超高效液色谱相法检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留

侯耀杰

（甘肃省兽药饲料监察所，甘肃 兰州 730030）

氟喹诺酮类药物是一种广谱抗生素，具有高效、低毒等特点，常用于动物饲料中，可促进动物生长，降低动物发病率[1]。因其在畜牧养殖业中广泛应用，容易在动物性食品中造成药物残留，而长期食用具有抗生素残留的动物性食品，容易引起许多问题，严重时会对人体中枢神经系统及心血管系统造成危害，甚至致癌[2-3]。

目前，鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留的检测主要通过高效液相法、液质法等，液相法操作简便有效，但传统的常规液相法通常耗时较多，工作效率低，随着超高效液相色谱在检测工作中的广泛应用，工作效率得到了极大的提高。本文中使用甲酸乙腈对样品进行提取，经超高效液相法分析，对超高效液相法检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留的结果进行汇总分析。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 超高效液相色谱仪Agilent 1290，电子天平PL402-L，电子天平AV412，高速冷冻离心机Bilguge stratos等。

1.2 试剂 乙腈（色谱纯，Fisher），甲酸（Fisher）。

1.3 标准品 环丙沙星 （中国兽医药品监察所，99.8%），恩诺沙星 （中国兽医药品监察所，99.9%），沙拉沙星 （中国兽医药品监察所，99.6%），达氟沙星(QCC，99.6%）。

2 方法

2.1 色谱条件 流动相：0.1%甲酸溶液：乙腈（V/V）=82:18；柱温：30℃；检测波长：激发波长280nm,发射波长 450nm；流速：0.3ml/min；进样体积：5μl； 色谱柱型号：Agilent Eclipse Plus C18 RRHD色谱柱,1.8μm,2.1×150mm。

2.2 提取 取鸡蛋，打碎去壳搅匀，称取2.00g，置于50ml离心管中，加入8ml 1%甲酸乙腈溶液，涡旋混匀，振荡 5min，10000r/min离心 5min，将上清液转移入50ml离心管中。样品残渣中加8ml 1%甲酸乙腈溶液，重复提取一次，合并两次提取液。提取液于40℃水浴中氮气吹干，离心管中加4ml流动相，涡旋溶解，溶液转入15ml离心管中，12000r/min离心5min，取上清液，过 0.2μm微孔滤膜，供超高效液相色谱检测分析。

2.3 标准曲线绘制 称取环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、沙拉沙星标准品，用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解配制成1mg/ml的储备液，量取适当储备液，以流动相稀释成含有环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星 1μg/ml和达氟沙星 0.2μg/ml的混合标准工作液。

适当量取混合标准工作液，用流动相分别稀释成含有环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星（5、25、50、100、500ng/ml) 和含有达氟沙星（1、5、10、20、100ng/ml）的系列标准工作液，上机测定后以标准液浓度为横坐标，以标准液中各组分的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程和相关系数。

2.4 准确度和精密度 在空白鸡蛋样品中添加不同浓度的氟喹诺酮类标准溶液，做添加回收实验，添加浓度为 10（达氟沙星 2μg/kg）、100（达氟沙星 20μg/kg）、200μg/kg （达氟沙星 40μg/kg），每个浓度做五个平行样品，重复三次，计算回收率和批内、批间相对标准偏差。

3 结果与讨论

3.1 氟喹诺酮类药物残留检测，常规高效液相法使用250nm×4.6nm的C18色谱柱，流动相使用磷酸三乙胺-乙腈，但由于超高效液相的色谱柱短，粒径细，且氟喹诺酮类药物属于两性化合物，结构中同时含有羧基和可质子化的氮，因此在使用相同的流动相时，四种不同的药物不能够得到有效分离。后使用0.1%甲酸溶液-乙腈作为流动相，四种药物得到分离并且峰形良好。高效液相法检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物大约需要20min，而超高效液相在6.5min之内就能够完成分析，很大程度上节省了时间，提高了工作效率。超高效液相法检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物的标准液图谱和阳性添加图谱见图1、图2。

图1 氟喹诺酮类药物的标准液图谱

图2 氟喹诺硐类药物的阳性添加图谱

3.2 实验结果表明在1～500ng/ml范围内，环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星和沙拉沙星各自的峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数大于0.9999。标准曲线结果见图3。

图3 氟喹诺酮类药物标准曲线

3.3 在实验过程中，依照农业部781号公告-6-2006方法检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留，四种氟喹诺酮类药物的回收率不够理想，使用1%的甲酸乙腈溶液提取，在空白试料中添加不同浓度的标准液，环丙沙星回收率范围是76.5%～99.1%，恩诺沙星回收率范围是73.4%～96.7%，达氟沙星回收率范围是79.5%～97.4%，沙拉沙星回收率范围是77.5%～98.9%，批内、批间RSD均小于10.0%，符合检测要求。结果见表1。

表1 鸡蛋中氟喹诺酮类药物添加回收结果统计

4 结论

超高效液相法检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留，较普通高效液相法检测方法更为简便快捷。以此方法检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物，前处理过程简单，使用试剂较少，且超高效液相检测灵敏度更高，分析时间较短，同时，结果稳定，重现性好，因此，该方法适用于鸡蛋中氟喹诺酮类药物的残留检测。

[1] 李丹,张玉洁,仲 锋,等.鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留量检测方法研究[J].中国兽医杂志,2010,44(6):1-4.

[2] 杨卫军,李 曼,曹秀梅,等.超高效液相色谱法检测鸡肉中氟喹诺酮类药物残留 [J].现代畜牧兽医,2016,(4):8-12.

[3] 董艳峰,于静泉,张 巍.超高效液相色谱法同时测定鸡肝中五种氟喹诺酮类药物残留 [J].中国兽医杂志,2010,44(6):5-8.