不同的前处理方式下接触性DNA成功检测的法医学应用两例

吴婷+辛彩蕊+陈瑶清+赵幼鸣

摘 要：随着犯罪嫌疑人的反侦查意识及能力加强，接触性检材在现场提取检材中所占的比重越来越大，现场接触性DNA在案件侦破中发挥的作用也日渐明显。由于人在接触物体后，会在物体表面留下相应的微量接触性DNA，对这类接触性微量检材的检验是目前法医DNA检验的热点和难点。本文将从前期处理及DNA的提取、扩增、电泳以及结果分析等方面对两例实际案例进行报道分析，希望能够为公安实战工作中对接触类检材的提取以及成功检测分型提供方法和思路。

关键词：接触性DNA；DNA提取；PCR，STR分型

中图分类号：D919 文献标识码：A 文章编号：2095-4379-（2017）32-0242-02

作者简介：吴婷（1988-），女，硕士，湖南警察学院，助教，主要从事法医物证学研究。

Abstract： Since suspects have increased counter-investigation awareness and capacity，the touch DNA has increasing proportion in samples collected in the crime scene，and is playing a gradually obvious role in solving crimes.At the crime scene，people often left some relevant touch DNA on the object surface they contacted，so it's the hot spot as well as difficult point of present DNA testing.In this paper，two cases were analyzed from the aspects of pretreatment，DNA extraction，amplification，electrophoresis and result analysis.It is hoped that it can provide methods and ideas for the extraction of contact materials and the successful detection and classification of public security work.

Key words：Touch DNA；DNA extraction；PCR；STR genotype

一、简要案情

（一）案例一

2014年×月×日，×市××区，孙××被抢劫，现场提取到捆绑受害人孙××的黄色塑料胶带（见图1.1），经×市公安局DNA实验室检验并将数据入库，事隔3月后在数据库中与前科人员周××比中。

（二）案例二

2014年×月×日，×市××区，一洗浴中心顾客财物被偷，现场留有疑似小偷的黑色男式外裤一条（见图1.2），经×市公安局DNA实验室检验并将数据入库比对，比中前科人员宋某某。

二、检验过程及结果

（一）案例一

1.提取DNA：找出可能为捆绑物黄色胶带始末端点的位置，标记为a、b、c、d四点，结合案情分析，胶带捆绑物的端点嫌疑人最有可能接触并多次接触，选此点进行检验的成功率相对较大，注意避开剪取附有的受害人毛发的胶带部分，分别直接剪取四个点位置大小为5×5mm的检材，采用Chelex-100+免疫胶体金法提取DNA。

2.PCR扩增：使用GeneAmp PCR System 9700型扩增仪和PowerPlex21试剂盒进行PCR扩增。PCR反应液（6×模板）；引物混合物（2×Primer，2×Mix），进行30次循环。扩增程序为：96℃，1min，循环0次；94℃，10s，59℃，1min，72℃，30s，30次循环；60℃，10min，4℃，forever。

3.扩增产物检验：取PCR扩增产物2μl加入10μl甲酰胺与ILS500（Promega公司）混合反应液中（甲酰胺：ILS500=4：1），经热变性后，使用3130XL Genetic Analyzer（ABI公司）进行毛细管电泳，用Genemapper软件进行分析，得出等位基因分型。

4.结果分析：通过对检出的等位基因型进行分析、比对得出结论，其中b、c、d三点均检出受害人的成分，a点检测出的等位基因型3个月后在数据库中比中前科人员周××。（a点检测图谱见图2.1）

（二）案例二

1.提取DNA：将黑色外裤轻柔翻转，分别采用吸附法和粘取法收集脱落细胞，结合案情分析，正值天气炎热的初夏，裤子直接接触皮肤且腰部出汗多，故采用吸附法收集脱落细胞时重点吸取了裤腰部，双侧裤管，标记为K1；采用脱落细胞粘取仪收集脱落细胞时，重点粘取的裤腰部，双侧裤兜入口处，标记为K2；均采用EZI法提取纯化DNA。

2.PCR扩增：使用GeneAmp PCR System 9700型扩增仪和PowerPlex21试剂盒，采用试剂盒的标准方法进行PCR扩增。

3.扩增产物检验：取PCR扩增产物2μl加入10μl甲酰胺与ILS500（Promega公司）混合反应液中（甲酰胺：ILS500=4：1），经热变性后，使用3130XL Genetic Analyzer（ABI公司）进行毛细管电泳，用Genemapper软件进行分析，得出等位基因分型。

4.结果分析：通过对检出的等位基因型入库进行分析、比对，比中前科人员宋某某。（K1检测图谱见图2.2）

三、讨论

对上述两例案件成功检测进行分析及经验总结。首先，表面积较大的检材，分区检验尤为重要，而采用先粘取表层，再吸取的方式，可以降低了背景DNA的影响，从而获得了单一DNA分型结果。其次，因为接触类检材存在潜在DNA转移[1]的发生，并且此类转移与物体表面质地及样本的湿度密切相关，检材的表面质地很大程度上影响实验者提取方法的选择，现勘人员应该及时出现场并且能结合案情科学地提取、包装并运送检材；再次，我们在处理接触类检材必须做到检验时突出重点部位、选择合适的检验策略与方案；最后，根据接触性检材的检测结果下鉴定结论时应十分谨慎。

[ 參 考 文 献 ]

[1]Goray M，Mitchell RJ，van Oorschot RA.Investigation of secondary DNA transfer of skin cells under controlled test conditions[J].Leg Med（Tokyo），2010 May，12（3）：117-20.endprint