某院血流感染大肠埃希菌耐药表型及耐药率研究*

王小龙，栾旭波

(1.四川省内江市第二人民医院检验科 641000；2.河南省新乡市疾病预防控制中心检验科 453000)

大肠埃希菌是一种常见的动力阳性革兰阴性杆菌，其生化反应活跃，对环境适应能力极强，存在于各种自然环境及哺乳动物肠道中。除少数血清型可引起肠道感染外，其他引起的感染多发生于肠外，如菌血症、胆囊炎、尿道炎、肺炎等[1-2]。近年来，由于各种原因引起的大肠埃希菌耐药性不断上升，出现多重耐药菌株，导致临床治疗失败的风险不断增大，因此更加重视对该菌耐药率的监测。现对近几年临床血流感染大肠埃希菌的耐药表型及耐药率变迁进行分析，为感染控制与临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集某院各临床科室2014年1月至2016年12月送检的血培养并培养出大肠埃希菌的所有病例信息资料(8 225例)，以及病原菌药敏感染测试数据，剔除重复菌株信息。标准菌株采用大肠埃希菌ATCC25922。

1.2方法

1.2.1血培养 患者发热时采集血液8～10 mL注入血培养瓶，每例患者至少在不同部位采集双瓶同时进行培养，培养时间为5 d。血培养采用BD9120全自动血培养仪，培养瓶Plus Aerobic/F Culture Vials，均购自美国BD公司。

1.2.2细菌鉴定 根据血培养瓶肉汤直接涂片及平板生长情况选择相应卡片进行细菌鉴定，大肠埃希菌为革兰阴性杆菌，选择GN卡，使用VITEK 2 compact鉴定系统进行鉴定，仪器与试剂均购自法国生物梅里埃公司。

1.2.3药敏试验及表型分析 药敏试验采用MIC法，药敏卡片为GN13卡，使用VITEK 2 compact仪器进行药敏试验；头孢唑啉及头孢哌酮/舒巴坦采用K-B法进行复核或测试，纸片购自OXOID公司，药敏结果的判读参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)M100S26文件。采用梅里埃专家系统对所有大肠埃希菌株进行表型分析，以最优匹配结果为准，无最优匹配则进行复查确认表型。

1.4统计学处理 采用SPSS17.0统计软件进行数据分析，计数资料以例数或百分率表示，组间比较使用χ2检验；趋势分析应用Armitage线性趋势χ2检验，α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1大肠埃希菌分布情况 8 225例标本分离出病原菌787株，分离率9.6%(787/8 225)，其中大肠埃希菌168株，占21.3%(168/787)。Armitage趋势检验显示，随时间增加而逐步上升(χ2=6.402,P<0.025),但大肠埃希菌在病原菌的比例却未逐年提高(χ2=2.292,P>0.25)，见表1。31个科室送检标本中检出大肠埃希菌，内科检出101例，外科67例。检出10例及以上的科室分别为肝胆外科(25例)、肾病内科(15例)、心血管内科(14例)、消化内科(13例)、感染科(12例)，其他科室例数较少。

表1 各年度血培养阳性率与大肠埃希菌百分率结果比较

2.2大肠埃希菌耐药表型分布情况 仅检测到大肠埃希菌6种耐药表型，分别为野生型、产超广谱β内酰胺酶型(产ESBL型)、产耐酶抑制剂青霉素酶型、产ESBL(CTX-M亚型)、氨基糖苷类耐药型[ACC(6′)]、高产头孢菌株酶型。其中野生型检出率最高，为38.1%，其次为产ESBL型(不包含CTX-M亚型)，检出率为25.6%。其他耐药表型检出率较低。不同耐药表型菌株对抗菌药物耐药率差异较大，野生型对多数抗菌药物敏感，产ESBL型、产ESBL(CTX-M亚型)、ACC(6′)型对青酶素类、头孢菌素类、奎诺酮类耐药率均较高。见表2、3。

表2 大肠埃希菌耐药表型分布情况(n)

表3 不同耐药表型对抗菌药物的耐药结果比较

耐药表型头孢吡肟庆大霉素亚胺培南左氧氟沙星氨苄西林/舒巴坦复方磺胺甲噁唑妥布霉素哌拉西林/他唑巴坦头孢哌酮/舒巴坦野生型-+-++++---产ESBL型++++-+++++++---产耐酶抑制剂青霉素酶型-+++-+++++++---产ESBL(CTX-M亚型)-++-+++++++++--ACC(6')+++++-+++++++++++++--

注：“―”表示耐药率小于10%；“+”表示10%≤耐药率<40%；“++”表示40%≤耐药率<60%；“+++” 表示60%≤耐药率<90%；“++++”表示耐药率大于或等于90%。高产头孢菌素酶型菌株数小于5不做统计

2.3大肠埃希菌耐药率分布情况 大肠埃希菌ESBL菌株检出率为46.4%(78/168)，各年度分别为43.2%(19/44)、47.4%(27/57)、47.8%(32/67)(χ2=0.201,P>0.5),未随时间增加而逐步上升。大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率最高，达85.0%(142/168)；复方磺胺甲噁唑、头孢曲松、头孢唑啉、环丙沙星、氨苄西林/舒巴坦、左氧氟沙星的耐药率相近，均在50%左右，差异无统计学意义(χ2=3.358，P=0.645)，头孢哌酮/舒巴坦和阿米卡星未检测到耐药株。产ESBL菌株的检出率在内科科室和外科科室相近，分别为44.6%(45/101)和49.3%(33/67)，差异无统计学意义(χ2=0.358，P=0.550)。见表4。

表4 大肠埃希菌对抗菌药物的耐药率结果比较[%(n)]

3 讨 论

血流感染是大肠埃希菌引起的主要肠外感染疾病，特别容易发生于免疫功能异常的患者，如肿瘤化疗、器官移植、艾滋病等。本研究结果表明，大肠埃希菌血流感染主要发生于肝胆外科、消化内科、心血管内科、感染科，可能与患者低蛋白、置入术、感染等因素相关。有研究报道，患者非恶性疾病、抗菌药物暴露、高龄、低蛋白、置管、高血压等因素是发生大肠埃希菌血流感染的危险因素[3-4]。其与本研究结果相似。近3年该院血流感染阳性率有增加趋势，可能与更多的介入操作有关，大肠埃希菌在革兰阴性菌感染中比例最高，但其所占比例相对稳定，与有关研究相似[5]。本研究耐药表型结果显示，引起血流感染的大肠埃希菌野生型(未检出任何耐药表型)所占比较约为40%。刘素玲等[6]报道大肠埃希菌耐药表型野生株所占比例在15%以下，血流感染大肠埃希菌与其他标本分离的菌株在耐药表型方面存在差异，原因尚不明确，值得进一步研究。产ESBL(包括CTX-M型)是其主要的耐药表型，约占40%，其他耐药表型检出率则相对较少。

产ESBL是大肠埃希菌主要的耐药机制，产酶株是医源性感染的主要病原菌之一。王飞等[7]报道大肠埃希菌产ESBL株检出率为40%～70%，不同标本分离株的产酶率也存在差异，但血液分离株产酶率较低。本研究结果显示血流感染分离株产酶率为46.4%。本研究对19种抗菌药物的耐药监测发现氨苄西林的耐药率接近90%，远高于其他种类的抗菌药物，耐药率前2位为氨苄西林和复方磺胺甲噁唑，与有关报道相同[8]。本研究有6种抗菌药物的耐药率约为50%，有7种抗菌药物的耐药率低于10%，头孢哌酮/舒巴坦与阿米卡星未检出耐药菌株，重症菌血症患者可以应用这2种药物进行经验性治疗。一些同种类型的药物耐药率却存在明显差异，如亚胺培南与厄他培南、头孢他啶与头孢曲松，可能与临床习惯用药有关[9]。产ESBL株耐药率明显高于非产酶株，有研究显示产ESBL株对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南非常敏感[10]。

综上所述，大肠埃希菌引起的血流感染较严重，病死率较高，及时有效的抗感染治疗对预后尤为重要，虽然产ESBL菌株耐药率较高，但对碳青霉烯类依然保持较高的敏感率。药敏试验报告作为最终的用药参考具有不可替代的作用，但根据耐药监测数据经验性使用抗菌药物可防止病情恶化，如何提高药敏试验的准确性、缩短检测报告时间仍是微生物检验人员需要思考的问题。

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