“中亚生血”

秦玲　杨日明　薛蔷　曹丹　张晓舟　谢勇

摘要：右旋糖酐铁是由氢氧化铁与右旋糖酐络合形成的络合物，右旋糖酐铁注射液为深褐色的胶体溶液，pH5.2～6.5，可用于防治仔猪缺铁性贫血。但目前绝大部分市场在售的右旋糖酐铁注射液都存在刺激性强，可导致仔猪注射部位充血、水肿、硬结、变性或坏死等；另外，绝大部分市场在售的右旋糖酐铁注射液在仔猪体内吸收差，往往在注射部位肌肉上出现深深的褐色沉积。国外研究证实，右旋糖酐铁注射液由于右旋糖酐铁的分子量和蛋白质、重金属等杂质含量过高，导致仔猪过敏反应和铁吸收差。沈阳中亚兽药业有限公司科研中心通过2年科研攻关及升级生产工艺，采用纳米制药工艺和纳滤精制技术制成“中亚生血”右旋糖酐铁注射液（10%和5%）。本研究通过临床实践证实，“中亚生血”右旋糖酐铁注射液具有吸收好、对肌肉刺激性小、安全性强，及促进仔猪生长、预防白痢和提高成活率等优点。

關键词：右旋糖酐铁注射液；中亚生血；纳米制药；纳滤技术

仔猪缺铁性贫血1月龄以内（特别是2～3周以内的），初生仔猪每天需要15毫克铁，但每天从母乳中最多可获得1毫克铁，如果不及时补铁便可出现贫血症。患贫血症的哺乳仔猪血红蛋白水平降低、精神萎靡、生长停滞、食欲减退、皮肤和粘膜苍白、被毛粗乱、轻度腹泻，且免疫力减弱易生病，严重者死亡。根据笔者临床经验，哺乳仔猪缺铁性贫血的发病率约40%、死亡率约18%。

右旋糖酐铁是由氢氧化铁与右旋糖酐络合形成的络合物，右旋糖酐铁注射液为深褐色的胶体溶液，pH5.2～6.5，可用于防治仔猪缺铁性贫血。在临床实践中，通常选用右旋糖酐铁注射液给予7日龄仔猪深部肌肉注射1～2毫升；缺铁严重的仔猪，可在间隔7天后再肌肉注射1次。但让养殖者困惑的是，绝大部分市场在售的右旋糖酐铁注射液都存在刺激性强，可导致充血、水肿、硬结、变性或坏死等；另外，绝大部分市场在售的右旋糖酐铁在仔猪体内吸收差，往往在肌肉注射部位出现深深的褐色沉积。Critchley等国外学者通过研究发现，右旋糖酐铁注射液由于右旋糖酐铁分子量和蛋白质、重金属等杂质含量过高是导致仔猪过敏反应和铁吸收差的主要因素。因此，改进右旋糖酐铁注射液生产工艺，降低蛋白质、重金属和高分子质量右旋糖酐铁的含量是降低仔猪过敏发生率和提高铁吸收率的关键。针对上述问题，沈阳中亚兽药业有限公司科研中心通过2年科研攻关及升级生产工艺和数十次的临床试验，“中亚生血”（10%或5%右旋糖酐铁注射液）成功上市。

1材料与方法

1.1“中亚生血”大白兔局部刺激实验

受试药品：10%“中亚生血”右旋糖酐铁注射液和市售普通的右旋糖酐铁注射液（10%）。

试验设计：将18只年龄、体重相近的雄性健康大白兔随机分为6个处理组，每组3只，将其中3个处理组的大白兔分别肌内注射1倍剂量（1毫升）、2倍剂量（2毫升）和5倍剂量（5毫升）的“中亚生血”右旋糖酐铁注射液（10%）；另外3个处理组分别肌内注射1倍剂量（1毫升）、2倍剂量（2毫升）和5倍剂量（5毫升）的市售H品牌右旋糖酐铁注射液（10%）。肌内注射刺激试验在右侧股四头肌注入，并在左侧股四头肌注入等体积的灭菌生理盐水作对照。注射后每间隔6小时观察1次皮肤表面的反应及变化。48小时后处死，剖开背部皮肤和股四头肌，观察注射部位的反应情况，按表1的评分标准确定反应级数，检查注射部位是否产生充血、水肿、硬结、变性或坏死等局部刺激性反应。

1.2“中亚生血”大白兔注射部位未吸收Fe含量测定

体重约2公斤健康大白兔12只，6只注射“中亚生血”右旋糖酐铁注射液（10%），另6只注射市售H品牌右旋糖酐铁注射液（10%）。剪去后腿内侧毛，消毒注射部位，自半腱肌远侧末端插入针头，穿过缝匠肌注入股内肌中，每只家兔一侧后腿注射供试品，另一侧作为对照，剂量按每公斤体重注射含铁10毫克的供试品。给药7天后，处死大白兔，切开给药侧后腿皮肤，仔细检查注射部位的褐色沉积程度。取出注射部位呈色的股内肌；对照侧后腿，取出与给药侧后腿相应部位与大小的股内肌分别匀浆后，移至1000毫升烧杯中，加2摩尔/升氢氧化钠溶液75毫升和水适量，使没过肌肉，加盖煮沸至无固体物存在，放冷，小心加硫酸50毫升，加热至沸，分次滴加硝酸约10毫升，至无炭化物出现加热除去过量硝酸，放冷，转移至250毫升量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，分别作为供试品溶液与对照溶液标准曲线的制备精密量取铁单元素标准贮备液（每1毫升中含铁100毫克）0毫升、0.5毫升、2毫升、3毫升，分别置100毫升量瓶中，加20%构橼酸溶液10毫升、巯基乙酸溶液1毫升，摇匀，滴加浓氨溶液至紫红色不再加深，用水稀释至刻度。以0管为空白，照紫外可见分光光度法在530纳米波长处测定吸光度，以含铁量（毫克）与相应的吸光度计算直线回归方程测定法精密量取供试品溶液和对照溶液各5毫升，分别加硫酸3毫升，加热至发烟，加硝酸适量继续加热至溶液呈无色，放冷，加水20毫升，煮沸3分钟，放冷，加20%酸溶液10毫升、巯基乙酸溶液1毫升，滴加浓氨溶液至紫红色不再加深，转移至100毫升量瓶中，用水稀释至刻度，分别作为供试品测定溶液与对照测定溶液，以标准曲线项下0管为空白，照紫外可见分光光度法在530纳米的波长处分别测定注药腿肌的吸光度An与对照腿肌的吸光度A对。由直线回归方程查得铁样和铁对的含量，求出平均值，按下式计算：注射部位未吸收铁含量=（铁样铁对）÷注射量（铁）×50×100%。

1.3“中亚生血”对仔猪增重、发病率及死亡率的影响

本试验于沈阳市畜牧兽医科学研究所科研种猪场进行，选择67头3日龄三元育肥猪，并将每窝仔猪随机区分试验组（偶数）与对照组（奇数）。供试仔猪统一编制耳号、分组记录，对试验组仔猪（33只）逐头注射“中亚生血”右旋糖酐铁注射液（10%）1毫升/头，对对照仔猪（34只）逐头注射市售H品牌右旋糖酐铁注射液（10%）1毫升/头。在相同的饲养管理条件下，记录各组发病（白痢）、死亡头数、体重，废弃记录不全、中途死亡的个体数，并用血红蛋白检测仪测定21日龄仔猪血液血红蛋白（Hb）含量。

2试验结果

2.1“中亚生血”无刺激作用

1倍剂量（1毫升）、2倍剂量（2毫升）和5倍剂量三组大白兔皮下注射和肌内注射“中亚生血”后48小时内健康状况均良好且活动正常，皮肤表面也未见异常反应，刺激反应级数和对照组（灭菌生理盐水）相同均为0级（给药部位无明显反应），注射部位药液吸收良好，注射局部无充血、水肿、硬结、变性或坏死等现象。市售H品牌右旋糖酐铁注射液呈2级刺激反应（给药部位中度充血，直径在1.0厘米以下）。实验证明，“中亚生血”右旋糖酐铁长效注射液在推荐剂量下肌内注射具有良好的安全性。

2.2“中亚生血”铁吸收效果佳

“中亚生血”大白兔注射部位未吸收Fe含量平均为8.42%，市售H品牌大白兔注射部位未吸收铁含量平均为22.28%，两组差异极显著（p<0.0001），详见表2。

2.3“中亚生血”预防仔猪贫血、促进增重、减少发病率及死亡率

27日龄和54日龄时，“中亚生血”组仔猪体重比市售H品牌组分别多增加0.55公斤、2.08公斤，提高11.39%、19.53%，证实“中亚生血”右旋糖酐铁注射液有显著的促生长作用。27日龄和54日龄时，“中亚生血”组仔猪的Hb含量比市售H品牌组分别增加17.98克/升和19.46克/升，证实“中亚生血”右旋糖酐铁注射液能有效预防仔猪贫血。27日龄和54日龄时，“中亚生血”组仔猪的白痢发生率比市售H品牌组分别减少26.12%、8.56%，证实“中亚生血”右旋糖酐铁注射液能有效防治仔猪白痢。试验结束时，“中亚生血”组仔猪死亡2头，成活率为93.94%，而市售H品牌组仔猪死亡7头，成活率为79.41%，证实“中亚生血”右旋糖酐铁注射液能提高仔猪免疫力和成活率。

3讨论

铁是仔猪造血和防治营养性贫血的必需元素，参与血红蛋白与肌蛋白合成，进而加快体内氧循环和提高增重速度。据文献报道，出生时仔猪体内仅含约50毫克铁，每天每头仔猪至少需要7毫克才能避免贫血，但母猪乳汁中含铁量很少（约2毫克/升），仔猪每天仅能从母乳中获得1毫克铁的补充。右旋糖酐铁因毒副作用小、性质稳定、溶解性好、铁含量高等优点而被当作首选的补铁剂应用于养猪生产中。从表3看出，“中亚生血”组仔猪体重比对照组提高19.53%，证实“中亚生血”右旋糖酐铁注射液有显著的促生长作用。7～10日龄仔猪体内铁含量开始下降，开始出现拉白痢、贫血、消瘦等营养性疾病，发育缓慢、停滞或死亡。表3结果证实，3日龄注射后至27日龄时，“中亚生血”組仔猪的白痢发生率比对照组减少26.12%，且仔猪毛皮光亮滑润、活泼好动。

高分子质量右旋糖酐铁超标会增加仔猪发生过敏的概率，限制了右旋糖酐铁在养猪业中的应用。所以，提高生产工艺水平，减少右旋糖酐铁中蛋白质、重金属和高分子质量右旋糖酐含量，是降低临床过敏发生率的关键。沈阳中亚兽药业有限公司科研中心通过2年科研攻关及升级生产工艺，采用纳米制药工艺减少高分子质量右旋糖酐含量，采用纳滤技术精制注射液和去除其中的无机盐、蛋白质和重金属等杂质，除盐和浓缩同时完成。通过表1和表2数据证实，“中亚生血”通过上述工艺升级，实现了铁吸收效果好、对肌肉刺激性小、安全性强的临床效果。