抗体滴度未必都能达到检测水平，所以单独使用此诊断方法容易造成漏诊和误诊，因此应采取综合诊断为妥。

③琼脂扩散试验。此项试验技术已成功用于检测绵羊附睾种布鲁菌病沉淀抗体，被列为检测绵羊布鲁菌病的常规方法，但是不能区别绵羊附睾种还是羊种布鲁菌感染。另外，此试验与补体结合试验相同，主要检测的是IgG型抗体，所以两者的检测结果比较一致。该试验方法简单易行，特异性较高，但敏感性较低，因此对阳性病畜有诊断意义。但是阴性病畜不能排除无布鲁菌病，使之在临床应用上受到了限制。

检疫和诊断布鲁菌病主要采用血清学和细菌学方法。细菌培养耗时，而易污染周围环境，存在实验室人员感染的风险。培养布鲁菌要求在生物安全三级实验室进行，细菌培养方法当前很少采用。血清学检测方法种类繁多，是布鲁菌病流行病学监测的标准方法。

4 防治措施

（1）防止外来牛羊布病感染者。控制该病传入最好的办法是自繁自养。必须引进种畜或补充畜群时，要严格执行检疫，将引进种畜隔离饲养2个月，然后进行布病检测，全群2次免疫生物学检查为阴性者才可以与原有牲畜混群饲养。

（2）做好感病牛羊的净化工作。定期检疫，每年至少检疫1次，一经发现带菌者立即淘汰处理。对已经感染的牛羊做好无害化处理，同时将圈养感染布病牛羊的圈舍、产生的垃圾、用具、运输工具以及周围的建筑物进行严格消毒。同时工作人员也要做好自身的防护，消毒时要着防护服、口罩等。

（3）做好牛羊布病的预防与检疫。由于牛羊布病的感染率的逐年递增，这严重威胁到牛羊养殖业的发展和当地人们的健康状况。因此必须提前预防，做好牛羊的免疫接种工作。目前国内布病主要疫苗有A19、M5、S2，由于抗体活性较强，A19、M5 不能用于怀孕动物。另外还要对牛羊进行定期的检疫工作，防止后期由于其他原因造成的布病感染。

（4）做好人员预防并加大宣传力度。人类布病的预防，特别要注意职业性感染，凡在动物养殖场、屠宰场、动物产品加工厂的工作者以及兽医、实验室工作人员，必须严守防护制度，尤其在子畜大批生产季节，更要特别注意，做好相应的防护措施；患病动物乳肉食品必须灭菌后食用；必要时可用疫苗（如104M苗）皮上划痕接种，接种前应进行变态反应试验，阴性反应者才能接种。同时各级地方政府要加强布病对牛羊养殖、人类健康危害以及防治措施的宣传力度，提高人们对布病危害与防治的认识。另外还要提高防疫工作人员的防治水平，增强工作人员自身的防范能力，避免工作人员感染布病。切断动物源布鲁氏菌病，便可减少人间布鲁氏菌病的发生率。因此，防治和根除动物布鲁氏菌病是控制人间布鲁氏菌病的关键。

参考文献：

［1］吴冬玲.布鲁氏菌VirB8PCR诊断方法的建立与应用及Ery基因的克隆与序列分析[D].新疆农业大学,硕士论文,2008.

［2］尚德秋,于恩庶,赵恒云,等.布鲁氏菌病实验诊断的非特异性反应及其鉴别[M].北京：海洋出版社,1995.

［3］李福兴,尚德秋.实用临床布鲁菌病[M].哈尔滨:黑龙江科学技术出版社,2010.

［4］黄建,李恪梅.布病防治工作中检测制剂和技术的新动向[J].中国地方病杂志，1999,14(2):80-82.

［5］齐景文.布鲁氏菌病常用诊断方法应用现状及评价[J].中国畜牧兽医,2006,33(8):70-73.