牛支原体肺炎的研究概况

袁晓娟,樊章梅

（1.黔东南州动物预防控制中心 556000；2.黔东南州饲草饲料站 556000）

牛支原体是牛支原体肺炎的病原，我国在2008年首次在患肺炎的犊牛肺脏中分离到该病原，之后又相继在中国各个省、自治区引进犊牛中分离出该病原。本文就对牛支原体研究现状进行综述，为牛支原体病的相关研究及防治提供参考依据。

1 病原学特征

支原体是最小的微生物，繁殖方式主要为二分裂繁殖，无细胞壁，具有高度多形性。细胞膜中胆固醇的作用是为了保持细胞膜的完整性，两性霉素B、皂素等能作用于胆固醇，引起支原体死亡。一般说来，决定肺炎支原体是否致病的是一种特殊的末端结构，鼻腔和乳腺是牛支原体常在的部位。

该病原在pH7.6～8.0生长，需要在培养基中加入10%～20%的马血清以满足胆固醇，并稳定细胞膜。支原体在液体培养基中生长繁殖的生长曲线，也会经过4个时期，与细菌的区别是其繁殖速度较细菌慢，生长的量也较少，且液体培养基不浑浊。大多数兼性厌氧，在含琼脂较少的固体培养基上要孵育48～72h后，出现典型的“荷包蛋样”菌落。牛支原体在避免阳光直射条件下可存活数周，在牛乳、海绵、水、粪、棉、秸杆、木和不锈钢等均能存活。

2 流行病学

牛支原体自然感染的潜伏期比较难确定。有的牛在接触感染牛2周后发病。特别是1周龄的犊牛最易感染支原体肺炎，而且病情急剧，症状明显，发病急，病情重，死亡率较高。感染牛支原体肺炎的牛有可能成为一个潜在的传染源，因为它在康复后的几个月或几年仍可携带病原体。该病的传播方式包括呼吸道传播、接触感染、垂直传播等，公牛配种或人工授精（使用其冻精）都会导致牛支原体的感染[1]。由于牛支原体引起的奶牛支原体肺炎所导致的经济损失非常巨大，而目前我国尚无较详细的奶牛牛支原体病流行病学资料。2008～2016年，张建华等[2]对国内12个地区30个规模化奶牛场进行了牛支原体感染情况调查及分析得出，国内大部分奶牛场存在牛支原体感染，牛支原体感染可能成为危害国内规模化奶牛场奶牛健康的主要疫病之一。牛支原体肺炎的诱发因素多与应激因素的刺激有关，如运输刺激、饲养管理、环境改变等。目前，在我国牛支原体肺炎一般伴随着其他病原体的继发感染或混合感染，使机体抵抗力下降更为迅速。

3 诊断方法概况

目前，确诊方法主要为病原体的分离鉴定、血清学试验和基因诊断。通过PCR方法来诊断牛支原体肺炎是基因诊断最常用的方法。牛支原体和牛无乳支原体两者的同源性很高，需要使用RT-PCR、杂交探针等才可以快速灵敏地将两者区分。侯轩等[3]利用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了的方法能检测出20 pg牛支原体DNA，较PCR方法高100倍。此外，秦明明[4]利用牛支原体uvrC基因建立了一种特异性、敏感性良好的LAMP检测方法，此法只需要在61℃保温1h即可完成反应，反应完成后加入SYBR GreenⅠ显色液就能直接根据颜色变化用肉眼判断检测结果。以上两种LAMP法均适合在基层推广应用的快速检测牛支原体的检测方法。血清学反应牛支原体的高血清阳性率，并不能作为常规的诊断方法，而且血清中牛支原体的抗体滴度的高低跟牛群支原体患病率并没有直接的关系。

4 疫苗的研究

目前，除美国有商业化的疫苗可以预防牛支原体肺炎外，其他国家均未见报道。目前所使用的支原体疫苗包括灭活疫苗或弱毒苗，两者只能提供暂时或部分保护，而且在某些实验动物产生的副作用较为严重。目前已鉴定了7种（VspA-C、E-F、O、L）等牛支原体Vsp蛋白[5]，为疫苗的研究开拓了一条新的路径。已有研究者用抗血清从文库中筛选免疫原性基因，以作为新型DNA疫苗的侯选基因。通过比较牛支原体临床分离株和参考株，筛选出1株牛支原体灭活疫苗研究侯选菌株，同时为牛支原体毒力研究和疫苗效力评价提供了牛体感染模型。2012年，高航飞[6]等研究内蒙地区分离到一株牛支原体 (NM2012)，该株病原体第6代、第12代、第20代菌株具有的免疫原性，该成果可作为今后牛支原体病的基础研究和疫苗研究奠定基础。

5 小结

牛支原体肺炎对养殖户造成了极大的经济损失，已经严重阻碍到养牛业的发展。目前，国内外学者对于该病的研究还存在许多空白，所以现阶段只能在饲养管理、减少应激因素、严格控制传染源等方面下功夫。另外，国家政府和相关部门应投入更多的人力、物力、财力等对该病进行深入研究，研发有效的诊断试剂及高效疫苗，积极控制牛支原体肺炎，保障畜牧业的健康发展。