貂狐貉犬瘟热疫苗研究进展

张爽，尹茉莉 ，冷雪，李福军

（1.吉林市园林管理中心，吉林 吉林 132000；2.吉林医药学院，吉林 吉林 132000；3.吉林农业大学，吉林 吉林 130000）

犬瘟热（Canine distemper，CD）是一种急性、热性的病毒性传染病。可感染水貂、狐、貉等多种动物，是我国毛皮动物的一种重要的传染病[1]。在全世界大部分国家和地区均有犬、狐、貉、水貂和多种野生动物暴发犬瘟热的报道。死亡率很高，平均为23.2%，每年不断暴发流行，发病率约10%，给毛皮动物养殖业造成了巨大的经济损失[2]。目前，预防犬瘟热最有效的方法是免疫接种犬瘟热疫苗。在毛皮动物养殖业，传统疫苗的使用一直是该病的主要防控手段，但是随着科学技术的发展，各类新型疫苗已被深入研究，并取得较大进展。

1 灭活疫苗

Puntoni首次使用福尔马林灭活感染CDV的犬脑组织，制备了组织灭活苗，该疫苗无法有效地控制犬瘟热。夏咸柱等用静水压高压方法灭活CDV后，以蜂胶为佐剂制备的犬瘟热灭活疫苗，该疫苗对犬的保护率达89%。国外对于水貂、狐、貉犬瘟热的防治曾使用脏器灭活疫苗，由于犬瘟热灭活苗免疫原性差、产生抗体水平较低、保护期短等缺点，现已很少使用。

2 弱毒活疫苗

国外研制多种疫苗用于犬瘟热的防治，在弱毒活疫苗研究方面曾使用鸡胚成纤维细胞制备弱毒疫苗，目前主要使用Vero细胞传代制备犬瘟热弱毒疫苗。在我国从60～80年代学者主要从国外引进的弱毒疫苗中分离毒种，接种鸡胚成纤维细胞制备水貂犬瘟热弱毒疫苗,如钱国成等从国外水貂犬瘟热弱毒疫苗中分离出左FDV3毒种，接种鸡胚致病变，成功研制了水貂犬瘟热弱毒鸡胚细胞疫苗，经过实验证明，能控制犬瘟热流行。目前，国内也使用Vero细胞增殖犬瘟热病毒制成犬瘟热弱毒活疫苗，目前国内使用最广泛的犬瘟热弱毒疫苗主要有吉林特研生物技术有限责任公司生产的水貂犬瘟热活疫苗（湿苗、冻干苗）、齐鲁动物保健品公司生产的犬瘟热冻干活疫苗，能有效的防治、控制毛皮动物犬瘟热的发生。由于水貂犬瘟热活疫苗存在毒种变异、散毒、不利于保存等问题，研制一种安全有效的疫苗防控毛皮动物犬瘟热发生具有重要意义。

3 重组活载体疫苗

活载体疫苗是应用基因工程技术将能够刺激机体产生强烈免疫应答的相关抗原基因通过某些非致病性病毒或细菌进行表达，然后利用分子生物学的方法将一种抗原基因整合入另一种病原的非编码区内构成的重组活载体疫苗。在研究犬瘟热重组活载体疫苗时国内外学者使用痘病毒和腺病毒为载体的较多。

4 基因疫苗

基因疫苗是指将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。

张绍兴为了研制新一代安全、高效的基因工程疫苗,将构建的真核表达质粒pIRES H、pIRES F、pIRES N1和pIRES N2为基因疫苗,进行了小鼠和貉子的动物免疫试验,对免疫鼠和貉子体内免疫应答水平进行了ELISA检测,并对貉子进行了攻毒保护实验。结果显示所构建的基因疫苗可以诱导小鼠和貉子产生特异性免疫应答反应，基因疫苗免疫貉子后的保护率为33%～77%，对犬瘟热基因免疫进行了初步研究，为进一步研究奠定了基础。罗彬构建带有 CDV-H 、N及2者联合表达的pVAX真核重组质pVAX-CDV-H、pVAX-CDV-N、pVAX-CDV-H-N，为探索犬瘟热病毒DNA疫苗免疫效果，免疫Balb/c小鼠，设立注射剂量梯度，使用间接ELISA试验检测小鼠血清中抗体水平。确定了试验中最佳免疫剂量为10μg～30μg，联合表达载体效果优于单独表达。苏凤艳等应用已构建的水貂源犬瘟热病毒F基因真核表达质粒pcDNA3.1-CDVF肌注免疫日本大耳白兔，在兔体内初步探讨其免疫应答，为研究在自然宿主水貂体内免疫试验打下基础。实验结果显示该重组表达质粒在家兔体内产生了针对CDV的特异性抗体，该基因疫苗的免疫效果不及弱毒疫苗，但可刺激机体产生细胞免疫且安全性较好。

随着我们特种毛皮动物饲养规模的加大，而特种毛皮动物饲养管理水平较落后，使我国毛皮动物犬瘟热常呈流行性爆发，严重威胁毛皮动物的生命安全。目前，对于犬瘟热疫病防控主要使用的犬瘟热弱毒活疫苗，该疫苗免疫效果好并且遗传稳定，但是存在弱毒疫苗可能会发生毒力反祖现象或者与野生毒株发生基因重组的现象，同时弱毒疫苗稳定性较差，要求有较高的保存和运输条件。基于分子生物学研究的不断深入，使我国犬瘟热基因工程疫苗的研究取得了长足的进展，为寻求更安全、更有效的新型犬瘟热疫苗奠定基础，对于我国毛皮动物犬瘟热疫情的防控具有重要意义。

[1]王珺玮.貂、狐、貉源犬瘟热病毒分离鉴定与分子生物学特性研究[D].南京:南京农业大学,2008.

[2]罗国良,赵建军,张海玲,等.2006-2007年我国水貂、狐和貉主要疾病发生和流行情况调查与分析[J].特产研究,2008,30（4）：71-74.