心脉佳对大鼠的长期毒性作用

路军秀 程 珊 王淑明 潘国聘 朱茉莉 赵繁荣 杨明涛 陈 苏 宋宇涛 万光瑞 李 鹏

(新乡医学院基础医学院，河南 新乡 453003)

动脉粥样硬化(AS)是中老年人心脑血管疾病发生的重要病理基础，心脉佳(专利号：ZL 2010 1 0536001.x)，主要由葛根、山楂、红曲、丹参等多种中药科学组方，经现代工艺精制而成，经药效学实验证实有良好的抗AS作用〔1～5〕。为了更好地让此药应用于临床，根据中药新药长期毒性试验方法和技术指导原则〔6〕，进行了大鼠长期毒性试验，本文观察心脉佳连续灌胃12 w及停药恢复4 w大鼠的毒性反应情况。

1 材料与方法

1.1药物、动物及仪器 心脉佳煎剂，每毫升煎剂含1.675 g生药。SD大鼠(SPF级)，体重160～180 g，雌雄各半，由河南省实验动物中心提供，合格证号SCXK(豫)2010-0002。希森美康XS-500i全血分析仪，西门子ADVIA2400全自动生化分析仪，日本Nickon Eclipse E200光学显微镜等。

1.2动物分组与给药 取SD大鼠120只，常规大鼠饲料及净化自来水适应性喂养1 w后，按性别体重随机分为4组，即心脉佳高(33.500 g·kg-1·d-1)、中(11.167 g·kg-1·d-1)、低(3.350 g·kg-1·d-1)剂量组和空白对照组，每组雌雄各15只，给药组日给药剂量分别为临床成人(70 kg)日给药量的111.67、37.22、11.17倍，各剂量组每日上午7～8时按20 ml/kg灌胃给药1次，空白对照组给予等体积的生理盐水。每周给药6 d，连续给药12 w。每周最后1 d称量体重，并根据体重变化调整给药量。实验期内观察动物的皮毛、行为、精神、进食及分泌物等一般情况。实验第12周末，每组雌雄大鼠各取10只心脏取血，进行血液学及血液生化检查；处死大鼠进行尸体解剖行肉眼及组织病理学检查，取主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、大脑)称重并计算脏器系数(脏器系数=脏器重×100/禁食后体重)，各组大鼠主要脏器取合适大小用10%的甲醛溶液固定后，石蜡包埋，作常规组织切片，HE染色后观察。其他动物停药恢复4 w后，行上述同样检查。

1.3统计学方法 采用SPSS20.0 软件行方差分析。

2 结 果

2.1心脉佳对大鼠一般情况的影响 各组大鼠行为活动正常、摄食饮水正常，皮毛光泽，眼、耳、口、生殖器无异常分泌物，除高剂量组部分雌雄大鼠出现软便外，其他组粪便颜色形状与空白对照组相比均无明显异常，无大鼠死亡。停药恢复期间，各项观察指标均未见异常改变。

2.2心脉佳对大鼠体重变化的影响 心脉佳低、中及高剂量组雌、雄大鼠体重和同期空白对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)，恢复期各组大鼠体重和同期对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。见图1和图2。

2.3对大鼠血常规指标的影响 给药12 w及停药恢复4 w后，与空白对照组相比，各给药组大鼠血常规指标差异无统计学意义(P>0.05)。见表1、表2。

2.4心脉佳对大鼠血生化指标的影响 给药12 w及停药恢复4 w后，与空白对照组相比，各给药组大鼠血生化指标差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3、表4。

2.5各组胚器肉眼观察及脏器系数比较 给药12 w及停药恢复4 w后，处死并解剖各组大鼠，肉眼观察可见大鼠胸腔、腹膜腔浆膜光滑，主要脏器未见明显病变。与空白对照组相比，各给药组大鼠脏器系数差异无统计学意义(P>0.05)，未见迟缓毒性。见表5、表6。

2.6心脉佳对各组组织病理学影响 光镜下观察给药12 w及停药恢复4 w各组大鼠脏器的组织切片，未见细胞水变性、脂肪变，未见细胞坏死，未见炎症细胞浸润等，各给药组主要脏器未见明显病理学改变。见图3，图4。

给药1～12 w(n=15)，停药恢复期(n=5)图1 心脉佳对雌性大鼠体重的影响

给药1～12 w(n=15)，停药恢复期(n=5)图2 心脉佳对雄性大鼠体重的影响

组别白细胞计数(WBC,×109/L)雌性雄性淋巴细胞计数(LY,×109/L)雌性雄性中性粒细胞百分比(NEUT,%)雌性雄性空白对照组6.6±3.69.73±3.545.31±2.937.58±2.8913.79±5.5516.58±5.36心脉佳低剂量组7.1±3.78.99±3.715.80±2.947.16±2.8512.46±3.9213.99±3.5心脉佳中剂量组7.1±3.58.33±2.585.86±2.646.53±1.7312.20±3.6714.66±4.42心脉佳高剂量组8.0±1.56.91±3.276.37±1.255.59±2.6315.02±4.1813.80±3.28组别淋巴细胞百分比(LY,%)雌性雄性单核细胞百分比(MO,%)雌性雄性嗜酸性粒细胞百分比(EOS,%)雌性雄性空白对照组79.61±7.4277.85±6.343.90±1.244.07±0.722.34±2.201.36±1.54心脏佳低剂量组82.46±4.9279.99±3.823.42±0.754.17±0.531.83±1.641.69±1.17心脏佳中剂量组82.85±3.8979.49±5.003.46±0.673.88±0.921.35±1.311.73±1.27心脏佳高剂量组79.71±4.5880.64±3.333.61±0.803.90±0.691.44±1.051.44±1.39组别嗜碱性粒细胞百分比(BASO,%)雌性雄性红细胞计数(RBC,×1012/L)雌性雄性血红蛋白(HGB,g/L)雌性雄性空白对照组0.36±0.840.14±0.158.79±0.349.23±0.41160.20±5.55159.5±6.90心脉佳低剂量组0.13±0.170.25±0.338.38±0.748.92±0.47151.20±7.52157.5±9.28心脉佳中剂量组0.13±0.160.24±0.318.52±0.629.3±0.49147.90±8.27157.8±7.18心脉佳高剂量组0.23±0.290.23±0.368.88±0.449.02±0.80155.60±7.11157.00±11.73血细胞比容(HCT,%)雌性雄性平均红细胞体积(MCV/fl)雌性雄性平均红细胞血红蛋白量(MCH,pg)雌性雄性空白对照组46.16±1.6545.67±1.9852.55±2.4849.5±1.1718.24±0.617.29±0.49心脉佳低剂量组43.29±1.9345.04±2.1851.87±3.3050.65±2.9018.10±0.917.69±0.61心脉佳中剂量组44.69±1.9245.35±3.3851.99±1.7748.52±1.9917.65±0.5817.00±0.77心脉佳高剂量组44.42±2.2545.04±1.5050.39±1.4250.41±3.2117.54±0.5317.46±0.93组别平均血红蛋白浓度(MCHC,g/L)雌性雄性血小板计数(PLT,×109/L)雌性雄性空白对照组347.10±8.72349.30±7.45970.10±73.90948.50±165.14心脉佳低剂量组349.40±8.72349.90±11.26822.00±135.86964.90±172.41心脉佳中剂量组339.60±6.06350.20±8.28869.80±95.61933.10±150.64心脉佳高剂量组348.10±5.53346.70±6.07975.60±173.22880.70±94.73

表2 心脉佳停药恢复4 w后对大鼠血常规指标的影响

表3 心脉佳给药12 w后对大鼠血生化指标的影响

表4 心脉佳停药恢复4 w后对大鼠血生化指标的影响

表5 心脉佳给药12 w后对大鼠脏器系数的影响

表6 心脉佳停药恢复4 w后对大鼠脏器系数的影响

图3 各组心脏、肝脏组织病理学观察(HE，×400)

图4 各组脾脏、肺脏、大脑、肾脏病理学观察(HE，×400)

3 讨 论

毒理学研究是新药的安全性评价的必要手段，由于前期急性毒性实验未测出半数致死量(LD50)，因此以最大给药量作为高剂量，以高剂量的1/3和1/10作为中、低剂量。齐云等〔7〕研究发现，SD雌雄大鼠部分血液学和血生化指标存在差异，故本文统计数据时此部分指标按性别分别统计。心脉佳组方中葛根含的葛根黄酮〔8〕、丹参含的丹参酮ⅡA〔9〕等，文献报道有明确的抗AS的作用。本研究表明，心脉佳毒性低，临床治疗剂量可长期服用。

1邵 坤，陈文捷，李 爽，等.心脉佳配方对大鼠颈动脉粥样硬化斑块的影响〔J〕.时珍国医国药，2011；22(10)：2480-1.

2Yin YL，Wan J，Li P,etal.Protective effect of Xin Mai Jia ultrafiltration extract on human umbilical vein endothelial cell injury induced by hydrogen peroxide and the effect on the NO-cGMP signaling pathway〔J〕.Exp Ther Med，2014；8(1)：38-48.

3Yin YL，Li P，Yang J,etal.Protective effect of ultrafiltered XinMaiJia extract against H(2)O(2)-induced injury in human umbilical vein endothelial cells through NHE1 downregulation〔J〕.Genet Mol Res，2014；13(4)：8436-49.

4Li P，Pan GP，Jia M,etal.Effect of Xin Mai Jia on atherosclerosis in rats〔J〕.Genet Mol Res，2015；14(2)：6018-27.

5Zhao FR，Lu JX，Jia M,etal.Effects and mechanism of Xin Mai Jia in a rabbit model of atherosclerosis〔J〕.Exp Ther Med，2015；10(5)：1627-34.

6袁伯俊，廖明旭，李 波.药物毒理学实验方法与技术〔M〕.北京：化学工业出版社，2007：164.

7齐 云，蔡润兰，刘 彬，等.新药长毒试验动物血液生化测定规范化研究系列之五——SPF级SD大鼠血液生化参考值的建立〔J〕.中国比较医学杂志，2006；16(4)：193-6.

8Song W，Li YJ，Qiao X,etal.Chemistry of the Chinese herbal medicine Puerariae Radix (Ge-Gen)：A review〔J〕.J Chin Pharmaceut Sci，2014；23(6)：347-60.

9沈晓君，高爱社，关怀敏，等.丹参酮ⅡA对兔动脉粥样硬化病灶凋亡相关基因表达的影响〔J〕.中国老年学杂志，2013；33(1)：90-2.