三颗针颗粒的急性和亚慢性毒性试验报告

李超，房春林，杨海涵

（1.四川省新兽药工程技术研究中心，四川 温江 611130；2.成都农业科技职业学院，四川 温江 611130）

目前，由大肠杆菌等细菌导致的腹泻是畜禽养殖场广泛流行的疾病，腹泻严重者甚至脱水死亡，给养殖户造成了较大的经济损失。为防治畜禽细菌性腹泻，常选用喹诺酮类、氨基糖苷类、硝基呋喃类、喹恶啉类及磺胺类等化学药物。但由于长期不规范用药，造成临床上产生了大量的耐药菌，这给临床控制此类疾病带来巨大的困难，人们迫切需要疗效较好、快速缓解症状、对肠道有较好保护作用，尤其能治疗耐药性细菌引起的畜禽腹泻的药物。三颗针颗粒是纯中药制剂，其主要有效成分为小檗碱，有清热燥湿、抗菌消炎、泻火解毒等功效。实验室前期临床应用发现，该中药制剂对细菌性腹泻和胃肠炎等有不错的疗效。本试验旨在研究三颗针颗粒对小鼠的急性、亚慢性毒性，观察该制剂的毒性作用，以对药物的安全性做出客观评价，为其临床应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试剂与设备 谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、尿酸氨（BUN）、肌酐（CRE）试剂盒，清洗液，稀释液；主要设备包括BS-180全自动生化分析仪、BC-2800Vet兽用全自动血液细胞分析仪。以上产品均来自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司。

1.2 试验药物 三颗针颗粒，含1g生药/g颗粒，由四川省新兽药工程技术研究中心自制。

1.3 实验动物 SPF级昆明系小白鼠120只，雌雄各半，体重18～22g，由四川省医学科学院实验动物研究所养殖研究室公司提供，实验动物许可证号为：SYXK（川）2013-16。动物检疫驯化时间为7d，室温20～25℃，相对湿度60%，自然光照。

1.4 急性毒性试验 根据文献报道[1]，采用上下法测定三颗针颗粒的LD50，详细记录动物毒性反应情况和死亡情况，用AOT425StatPgm软件计算半数致死量（LD50）及其近似置信区间。

1.5 亚慢性毒性试验

1.5.1 剂量与分组 将小鼠随机均分为4组，即三颗针颗粒高、中、低剂量组和生理盐水对照组。根据三颗针颗粒的用药原则，采用口服灌胃，按体重和分组计算给药量并定时给药，每日1次，连续给药42d，要及时按体重变化调整给药量。具体剂量和分组见表1。

表1 亚慢性毒性试验分组

1.5.2 检查项目 （1）一般指标：每天观察小鼠的采食、饮水及健康状况，及时记录和分析小鼠出现的各种变化。

（2）体重：饲养期间，每周称量小鼠体重，详细记录。

（3）血常规和血清生化指标：42d给药结束后，测定红细胞数（RBC）、白细胞数（WBC）、血红蛋白量（HGB）、红细胞比积（HCT）、血小板数（PLT）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）和肌酐（CRE）。

（4）脏器指数：42d给药结束后，对照组和高剂量组分别取5只雌鼠、5只雄鼠处死，称重。剖检处死的小鼠，取主要器官——心、肝、脾、肺、肾，称重，计算各脏器的相对重量（脏器重/体重），即脏器指数。

（5）组织病理学：对取下来的小鼠心、肝、脾、肺、肾进行取样、包蜡、切片，进行组织病理学观察。

（6）数据处理：所有数据均采用SPSS软件进行统计学处理。

2 结果

2.1 急性毒性试验 本实验条件下，三颗针颗粒对小鼠灌胃给药的LD50为149.9g生药/kg，95%的近似置信区间为88～175g生药/kg。给药后，小鼠的急性毒性症状主要表现为自发活动减少、俯卧、呼吸急促，严重的死亡，解剖和病理检查发现主要脏器无异常。

2.2 亚慢性毒性试验

2.2.1 一般状况 试验期间，药物各个剂量组和阴性对照组的小鼠，其外观体征、行为活动、粪便性状均正常，口、耳、眼、生殖器无异常分泌物，也未见其他异常症状，未出现死亡。体重与对照组相比无显著差异（P＞0.05），结果见表2。

表2 亚慢性毒性试验中小鼠的体重变化g

2.2.2 血常规及血液生化指标 42d给药结束后，三颗针颗粒各剂量组小鼠的血常规和血液生化指标与对照组相比差异不显著（P＞0.05）。结果见表3。

表3 亚慢性毒性试验中小鼠血常规和血清生化指标的变化情况

2.2.3 剖检观察和脏器指数 42d给药结束后剖检小鼠，未发现可疑病变，三个不同剂量组的各脏器指数与对照组相比均无显著差异（P＞0.05）。结果见表4。

表4 亚慢性毒性试验中小鼠的脏器指数变化

2.2.4 组织病理学 将三颗针颗粒高剂量组和对照组小鼠的心、肝、脾、肺、肾组织进行病理学切片检查，发现各器官形态结构正常，无异常的病理学变化。

3 讨论

3.1 急性毒性试验 急性毒性试验是指短时间内对动物单次或多次给药，观察给药后动物产生的毒性反应及死亡情况，引起半数致死的剂量为半数致死剂量，用LD50表示，这是评价兽药急性毒性的常用方法[2]。进行药物急性毒性试验评价的一个重要指标就是评价半数致死量与药物毒性大小的相关性[3]，本次试验LD50为149.9 g生药/kg，大于15 g生药/kg，根据毒性物质等级划分，属于无毒性。

3.2 亚慢性毒性试验 评价某种药物的毒性，除了进行急性毒性试验外还要进行亚慢性毒性试验。通过该试验可获得实验动物连续多日接触较大剂量药物所出现的中毒效应，为临床使用提供参考依据[4]。体重和脏器指数值的升高或降低可以不同程度地反映药物对动物的影响，也是衡量药物毒性的一个重要指标。在连续用药42d后，各组小鼠的体重与对照组相比均无显著差异（P＞0.05），说明三颗针颗粒对小鼠体重和脏器指数的影响很小。

血常规检测主要是对血液中的红细胞、白细胞及血小板这三个系统进行量和质的检测与分析，是最基本的血液检验，其数值高低能反映动物在营养、感染或组织损伤方面的情况。肝脏和肾脏是机体重要的代谢器官，多数药物都要经过肝脏转化然后经过肾脏代谢排出体外，ALT、AST和TP活性是反映肝功能的重要指标[5]，肌酐和尿素氮是反映肾功能的两个重要指标。本试验中各给药组小鼠的血常规和血液生化指标跟对照组相比无显著性差异，各项指标和药物剂量也没有呈现出规则变化，说明三颗针颗粒对小鼠肝、肾无损伤。

4 结论

通过急性和亚慢性毒性试验，得出三颗针颗粒属于实际无毒级，说明该中药制剂在临床长期使用时不会对动物产生毒性作用。

[1] 张方舟，王益，颜文君，等.上下法与传统急性毒性法测定薄荷油LD50的试验研究[J].河南科技大学学报（医学版），2012，30（4）：268-271.

[2] 农业部兽药审评委员会.兽药试验技术规范汇编[M].北京：化学工业出版社，2012：84.

[3] 易爱玲，邹福生，魏盈盈，等.复方金沙利胆颗粒药效学及急性毒性研究[J].中国临床药理学杂志，2015，31（7）：560-562.

[4] 郭迎春，邸静，胡松华，等.人参叶口服液对大鼠的亚慢性毒性试验[J].动物医学进展，2011，32（5）：59-63.

[5] 王贵波，王东升，谢家声，等.射干地龙颗粒对鸡的亚慢性毒性试验[J].湖北农业科学，2013，52（4）：878-882.