基因多态性与慢性乙肝患者对α干扰素应答的相关性分析

陈晨，童梅，姚文兵，刘金毅



基因多态性与慢性乙肝患者对α干扰素应答的相关性分析

陈晨，童梅，姚文兵，刘金毅

210009 南京，中国药科大学生命科学与技术学院（陈晨、姚文兵）；102600 北京市长效干扰素工程技术研究中心/北京三元基因药业股份有限公司（陈晨、童梅、刘金毅）

乙型肝炎（hepatitis B）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）引起的传播广、治愈难、危害性大的流行性肝病之一。每年都有约 50 万人死于 HBV 长期感染所导致的肝硬化和肝癌。α 干扰素（interferon alpha，IFN-α）是治疗慢性乙型肝炎的一线用药，过往研究表明，乙肝患者对 IFN-α 治疗应答存在差异，乙肝病毒基因型、谷丙转氨酶（ALT）水平等都会影响 IFN-α 的治疗效果。随着精准医学的进步，科学研究者们率先发现了（interferon lambda 3，IFN-λ3，干扰素 λ3）基因多态性与丙型肝炎患者对 IFN-α 应答之间的相关性，中华医学会肝病学分会和感染病学分会已将基因多态性纳入《中国丙型肝炎防治指南（2015 版）》[1]，作为 IFN-α 治疗丙肝效果的预测指标。而美国《PEG-IFN-α 治疗丙型肝炎临床药物基因组学治疗指南》也提出，基因在 rs12979860 位点上的 CC 型为 PEG-IFN-α 治疗优势应答基因型[2]。

从干扰素信号传导通路和免疫网络来看，（位于 chr19:q13.13-q13.2）、（又名，，黏病毒抵抗蛋白 A，位于 chr21:q22.3-q22.3）、（白介素 10，位于 chr1:q32.1-q32.1）在抗病毒感染和免疫效应中起重要作用。、参与了 IFN 经典信号通路 JAK-STAT途径：IFN-α/β 激活I型干扰素受体（IFNAR1）、JAK1 激酶、信号转导及转录激活蛋白（STAT）。IFN-λ3 激活 IL10RB/IFNLR1 受体二聚体及 JAK-STAT 下游信号通路，协同诱导干扰素刺激基因（ISGs）表达生成 MxA、ADAR、EIF2AK2、OAS1 等抗病毒蛋白，进而抑制HBV 和 HCV 的病毒复制。虽没有参与 JAK-STAT 途径，但 IL10 作为抗炎因子，通过免疫协同作用参与机体内多种抗病毒反应。大量文献调研结果显示，、、与 IFN-α 疗效相关。因此，本文旨在综合分析慢性乙肝（CHB）患者、、三种基因多态性与 IFN-α 治疗应答有关的文献报道，从循证医学的角度探寻这些研究的“同”与“异”。

1 资料与方法

1.1 资料来源

通过计算机文献检索 PubMed、中国知网、万方数据库等国内外数据库和追溯检索相关文献的参考文献的方法，搜集国内外发表的关于、、基因多态性和 IFN-α 治疗反应性之间关系的研究文献。检索词包括基因多态性（gene polymorphisms）、α 干扰素（interferon alpha）、应答（response）、乙型肝炎（hepatitis B）、、、。

1.2 文献纳入与排除标准

纳入标准：国内外公开发表的可查阅全文的实验性文章；所有文献均涉及、、基因多态性和 IFN-α 治疗乙型肝炎反应性之间关系的研究；研究对象应仅限于患有慢性乙型肝炎，不存在其他肝炎病毒感染；治疗方案应仅使用 IFN-α 治疗，不存在联合用药的情况；判别患者对 IFN-α 应答的标准是具有持续的病毒应答；检测多态性位点的方法具有科学性、可靠性；所有文献均能获取原始数据信息，并可根据原始数据计算出 OR 值及 95%CI。

排除标准：综述、meta 分析和无法查阅全文的实验性文章；非、、基因相关、非 IFN-α 相关、非乙型肝炎相关的文献；研究对象有多种肝炎病毒感染并存的情况；治疗方案中采用 IFN-α 和其他药物联合用药的情况；检测多态性位点的方法不科学、不可靠；无法获得原始数据信息或无法转化成 OR 值及 95%CI 的文献。

1.3 文献质量评价

对所纳入的文献进行质量评价，考察以下 3 个方面的情况：①实验设计是否完善、合理；②研究对象选择是否具有随机性；③原始数据是否完整，有无缺失。由两人独立对所纳入文献进行质量评价，若产生意见分歧可通过协商解决，无法达成一致时请第三方参与决定。

1.4 统计学分析

按照 meta分析的要求提取并整理文献数据，输入 RevMan5.3 软件中获得OR 值、95%CI 和异质性检验结果。根据各研究结果的差异性选择固定效应模型和随机效应模型，计算合并的 OR 值和 95%CI。

2 结果

2.1 文献筛选流程

初检出文献 1383 篇，其中 405 篇英文文献，978 篇中文文献。通过阅读标题和摘要，剔除重复和不符合纳入标准的meta 分析，其中相关文献 9 篇，相关文献3 篇，相关文献 3 篇。按照 SNP 分组，的基因位点 rs12979860、rs8099917、rs12980275 的病例数分别为 1219、1826、800；-88（rs2071430）的病例数为 445；-592（rs1800872）的病例数为 357。文献筛选流程如图 1 所示。

图 1 文献筛选流程

2.2 纳入研究基本特征

对纳入的 15 篇文献进行全文阅读，提取基本特征和数据资料。将这 15 篇文献根据研究基因、国家或地区、研究对象、病例数、SNP 检测技术、SNP ID、治疗药物和应答终点进行资料统计，具体如表 1 所示。

2.3 Meta 分析结果

2.3.1基因多态性分析共有 3 个基因位点与 IFN-α 治疗乙肝反应性有关，分别是rs12979860、rs8099917、rs12980275。纳入的文献中有 6 篇文献报道了 rs12979860 基因多态性与慢性乙肝患者对 IFN-α 治疗应答之间的关系，对涉及到的文献进行异质性分析，结果表明各研究存在异质性（= 0.01，2= 66%），采用随机效应模型进行分析。分析结果显示：基因的 rs12979860 CC 基因型与 N-CC（CT/TT）等位基因相比对慢性乙肝患者使用 IFN-α 治疗所产生的持续病毒学应答无明显差异[= 1.01，95%（0.57，1.81），= 0.97]（图 2）。

纳入的文献中有 7 篇文献报道了 rs8099917 基因多态性与慢性乙肝患者对 IFN-α 治疗应答之间的关系，对涉及到的文献进行异质性分析，结果表明各研究存在异质性（< 0.0001，2= 79%），采用随机效应模型进行分析。分析结果显示：rs8099917 N-TT 基因型（GT/GG）与 TT 基因型相比，N-TT 基因型的慢性乙肝患者对 IFN-α 具有更高的应答率[= 1.57，95%（0.72，3.42），= 0.25]，但差异未见显著性（图 3）。

纳入的文献中有 3 篇报道了 rs12980275 基因多态性与慢性乙肝患者对 IFN-α 治疗应答之间的关系，对涉及到的文献进行异质性分析，结果表明各研究存在异质性（< 0.00001，2= 92%），采用随机效应模型进行分析。分析结果显示：rs12980275 AA 基因型与 N-AA 基因型（AG/GG）相比，AA 基因型的慢性乙肝患者对 IFN-α 具有更高的应答率[= 3.23，95%（0.73，14.31），= 0.12]，但差异未见显著性（图 4）。

2.3.2基因多态性分析 纳入的文献中有 3 篇文献报道了-88（rs2071430）基因多态性与慢性乙肝患者对 IFN-α 治疗应答之间的关系，对涉及到的文献进行异质性分析，结果表明各研究不存在异质性（= 0.17，2= 43%），采用固定效应模型进行分析。分析结果显示，-88GT 基因型与 N-GT（TT/GG）基因型相比，GT 基因型的慢性乙肝患者对 IFN-α 具有更高的应答率[= 3.12，95%（1.97，4.95），< 0.00001]，差异具有统计学意义（图 5）。

2.3.3基因多态性分析 纳入的文献中有 3 篇报道了-592（rs1800872）基因多态性与慢性乙肝患者对 IFN-α 治疗应答之间的关系，对涉及到的文献进行异质性分析，结果表明各研究存在异质性（= 0.02，2= 76%），采用随机效应模型进行分析。分析结果显示，-592 AA 基因型与 N-AA 基因型（AC/CC）相比，AA 基因型的慢性乙肝患者对 IFN-α 具有更高的应答率[= 5.16，95%（1.38，19.38），= 0.01]，差异具有统计学意义（图 6）。

2.4 发表偏倚评估

以干扰素应答为结局指标，分别对rs12979860 组的 6 篇纳入文献、rs8099917 组的 7 篇纳入文献、rs12980275 组的 3 篇纳入文献、-88组的 3 篇纳入文献、-592 组的 3 篇纳入文献进行 Begg’s 检验，结果见图 7。可以看出，rs12979860 组、rs8099917 组、-88 组、-592 组无明显发表偏倚，rs12980275 组存在发表偏倚。

表 1 纳入文献基本特征

图 2 IL28B rs12979860 基因多态性与 IFN-α 治疗应答的相关性

图 3 IL28B rs8099917 基因多态性与 IFN-α 治疗应答的相关性

图 4 IL28B rs12980275 基因多态性与 IFN-α 治疗应答的相关性

图 5 MxA rs2071430 基因多态性与 IFN-α 治疗应答的相关性

图 6 IL10 rs1800872 基因多态性与 IFN-α 治疗应答的相关性

3 讨论

3.1 文献质量评价和证据强度

本文共纳入 15 篇文献进行研究分析，均为国内外已经发表的文献。其中rs12979860 位点和 rs8099917 位点的研究文献较多，病例数也较为充足；而 rs12980275、-88、-592 位点的纳入文献较少，缺乏高质量的随机临床试验，可能存在偏倚。纳入的文献均使用科学有效的方法进行基因型检测，但临床样本的纳入是否具有随机性尚不清楚，对于干扰素应答的定义也各不相同，可能存在实施偏差。

3.2 异质性分析

本分析中纳入的文献对于临床患者的选择标准不同，所使用的 IFN-α 类型不同，治疗应答指标的判定不同，这三者会造成一定的临床异质性。如根据这三者进行亚组分析，可减少本研究的异质性，增加可信度。本研究缺乏高质量的随机对照试验，纳入的文献在样本数量上存在差异，各实验室的操作和实验条件也各不相同，也会导致异质性的产生。由于 IFN-α 类型差异很大，纳入文献的样本数量不足以进行亚组分析，因此存在明显的异质性。若有更多文献能够支持以 IFN-α 类型为分组进行的亚组分析，能明显减少异质性，增加本研究的可靠性。

3.3 Meta 分析结果讨论

基于上述分析，Begg’s 检验显示rs12980275 组存在发表偏倚，说明rs12980275 组的 meta 分析结论缺乏可靠性和可信度；rs12979860 组、rs8099917 组、rs12980275 组的 meta分析结果值均> 0.05，表明合并的结果不具有统计学意义。-88 组和-592 组值均≤ 0.05，具有统计学意义。的 3 篇纳入文献都认为-88 位点 GT 基因型为 IFN-α 治疗的优势基因型，-592 位点的 3 篇纳入文献也表明该位点的 AA 基因型与 IFN-α 治疗有更高应答率有关。

对的纳入文献特征进行分析，发现其研究对象、技术方法、使用干扰素类型和应答终点都存在不同之处，这可能就是导致纳入文献研究结论存在差异、最终导致结果无统计学意义的因素。从研究对象来说，文献[3]、[4]、[7]、[8]、[9]、[10]、[11]都选择 HBeAg 阳性 CHB 患者为研究对象，而文献[5]、[6]选择 HBeAg 阴性 CHB 患者进行研究；从技术方法来说，检测 SNP 的技术种类较多；从干扰素类型来说，这 9 篇纳入文献使用了 IFN-α 或 PEG-IFN-α(2a/2b)，也可能影响应答情况；从应答终点来说，文献[3]、[4]、[7]、[8]、[9]、[10]、[11]都把 HBeAg 血清学转换作为应答终点，而文献[5]、[6]将 HBsAg 血清学下降或清除作为应答终点，因此研究质量和参考价值相对较高。终点不同也是影响各文献实验结论差异的重要因素之一。

从基因功能看，基因编码与I型干扰素和 IL-10 家族相关的细胞因子，与和紧密相连，在染色体 19q13 区构成细胞因子基因簇。在乙型肝炎和丙型肝炎中均有重要作用，其中基因多态性与丙型肝炎干扰素治疗应答的关系已经被普遍认可，反观与乙型肝炎干扰素治疗应答的关系则尚未取得共识，其原因可能与 IFN-λ3 和 IFN-α 表达和信号传导通路、HBV 和 HCV 的病原学特征和感染机制不同有关。诱导I型干扰素（干扰素 α/β）基因表达主要有 3 条通路：维甲酸诱导基因 I（retinoic acid-inducible gene I，RIG-I）通路，由 RNA 病毒感染而诱导激活；β 干扰素 TIR 结构域衔接蛋白（TRIF）通路，通过 Toll 样受体（TLR）3和 TLR4 招募接头蛋白 TRIF 激活；IRF7 通路，由 TLR7/8 和 TLR9 通路激活转录因子 IRF7[18]。基因的启动子主要被 IRF7 信号通路所激活，与对应受体结合后下游信号通路与 I 型 IFN 相同。HCV 基因组为单股正链 RNA，可直接诱导激活 RIG-I 通路；HBV 属嗜肝 DNA 病毒科，为部分双链环状 DNA[19]。HCV 基因组含有直接抗病毒药物（direct-acting anfiviral agent，DAA）的主要靶位，而 HBV 没有该特征；从抵抗力比较来说，HBV 的抵抗力较 HCV 强；HCV 病毒复制过程主要是在肝细胞胞质中进行的，抗病毒蛋白 MxA、ADAR、EIF2AK2、OAS1 可以在胞质中对 HCV 病毒复制起抑制作用；而 HBV 基因组会进入细胞核，由部分双链环状 DNA 修复成为共价闭合环状 DNA（cccDNA），再以 cccDNA 为模板进行病毒复制和转录，其中起到关键作用的 cccDNA 半衰期较长，难以彻底清除。

不同于的是，从纳入文献特征看，和的纳入文献在研究对象、技术方法、使用干扰素类型和应答终点这四个方面都类似，得到的结果也一致，经分析证实具有统计学意义。从基因功能看，编码 MxA，该 GTP代谢蛋白由I型和II型干扰素诱导，参与细胞内抗病毒应答，拮抗多种 RNA 和 DNA 病毒的复制过程。MxA 具有广谱的抗病毒作用，参与多种抗病毒应答，在 HBV、HCV、水疱性口炎病毒（VSV）等病毒感染中都起重要作用。IL10 是由编码的具有抗炎作用的蛋白，它通过抑制 Th1 细胞增殖和 IL-2、IFN-γ、白三烯等细胞因子的产生，抑制 Th1 型免疫应答，作为与 IL-3 和 IL-4 的协同因子刺激未成熟肥大细胞增殖，是 B 细胞有效的增殖和分化因子[20]。IL10 具有很强的抗炎作用，除了适用于乙型肝炎之外，还可用于治疗多种与 Th1 细胞因子有关的免疫性疾病，如炎症性肠炎、类风湿关节炎、器官移植和银屑病等；IL10 还被用于 T 细胞介导的自身免疫病的治疗，如I型糖尿病和多发性硬化症[20]。

综上所述，疾病易感性以及药物治疗效果的差异可由基因多态性预测，、、不仅与乙型肝炎的治疗密切相关，与其他免疫性疾病和病毒感染的发生、发展和治疗也紧密相关，未来还需要更多高质量的研究数据支持更准确的结论。总之，研究免疫因子基因多态性与相关疾病的治疗效果具有重要意义。

志谢 感谢北京佑安医院肝病综合科陈新月主任、武亚丽医生协助文献质量分析。

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童梅，Email：tongmei@triprime.com；姚文兵，Email：wbyao@cpu.edu.cn

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