牡丹多糖提取液对黑色素的消除作用

李孟帆 李丹阳 杜晓辉 赵奇 刘瑞霞

摘 要：本文通过选取优质无虫害的牡丹叶片，并提取不同时期叶片多糖提取液进行比较，利用多糖溶液对酪氨酸酶活性的影响，通过对酪氨酸酶的抑制率来评价对黑色素的消除作用。研究表明，牡丹多糖溶液对黑色素具有抑制作用，并且随着多糖溶液浓度的减少，其抑制率有所降低。

关键词：牡丹多糖；黑色素；酪氨酸酶

中图分类号：TQ658 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2018）22-0175-02

多糖是一种对维持人体生命活动正常运转有重要作用的生物大分子，是构成生命的四大基本物质之一，具有调节人体免疫力、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、降血糖、抗辐射等作用，还可在石油和化妆品工业中作为凝聚剂、润滑剂、保湿剂使用，同时也可在食品工业中作为果蔬涂膜剂和食品包装应用。目前，已有相关研究证明牡丹叶片多糖提取液可以有效消除羟自由基（-OH），且具有明显的量效关系[1，2]。而我们想要探究多糖可以有效消除羟自由基的作用是否能够有效减轻人们面部色斑？在社会压力以及环境因素的影响下，许多爱美的年轻女性越来越注意自己面部色斑问题。而色素的沉淀是人体皮肤呈现不同色斑的主要因素，但是色素沉淀及色斑产生的原因比较复杂，比如遗传因素，内分泌失调，环境污染，紫外线的照射等，不管是哪一种因素，归根结底是由黑色素沉淀造成的，抑制黑色素的形成，或者提高皮肤的抗氧化能力成为我们研究的主要目标。在化学合成工艺不断进步的时期，化妆品主要是含化学合成成分制品，但是接踵而来的是化学制品的毒性、过敏性、刺激性等问题。于是人们开始追求天然、无毒产品，这时候植物化妆品受到重视[3]。

牡丹叶片或者被堆积废弃从而造成环境污染，或者被产地农民用做低值薪柴使用，我们通过提取牡丹叶片多糖，对其进行研究，增加了牡丹叶片的利用价值。

1 材料与方法

1.1 试验原理

检测药物抑制黑色素产生效果有代表性的试管内测定方法主要分两大类：酪氨酸酶试验法和用恶性黑素瘤细胞试验法，通常采用第一种方法[4]。因此，通过测定丹叶片多糖对酪氨酸酶的抑制作用来评价牡丹叶片多糖对黑色素的抑制能力[5，6]。

1.2 试验材料

牡丹叶片采收于郑州师范学院实习实训基地。

1.3 试验方法

1.3.1 牡丹叶片多糖的提取

将牡丹叶片利用电恒温鼓风干燥箱进行干燥处理，研磨制成粉末备用。取粉末10g，加入80%乙醇100ml，80℃恒温水浴浸提30min，而后4000r/min离心20min收集上清液，将沉淀再次浸提，最后将两次上清液混合。将10%三氯乙酸与上清液按1：12比例混匀，在室温下静置30min，再次在4000r/min条件下离心10min，弃掉蛋白质沉淀，把上清液加入一定量无水乙醇，使上清液含醇量达到80%，最后将上清液浓缩到10ml，即得到牡丹叶片多糖溶液。

1.3.2 多糖浓度测定

采用苯酚硫酸法[7]制备葡萄糖标准曲线来测定牡丹叶片多糖浓度。

1.3.3 酪氨酸酶活性测定

用蒸馏水将多糖溶液分别稀释成原液濃度的10倍，20倍，30倍，40倍，50倍，并且以多糖浓度为0mg/ml时作为对照组。选取马铃薯代替酪氨酸酶，直接取马铃薯加入各反应液中，将待测液设为A组，对照组设为B组，按表1所示依次加入。

按照上述表加入后，将其在室温下静置10min，迅速转移至比色皿中，并在475nm处测OD值。

2 结果与分析

2.1 葡萄糖标准曲线和多糖浓度

通常利用葡萄糖标准曲线来测定待测液的浓度，根据上述方法测出葡萄糖标准液浓度得出葡萄糖标准曲线见图1。

测出多糖溶液OD值分别为：4.482，4.832，4.768得出平均值为4.694。将其代入标准曲线得出多糖浓度为7.593mg/ml。

2.2 不同浓度多糖溶液

将上述配成的不同稀释倍数的多糖溶液得出的OD值如图2所示。

可以看出随着多糖溶液浓度减少，OD值也在减少，这可以看出随着多糖溶液浓度与对酪氨酸酶抑制率成正相关关系。

2.3 抑制率

通过利用多糖溶液对酪氨酸酶的抑制作用来测出对黑色素的抑制作用，利用如下公式计算抑制率[8]：

抑制率I=（B-A/B）*100%

得出抑制率结果如图3。由图可以看出随着多糖浓度的增加，其与酪氨酸酶的抑制率呈正相关关系。

3 总结与展望

该试验通过提取牡丹叶片多糖，并检测牡丹叶片多糖溶液对酪氨酸酶的抑制作用，发现随着牡丹多糖溶液浓度增加，其抑制作用也随之增加。我们认为以下几点需要注意：第一，选取优质无虫害的牡丹叶片，并选取不同时期叶片多糖提取液进行比较。第二，选择合适的提取防范，增加多糖提取液的纯度。第三，要注意与化妆品之间成分相容的问题。相信随着研究的不断深入，牡丹叶片多糖提取液在化妆品中会得到广泛使用。该试验在前人研究的基础上进行一些扩展，将牡丹叶片和化妆品联系起来是一种新的突破，但是该试验并未在人皮肤上试验，只是证明了其对黑色素形成会有抑制作用，将其应用在以后的化妆品中还需进一步研究。

参考文献

[1]李晓燕，刘志洪，蔡汝秀.黑色素对羟基自由基清除活性的研究[J].四川大学学报（自然科学版），2003，（06）：1132-1136.

[2]李攀.天然活性化妆品发展概况[A].中国香料香精化妆品工业协会.2004年中国化妆品学术研讨会论文集[C].中国香料香精化妆品工业协会：，2004：5.

[3]朱月，钟尉，赵雪梅，毕晓丹.紫斑牡丹叶片多糖对羟自由基清除能力的比较[J].江苏农业科学，2016，44（11）：341-342.

[4]毛培坤.化妆品功能性评价和分析方法.北京：中国轻工业出版社，1998，355-360.

[5]杨柳依，曹煜，魏羽佳，雷大卫.14种中药提取成分对酪氨酸酶活性的抑制作用[J].中华皮肤科杂志，2003，（04）：32-34.

[6]沈放，王德斌.当归多糖对酪氨酸酶活性的影响[J].昆明师范高等专科学校学报，2005，（04）：61-62+67.

[7]朱月，毕晓丹，赵雪梅.“洛阳红”牡丹叶片多糖提取条件的研究[J].北方园艺，2011，（04）：149-151.

[8]李艳莉，钟理，梁丽红.6种中药抑制酪氨酸酶活性的实验研究[J].时珍国医国药，2002，（03）：129-131.