诊断对根除猪繁殖和呼吸综合征病毒至关重要

猪繁殖和呼吸综合征(PRRS)每年给全球养猪业带来数亿欧元的损失，赛默飞世尔科技公司（Thermo Fisher Scientific）的产品专家NardyRobben写道。仅在德国，每年因猪繁殖和呼吸综合征而造成的损失约为1.16亿欧元。然而，对其积极主动的监测与诊断测试可以改善这一情况。

猪繁殖和呼吸综合征是由PRRS病毒引起的一种免疫抑制性传染病，各种年龄的猪均易感，且不同年龄的猪感染后症状差别较大。以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感。患病猪和带毒猪是本病的重要传染源。猪繁殖与呼吸综合征病毒的主要传播途径是接触感染、空气传播和精液传播，也可通过胎盘垂直传播。易感猪可经口、鼻腔、肌肉、腹腔、静脉及了宫内接种等多种途径而感染病毒，猪感染病毒后2～14周均可通过接触将病毒传播给其他易感猪。从病猪的鼻腔、粪便拭子及尿中均可检测到病毒。易感猪与带毒猪直接接触或与污染有猪繁殖与呼吸综合征病毒的运输工具、器械接触均可受到感染。感染猪的流动也是本病的重要传播方式。

持续性感染是猪繁殖与呼吸综合征病毒流行病学的重要特征，猪繁殖与呼吸综合征病毒可在感染猪体内存在很长时间。繁殖与呼吸综合征病毒能够破坏猪体的免疫防御系统引起免疫抑制，猪感染后抵抗力降低，而易继发其他疾病，如附红细胞体病，猪二型圆环病毒病等，因此给本病的诊断带来了很大的困难，往往造成误诊，结果使疫情不断扩大，给养猪场造成严重的经济损失。

并且，由于症状通常以一般的临床症状出现，在猪群中识别猪繁殖和呼吸综合征病毒是很困难的。猪通常会出现呼吸困难，咳嗽，发烧，食欲减退，嗜睡等症状；有些母猪发生流产、产死胎和弱仔的情况；种公猪的发病率较低，主要表现为一般性的临诊症状，但公猪的精液品质下降，精子出现畸形，精液可带毒；仔猪临床症状明显，早产的仔猪当天或几天内死亡。这时畜群的兽医应该使用诊断测试排除其他疾病或混合感染，然后再着手计划解决猪繁殖和呼吸综合征。

由于农场猪繁殖和呼吸综合征感染的复杂性、病毒的致病性和病毒的突变率，以及在使用疫苗时难以解释的诊断结果，均需要加强兽医的监督，制定一项战略计划，例如对猪群积极主动的监测和诊断测试，可以大大改善猪繁殖和呼吸综合征疾病的管理。

TOPIGS-SNW GmbH的生产经理莱因哈德·庞坎普(Reinhard Bomkamp)说：“大多数兽医一开始就会检测出畜群感染是阳性还是阴性，然后他们就可以着手制定计划以控制畜群中的猪繁殖和呼吸综合征的感染。在德国西北部，我们的猪群密度很高，许多农场对猪繁殖和呼吸综合征呈阳性反应。大多数人使用疫苗来并控制病毒传播并减少猪繁殖和呼吸综合征感染造成的经济影响。”

特别是在无猪繁殖和呼吸综合征感染的猪群中，定期检查病毒是否被引入或重新引入农场是很重要的。庞坎普建议每月对繁殖动物进行检测，并每两个月进行一次聚合酶链式反应（PCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）检测，以确认农场中是否存在猪繁殖和呼吸综合征病毒。使用分子和血清学测试提供了最完整的猪群状况，因为这两种方法是从不同方面检测猪繁殖和呼吸综合征病毒。

庞坎普说：“将猪繁殖和呼吸综合征病毒赶出畜群需要加强生物安全措施和定期检测，以实时监测病毒情况。经济优势显而易见：这样一来仔猪就不需要接种疫苗，从而节省了每头仔猪1.50欧元的成本。”

一、变异的猪繁殖和呼吸综合征病毒

猪繁殖和呼吸综合征通过引起非特异性疾病症状来逃避检测。PRRS有两种基因型：欧盟(EU)基因型和北美(NA)基因型。欧盟基因型猪繁殖和呼吸综合征菌株的变化比北美基因型菌株更快，这使得处理它的工作相当棘手。与此同时，欧盟型菌株更加多样化，与北美型菌株相比，包含更多的亚型菌株。

“聚合酶链式反应最大的挑战是由过时的引物(检测的起始序列)导致的假阴性结果，这些引物不再与高度可变的病毒相匹配。”德国萨克森联邦州的兽医Hendrik Nienhoff博士指出。

赛默飞世尔科技公司（Thermo Fisher）将继续跟踪和监测这两种基因型在全球的发展情况。赛默飞世尔科技公司是一家全球公司，可以从世界各地获取猪繁殖和呼吸综合征病毒样本，以跟踪和监测病毒的遗传变化。该公司的PCR检测了目前已知的北美和欧盟型基因型的所有菌株，欧洲的客户要求持续进行这一检测，以监测和跟踪高致病性菌株的任何变化。

二、诊断选项

为了准确诊断猪繁殖和呼吸综合征，需要结合各种诊断方法。赛默飞世尔科技公司的酶联免疫吸附测定(ThermoFisher ELISA)是检测欧盟基因型和北美基因型的猪繁殖和呼吸综合征病毒的一种很好的筛选工具。由于抗体早在感染后7d就能被检测出来，所以ELISA也被用于常规的畜群监测。

监测还应包括同时进行实时聚合酶链式反应检测。通过这种方法，可以确定哪些猪实际携带PRRS病毒，在农场中传播。利用PCR检测病毒可以提供感染或非感染的明确证据，这在将猪运送或转移到另一个农场或谷仓之前非常重要。即使动物有猪繁殖和呼吸综合征抗体，至关重要的是要确保抗体不会失效，因为它们可以传播病毒并感染其他动物，并可能导致临床感染。

PCR还可以区分EU和NA猪繁殖和呼吸综合征基因型，在阳性结果的情况下，可以使用核酸进行测序，从而提供该病毒的详细信息。测序可以进一步回答一个关键问题：“是由于正在进行改良的活疫苗接种，还是因为发生了新的现场感染，所以检测结果呈阳性？”该公司有一个工作流程，可以对完整或部分基因组进行有针对性的测序。

三、抽样选择

诊断通常用于证实临床病例，但如果农场主和兽医想要控制这种疾病并尽量减少经济损失，制定积极主动的猪繁殖和呼吸综合征监测方案必不可少。采用血清学和分子诊断相结合的常规月度或季度检测以及测序应该是农场主对猪群健康管理计划的一部分。

Nienhoff警告说，不仅要在农场出现问题时寻找猪繁殖和呼吸综合征，而且还要寻找其他疾病情况，因为像流感这样的疾病会引起类似的问题，并使情况复杂化。做好其他疫病的免疫接种，控制好其他疫病，特别是猪瘟、猪伪狂犬病和猪气喘病的控制。在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪场，应尽最大努力把猪瘟控制好，否则会造成猪群的高死亡率；同时应竭力推行猪气喘病疫苗的免疫接种，以减轻猪肺炎支原体对肺脏的侵害，从而提高猪群肺脏对呼吸道病原体感染的抵抗力。

口腔唾液取样：猪喜欢嚼绳子，对他们来说压力更小。

由于动物福利条例的规定，通常不允许在没有疑似疾病的情况下进行血液取样。因此，许多兽医开始使用从猪只咀嚼过的绳子收集唾液，放置在一个离心管内，再将离心管送往实验室进行PCR或ELISA测试，用于疾病的常规监测。由于这种方法可以进行更有规律的主动取样，在一些国家，口腔唾液取样已经成为标准方法。

尽管该程序的侵入性较低，但德国的兽医担心漏诊和感染而迟迟不接受唾液取样。然而，最近的一些出版物已经明确验证了唾液取样的结果可以在畜群中进行首次筛查。

Nienhoff说：“用唾液取样，我们可以从少量样本中获得更多的信息监测猪群，其优点还包括更容易抽取样本及改善动物福利。”例如，我可以用四根绳子对60只动物取样，而在血清检测的情况下，我需要对60只动物抽血检验。唾液取样对动物和我来说，都非常方便。”

基因管拭子可以帮助运输稳定，高质量的样品到实验室。

由于唾液样品的性质，我们面临的挑战是：它们必须在冷却运输的24小时内运送到实验室，以防止核酸降解。考虑到这一不利因素，赛默飞世尔科技公司提供了geno tube，旨在快速干燥和稳定流体样品。兽医可以用基因管擦拭口腔唾液样本，这样样品就可以在室温下送到实验室，且没有时间限制。

四、优化样品制备

赛默飞世尔科技公司提供了一个优化的样品提取工作流程，以帮助客户从样本中获得最佳的PCR结果。无论是用基因管、血样还是组织样本采集的口腔唾液样本，其目的都是为了使结果准确性更高。

*资料来源：科学海报“关于口服液体的新见解，作为在野外条件下检测和确定猪繁殖和呼吸综合征流行情况的诊断程序”(2015年)