液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中尼卡巴嗪残留标志物

□ 张宗明 欧锐君 罗羚丰 广州京诚检测技术有限公司

1 前言

尼卡巴嗪是4, 4-二硝基均二苯脲（DNC）和2-羟基-4,6-二甲基嘧啶（HDP）组成的复合物，其中残留标志物是DNC。尼卡巴嗪是一种高效、广谱、稳定的抗球虫药物，主要用于预防鸡和火鸡球虫病[1]。

目前，动物性食品中尼卡巴嗪标志残留物的测定标准有《食品安全国家标准 动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB 29690-2013）[2]和《食品安全国家标准 鸡可食性组织中尼卡巴嗪残留量的测定 高效液相色谱法》（GB 29691-2013）[3]。 其 中 GB 29690-2013的前处理中净化步骤只有正己烷脱脂，净化不充分，净化效果不佳；而GB 29691-2013用C18固相萃取柱净化（SPE），SPE净化效果虽好，但是每个样品净化需要耗时约30分钟，检测时间较长。

QuEChERS，是一种快速（Quick）、简单（Easy）、成本低（Cheap）、高效（Efficient）、可靠（Rugged）、安全（Safe）的前处理方法，是目前一种相当成熟前处理手段[4，5，6]，《食品安全国家标准 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱联用法》（GB 23200.113-2018）[7]已采用QuEChERS法作为净化方法。本文在GB 29690-2013的基础上，结合QuEChERS法，建立一种检测鸡蛋中尼卡巴嗪标志残留物DNC的准确便捷方法。

2 材料与方法

2.1 主要仪器

液相色谱-串联质谱仪（沃特世，TQ-S，配ESI离子源）。

2.2 试剂

乙腈（色谱纯）；甲酸（色谱纯）；正己烷（色谱纯）；无水硫酸钠（分析纯）；QuEChERS净化管（50 mg乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA），150 mg硫酸镁，50 mg十八烷基硅烷键合硅胶（C18），2 mL；上海安谱）；标准物质见表1（上海安谱）；鸡蛋（购于当地市场）。

2.2.1 标准溶液配制

标准储备液（100 μg/mL）：称取DNC 0.001 0 g，用二甲基甲酰胺定容10 mL。标准中间液（1 μg/mL）：准确量取标准储备溶液100 μL，用乙腈定容至10 mL。内标标准储备液（100 μg/mL）：称取DNC-D80.001 0 g，用二甲基甲酰胺定容10 mL。内标中间液（1 μg/mL）：准确量取内标标准储备溶液100 μL，用乙腈定容至10 mL。标准溶液使用液：用乙腈将标准中间液稀释至下列浓度：10、20、40、60、80、100 μg/L，然后加入 10 μL内标中间液。

表1 标准品信息

2.3 方法

2.3.1 提取

参照《食品安全国家标准 动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB 29690-2013），称取2 g试样置于50 mL具塞离心管中，加10 μL内标中间液，加无水硫酸钠2 g，乙腈8 mL，于旋涡混合器上混匀30 s，待净化。

2.3.2 净化

提取液5 000 r/min离心10 min，转移至另一离心管中，40 ℃氮吹至干，加乙腈饱和的正己烷1 mL，于旋涡混合器上混匀10 s，再加乙腈1 mL涡旋混合，于40 ℃水浴中静置5 min，以2 000 r/min离心5 min，取下层清液，转移至QuEChERS净化管中，涡旋30 s，静置30 s，过0.22 μm微孔滤膜后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

2.3.3 色谱条件

2.3.4 结果计算

鸡蛋中DNC含量以公式（1）计算：

W——鸡蛋中DNC含量（μg/kg）

m——样品质量（g）

C——提取液浓度（μg/L）

V——定容体积（mL）

f——稀释倍数

3 结果

3.1 线性范围

含量在5～50 μg/kg范围内，工作曲线为Y=2.61577x+0.73884，相关系数为0.996，线性良好。

3.2 回收率和精密度

在阴性样品进行10 μg/kg和40 μg/kg两个含量水平进行加标回收实验，回收率范围为89.7%～96.1%；在阴性样品进行30 μg/kg水平进行6次加标回收实验，相对标准偏差为2.68%。

3.3 检出限

以3倍信噪比对应的DNC含量为检出限，以10倍信噪比对应的DNC含量为定量限，此方法检出限和定量限分别是0.10 μg/kg和0.33 μg/kg。

3.4 色谱图与保留时间

在2.3.3的色谱条件下，由DNC色谱图（图1）可知，DNC保留时间为3.10 min，峰型较好，无干扰峰，色谱条件可靠。

4 结论与讨论

符合《实验室质量控制规范 食品理化检测》（GB/T 27404-2008）[8]和《兽药残留实验室质量控制规范》（NY/T 1896-2010）[9]要求，可满足日常检测的质量控制要求。

农业部235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》[10]规定了鸡的肌肉、皮、脂、肝和肾中尼卡巴嗪最大残留量不可超过200 μg/kg。目前，尚未制定在鸡蛋中的最大残留量，但此方法检出限远低于200 μg/kg，此方法可以为市场上蛋类食品质量安全检测提供参考。

GB 29690-2013中，只用正己烷对样品进行脱脂处理，并没有其他净化手段，本法在GB 29690-2013的基础上增加QuEChERS净化，提高了净化效果，降低杂质对检测结果的影响和对仪器的污染。另外，QuEChERS高效便捷，不会显著增加检测时间，可广泛应用于食品中农药和兽药残留检测。

表2 流动相和梯度洗脱程序

表3 定性离子对、定量离子对、锥孔能量、碰撞能量

图1 标准溶液中 DNC 和内标（DNC-D8）的特征离子色谱图