定性粪检寄生虫的几种方法

张 颖，金美花，杜玉玲

（ 吉林省延边州动物疫病预防控制中心，吉林 延边 133002）

定性检查就是对研究对象进行“本质”方面的检查，即确定是什么，而不注重量的多少。很多方法可以诊断出动物患何种或哪些寄生虫病。

1 直接涂片法

直接涂片法是将少量粪便捣碎涂布于1滴生理盐水中，该方法简单、快速。门诊检查时，许多小动物从业者通常将黏附在直肠温度计上的粪便直接涂在载玻片上，并加盖玻片以提高光学效果、抑制液体流动并防止沾污显微镜的物镜。利用盐水（而不是水）是为了防止原虫滋养体的溶解，因为当渗透压改变时虫体容易变形。由于制成的混悬液必须稀薄到足以允许显微观察的程度，故只能检查少许粪便，该方法的唯一缺点就是检出率低。阴性结果不可靠，但阳性结果与其他更有效的浓集技术获得的结果一致。实际上，当处理脆弱的虫体如线虫幼虫和原虫滋养体时，其会受漂浮液的影响而变形或被破坏，或者相对密度大的虫卵在漂浮液中无法漂浮，在此情况下涂片法比浓集法更具优势。新鲜粪便的直接涂片可以观察到阿米巴虫、鞭毛虫、线虫幼虫等虫体的运动。因此，浓集技术应该是作为补充而不是替代直接涂片法，但在实际操作中，通常采用其中一种方法作为常规的检测方法。

2 粪便中寄生虫抗原的检测

利用各种抗原捕获免疫试验来检测粪便中的抗原（粪抗原）越来越普遍。寄生虫粪抗原的检测，特别是贾第虫和隐孢子虫的检测方法已存在较长时间了。目前，常规的检测犬、猫粪便中贾第虫囊壁抗原的方法是爱德士SNAP Giadia Test，许多实验室利用类似的平板试验对送检样品进行检测。

为了将危险的细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫虫卵与豆状带绦虫及其他带科绦虫虫卵进行区分，则需要研制检测这些寄生虫粪抗原的酶联免疫吸附试验（ELISA）。该方法的建立使某些实验室检测寄生虫抗原成为可能，有可能区分细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫，并与其他带科绦虫种类和其他肠道寄生虫及病原体区分开来。从而也表明这类抗原试验可用于犬棘球绦虫病实验性感染的追踪和疗效的监测。目前，该方法已用于犬群中细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的检测，以及此类疾病控制效果的监测。

关于通过粪抗原诊断牛毛圆线虫病的有效性，目前正在进行研究。用初筛牛或其他反刍兽的药敏试验已证实粪抗原具有较高的实用性。粪抗原捕获ELISA用于牛实验性感染奥氏奥斯特线虫的结果非常理想，在感染过程中粪抗原水平升高。遗憾的是在感染早期，ELISA值与剖检查到的虫体数量并不完全一致，但有某种程度的相关性。近期研究发现用ELISA检测绵羊寄生的环纹背板线虫也取得了预期的效果，且粪便样品热处理可使交叉反应减至最小。完全有理由相信粪抗原ELISA检测技术的应用将越来越普遍，正如检测贾第虫一样成为一种常规方法。

3 聚合酶链式反应（PCR）

在几种原虫检测中，选择不同的遗传标记检测粪便中不同寄生虫已成为常规技术。其中，应用最为普遍的是目前检测贾第虫和隐孢子虫的多种技术。这些技术的迅速发展得益于对不同水源性人兽共患病中寄生虫的溯源。最近，不同毛圆线虫的检测工作已开始进行。一旦这些工作与定量试验相结合，采用粪便中提取的DNA，就可以确定反刍动物体内不同虫体的相对虫荷。反向线点杂交也于最近用于马圆线虫的鉴定，如果该方法能应用于宿主粪便以及对其各自寄生蠕虫的检测，将会成为多数家畜感染诊断的一个强有力的工具。

4 虫卵和包囊的漂浮浓集

所有的漂浮技术均是利用寄生虫与相关食物残渣之间浮力的差异。如果将粪便混于水中，虫卵和粪渣将沉淀下来，这样便可以去除上清液中的脂肪以及溶解的色素。然后将此沉淀物重悬于密度介于虫卵和碎粪渣之间的溶液中，虫卵将浮于上层而碎粪渣将沉于下层。基于漂浮原理的技术可以有效用于检测线虫、绦虫卵和一些原虫包囊，但是不能用于检测某些吸虫卵，且可使原虫滋养体和某些线虫幼虫变形并使原虫包囊难以辨别。硫酸锌（相对密度1.18）对于漂浮原虫包囊和线虫幼虫来说优于蔗糖，原因是硫酸锌使包囊和幼虫皱缩变形的速度比蔗糖慢。

粪便搅匀并不意味着就能得到精确的结果。重视其基本原理要比实际操作步骤更为重要。重力可以代替离心力，但由于力量很弱，因此需要较长时间。许多商业化生产的一次性粪便分析试剂盒便是基于重力原理而设计的，也获得了满意的结果。如果用硝酸钠溶液（相对密度1.20）作为漂浮溶液，制作的玻片样本10 min内即可检查完毕。而饱和蔗糖溶液需要在15～20 min才能检查完毕，原因是蔗糖黏性较大。但使用硝酸钠的一个缺点是载玻片必须及时检测，否则可能由于渗透压破坏虫体形态而使虫体很难辨认，或者由于硝酸钠的结晶可能使显微镜视野模糊不清。