宫颈癌组织中HIF-α、p53及Beclin1的表达水平探讨

李 云，暴金玲，尹国武

(1.榆林市中医院妇产科，陕西 榆林 719000；2.西安唐城医院妇产科，陕西 西安710016)

宫颈癌作为临床上一类发病率较高的妇科恶性肿瘤，近年来，针对宫颈癌的诊断与治疗虽然取得了较高的进展，但据调查资料显示，宫颈癌在近5年内的生存期仅占了约50%，且目前临床工作者对于宫颈癌的发生发展过程仍不清楚[1]。因此，需要采取进一步的探究与分析来判断宫颈癌的发病机制，以更好的获得预防宫颈癌发生或恶化的新途径[2]。HIF-α作为机体中一个重要的细胞调节因子，其作用在于能够对肿瘤细胞的生长、恶化以及血管的生成产生促进作用，p53基因作为一类重要的抑癌基因，对肿瘤细胞的发生发展能够起到一定的抑制作用，当其基因结构发生异常表达时则会引起肿瘤的恶化。而Beclin1为近年来在新克隆的哺乳动物试验中发现的自噬调控基因，当该基因发生缺失性改变时则可能在一定程度上增加自发性肿瘤的发生率[3]。因此，本院开始针对不同宫颈组织中HIF-α、p53及Beclin1的表达水平及意义进行分析，结果报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取榆林市中医院自2014年6月至2017年6月收治的宫颈癌、宫颈上皮内瘤样变患者分别作为宫颈癌组、宫颈上皮内瘤样变组，另选择同时期来院行体检的健康妇女作为健康对照组，每组45例，均在本人签字同意下收集其宫颈组织，全部人员均未接受放化疗或是免疫治疗，全部人员的宫颈组织涂片均由2名工作经验丰富且年资较高的病理科医师判断，宫颈癌组(全部为子宫颈鳞癌患者)年龄36～76岁之间，平均年龄(50.19±4.90)岁，其中高分化23例，低分化22例；宫颈上皮内瘤样变组年龄36～76岁之间，平均年龄(50.19±4.90)岁，其中CINⅠ级15例，CINⅡ级16例，CIN Ⅲ级14例；健康对照组年龄36～76岁之间，平均年龄(50.19±4.90)岁。三组一般资料情况比较无明显差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

在三组人员同意的前提下，采取宫颈活检进行病理检查，收集宫颈上皮组织，对比三组宫颈组织中HIF-α、p53及Beclin1的表达水平。对收集到的宫颈组织标本采用10%的多聚甲醛进行固定，利用梯度酒精给予脱水处理后，给予常规的石蜡包埋，后制备成4μm厚度的连续切片，按照操作试剂上说明的要求对其给予抗原热修复治疗处理后，采用SP法对宫颈组织标本给予常规的染色、标记等。

1.3阳性判断标准

HIF-α、p53、Beclin1在石蜡切片中阳性染色主要定位在细胞核内，并呈现出棕黄色的颗粒，在高倍镜下进行观察，放大倍数为400，随机定位选择5个视野，每个视野下计数200个肿瘤细胞，一共可观察到10 000个，其中阳性细胞<5%为阴性(-)、5%～10%为弱阳性(+)、11%～50%为中度阳性(++)、>50%为强阳性(+++)[4-5]。

1.4统计学方法

采用统计学软件SPSS 19.0进行统计学处理及分析，计数资料比较则采用卡方检验，多组间比较及组内不同强度阳性表达率比较采用方差分析，若资料不符合正态分布或方差不齐，则应用非参数检验，相关性分析采用Pearson检验，分析宫颈癌组织中HIF-α、p53及Beclin1表达水平的相关性，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1三组组织中HIF-α的表达水平情况

宫颈癌组、宫颈上皮内瘤样变组分别与健康对照组相比HIF-α的阳性表达率较高(χ2值分别为5.46、6.11，均P<0.05)，宫颈上皮内瘤样变组与健康对照组相比HIF-α的阳性表达率较高(χ2=6.52，P<0.05)，健康对照组、宫颈上皮内瘤样变组、宫颈癌组组织中HIF-α的阳性表达率呈现出上升趋势，差异均具有统计学意义(均P<0.05)，见表1。

表1 三组组织中HIF-α的表达水平对比(n)

Table 1 Comparison of expression level of HIF-α in tissues among three groups (n)

2.2三组组织中p53的表达水平情况

宫颈癌组、宫颈上皮内瘤样变组分别与健康对照组相比p53的阳性表达率较高(P<0.05)，宫颈癌组与宫颈上皮内瘤样变组相比p53的阳性表达率较高(P<0.05)，健康对照组、宫颈上皮内瘤样变组、宫颈癌组组织中p53的阳性表达率呈现出上升趋势，差异均具有统计学意义(均P<0.05)，见表2。

表2 三组组织中p53的表达水平对比[n(%)]

2.3三组组织中Beclin1的表达水平情况

宫颈癌组、宫颈上皮内瘤样变组分别与健康对照组相比Beclin1的阳性表达率较低(P<0.05)，宫颈癌组与宫颈上皮内瘤样变组相比Beclin1的阳性表达率较低(P<0.05)，健康对照组、宫颈上皮内瘤样变组、宫颈癌组组织中Beclin1的阳性表达率呈现出降低趋势，差异均具有统计学意义(均P<0.05)，见表3。

表3 三组组织中Beclin1的表达水平对比[n(%)]

2.4宫颈癌组织中HIF-α、p53及Beclin1表达水平的相关性

在45例宫颈癌患者的宫颈组织中，HIF-α、p53水平相较于宫颈上皮内瘤样变组患者及健康人呈明显高表达(P<0.05)，Beclin1水平相较于宫颈上皮内瘤样变组患者及健康人则呈明显低表达(P<0.05)，经Pearson检验分析，在宫颈癌患者的发病过程中，宫颈组织中HIF-α、p53表达水平呈明显的正相关(r值分别为0.5635、0.4754，P<0.05)。HIF-α、p53水平与Beclin1水平则呈负相关(r值分别为-0.532、-0.678，均P<0.05)。

2.5宫颈癌HIF-α、p53及Beclin1免疫组化染色阳性切片

宫颈癌各指标免疫组化染色见图1，均表达于细胞核。

注：A为HIF-α；B为p53；C为Beclin1。

图1 宫颈癌各指标免疫组化染色阳性(20×)

Fig.1 HIF-α positive immunohistochemical staining in cervical cancer

3讨论

3.1 HIF-α在实体瘤中的表达水平及意义

据研究资料显示，实体瘤在发生发展期间存在着不同程度的缺氧情况，HIF-α为了对肿瘤血管的新生提供良好的环境起到了重要的作用[5]。早在1992年的一项研究中即发现了HIF-α能够在缺氧条件下广泛存在于人体以及哺乳动物的体内，其作用机制在于能够在缺氧条件下表现出表达水平方面的变化，且HIF-α靶基因的主要功能与新生血管以及细胞能量代谢具有密切的相关性，并对肿瘤细胞的生长发展产生一定的作用，表现为在肿瘤细胞的恶性进展过程中呈现出逐渐升高的趋势[6]。本次结果显示，宫颈癌组、宫颈上皮内瘤样变组分别与健康对照组相比HIF-α的阳性表达率较高，宫颈上皮内瘤样变组与健康对照组相比HIF-α的阳性表达率较高，健康对照组、宫颈上皮内瘤样变组、宫颈癌组组织中HIF-α的阳性表达率呈现出上升趋势，差异具有统计学意义(P<0.05)。结果提示，HIF-α在正常的宫颈组织中并不存在，但在宫颈内瘤变及宫颈癌组织中已经存在了一定的升高迹象，这就说明了HIF-α可能对肿瘤细胞的生长产生促进作用[7]。

3.2 p53在实体瘤中的表达水平及意义

p53作为一种存在于人体当中的抑癌基因，在正常情况下，野生型的p53基因具有较为强大的抑癌活性，对细胞周期起到了一定的调控作用，但当细胞DNA受到损害时，p53蛋白则会对P21基因的表达产生刺激激活的作用，同时能够与细胞周期蛋白相互结合而形成复合型结构，最终导致细胞停滞在细胞周期的G1阶段，引起其死亡，避免其进展成为肿瘤细胞[8-9]。但发生了突变的p53基因则能够促进肿瘤细胞的发生与发展，甚至直接对细胞产生转化作用，在本次研究中所采用的免疫组化检测方法对p53基因的突变阳性率进行分析，发现宫颈癌组、宫颈上皮内瘤样变组分别与健康对照组相比p53的阳性表达率较高，宫颈上皮内瘤样变组与健康对照组相比p53的阳性表达率较高，健康对照组、宫颈上皮内瘤样变组、宫颈癌组组织中p53的阳性表达率呈现出上升趋势，差异具有统计学意义(P<0.05)。结果提示，p53的异常表达能够促进宫颈癌的发生发展，加重病情，在临床诊断及治疗过程中可起到一定的监测作用[10]。

3.3 Beclin1蛋白在实体瘤中的表达水平及意义

Beclin1蛋白在正常情况下具有调节细胞分化及促进细胞生长的作用，早有研究资料显示，Beclin1蛋白与胃癌、肺癌及肝癌等不同类型恶性肿瘤的发生发展具有密切的相关性，另外，报道中还指出，Beclin1蛋白的表达下调可能说明宫颈组织即将开始发生进一步的恶性病变，对其水平进行研究具有一定的应用价值[11-12]。本次研究结果显示，宫颈癌组、宫颈上皮内瘤样变组分别与健康对照组相比Beclin1的阳性表达率较低，宫颈癌组与宫颈上皮内瘤样变组相比Beclin1的阳性表达率较低，健康对照组、宫颈上皮内瘤样变组、宫颈癌组组织中Beclin1的阳性表达率呈现出降低趋势，差异具有统计学意义(P<0.05)。其提示Beclin1蛋白可能与肿瘤细胞的进展恶化以及预后具有一定的相关性，当其水平开始下调时，能够对宫颈癌的发生发展起到一定的促进作用，值得引起足够的重视。进一步分析宫颈癌患者宫颈组织中HIF-α、p53及Beclin1的表达水平的相关性发现，随着宫颈癌病情的发展，患者宫颈组织中HIF-α、p53表达水平明显增高，Beclin1的表达水平则明显降低，Person相关分析结果显示，宫颈癌患者宫颈组织中HIF-α、p53表达水平呈明显的正相关，HIF-α、p53水平与Beclin1水平则呈负相关(P<0.05)，提示HIF-α、p53及Beclin1的表达水平与宫颈癌的发展具有一定的关系，在宫颈癌发生发展的过程中，HIF-α、p53表达水平与疾病发展呈明显的正相关，Beclin1水平则与疾病发展呈负相关。

综上所述，HIF-α、p53及Beclin1的表达水平与宫颈癌的发展具有一定的关系，HIF-α、p53表达水平与宫颈癌的发生发展呈明显的正相关，Beclin1水平则与宫颈癌的发生发展呈负相关，通过对三者的指标水平进行检测，能够帮助判断。

[1]洪威阳,胡敏.HPV、TCT、阴道镜诊断宫颈上皮瘤变及宫颈癌的价值[J].中国妇幼健康研究,2015,26(6):1272-1274.

[2]马衣努尔·买提托合提.上皮间质化(EMT)在宫颈癌发生发展中诱导肿瘤干细胞的作用及其机制研究[D].武汉:华中科技大学,2013.

[3]狄晓鸿,吕瑞.HIF-1α与宫颈癌关系的Meta分析[J].国际妇产科学杂志,2013,40(1):89-92.

[4]王颖. 宫颈癌发病相关因素的研究分析[J]. 实用预防医学,2014,21(3):345-347.

[5]Livesey K M,Kang R,Vernon P,etal.p53/HMGB1 complexes regulate autophagy and apoptosis[J]. Cancer Res,2012,72(8):1996-2005.

[6]Qiu D M,Wang G L,Chen L,etal.The expression of beclin-1, an autophagic gene, in hepatocellular carcinoma associated with clinical pathological and prognostic significance[J]. BMC Cancer,2014,14:327.

[7]Dong X X,Wang Y R,Qin S,etal.p53 mediates autophagy activation and mitochondria dysfunction in kainic acid-induced excitotoxicity in primary striatal neurons[J].Neuroscience,2012,207:52-64.

[8]张欣宁,吴海燕,姚书忠.Beclin1、p53蛋白在宫颈组织中的表达意义[J].现代临床医学,2016,42(6):414-416,419.

[9]傅志超,王凤玫,骆华春,等.乏氧条件下HIF-1α介导Hela宫颈癌细胞的放射敏感性[J].现代肿瘤医学,2016,24(3):352-356.

[10]Heijkoop S T, Franckena M, Thomeer M G,etal.Neoadjuvant chemotherapy followed by radiotherapy and concurrent hyperthermia in patients with advanced-stage cervical cancer:a retrospective study[J].Int J Hyperthermia, 2012,28(6):554-561.

[11]刘嵘,李天,何泓,等. 宫颈癌新辅助化疗前后uPA、VEGF和Ki-67的表达及其临床意义[J]. 华中科技大学学报(医学版),2013,42(6):712-714.

[12]Yin M, Zhang H, Li H,etal.The toxicity and long-term efficacy of nedaplatin and paclitaxel treatment as neoadjuvant chemotherapy for locally advanced cervical cancer[J]. J Surg Oncol,2012,105(2):206-211.