动物炭疽的诊断方法

于友水

（哈尔滨市阿城区畜牧站，黑龙江 哈尔滨 150300）

本病发病急，病程短，临床诊断困难。调查该地区有关炭疽发生及尸体处理情况，有助于本病的诊断，但真正确诊必须依靠细菌学和血清学诊断。

病死畜若有炭疽可疑，切不可剖检。可剪耳尖一小块，然后局部做适当处理（如烧烙），或用消毒棉棒蘸天然孔流出的血液少许，置灭菌试管中送检。

1 镜检

镜检诊断炭疽有重要价值，但必须采取发病期及刚刚死亡动物的血液或其他材料制成涂片，用多色性美蓝、瑞氏染液或姬姆萨染液染色。如见有单个、成对或3～5个短链状大杆菌，菌端钝圆，连接端呈刀切或竹节状的菌体，外有明显的荚膜，结合临床表现，即可确诊。

2 培养检查

本菌在普通琼脂平板培养基上可以形成表面粗糙、边缘呈卷发状的典型菌落，钓此菌落菌于肉汤培养基中，培养24h，肉汤应澄清，管底有絮状沉淀，轻摇如丝状升起，本菌无运动性，这些均为本菌的生长特点。

3 动物试验

因动物试验检查本菌的致病力也是确定炭疽杆菌的重要方法。病料5～10倍灭菌生理水乳剂或肉汤培养物，对小白鼠接种0.1～0.2mL，豚鼠0.2～0.3mL，皮下注射。接种后置铁丝笼或鼠罐中，严格管理。动物一般在18～72h死于败血病。死亡动物在严格消毒措施下进行剖检，取心血、肝、牌涂片、压片或抹片镜检，可见满布有荚膜的短链状的炭疽杆菌，如果进行分离培养，仍可见到前述典型的炭疽菌落。实验动物的尸体应即焚毁，所用的一切用具、器械等应绝对严格地进行消毒灭菌处理。

4 血清学检验

4.1 炭疽环状沉淀反应

又称阿司口里氏反应。当病料腐败不能分离出炭疽杆菌或尸体严重污染不能做细菌检查时，此反应仍很敏感。这是由于死于炭疽的动物组织中含有炭疽杆菌菌体成分，而炭疽菌的菌体抗原对热和腐败有强大的抵抗力。

本反应是将含有抗原的全透明的浸出液，重叠于炭疽沉定素血清（抗体）上，在两液接触面发生白色沉淀环，故称炭疽环状沉淀反应。

4.1.1 抗原（沉淀原）的制备：

（1）动物脏器抗原：将可疑检样数克，剪碎、捣碎或研碎，加5～10倍生理盐水浸渍，再置沸水中煮沸30min，用滤纸或中性石棉过滤，透明的滤液即为沉淀原。

（2）皮张抗原：取硬币大小的皮肤小块（可若干份放在一起），121℃高压灭菌30min。然后剪碎、称重，加5～10倍量的0.3%石炭酸生理盐水，室温浸泡18～24h，用滤纸或中性石棉过滤，透明液体即为沉淀原。

4.1.2 反应操作：取炭疽沉淀反应小管1支，用毛细吸管吸取生物制品厂生产的炭疽沉淀血清0.3～0.5mL（视管大小面定，装入管1/3～1/2）。然后用另一支毛细吸管吸取等量自己制备的沉淀原，置于炭疽沉淀素血清之上。要沿管壁慢慢流入，避免打破接触面。

同时应设3支对照管。即：

（1）阳性对照：标准炭疽沉淀原+炭疽沉淀素血清；

（2）阴性对照：标准炭疽沉淀原+健康动物正常血清（检测沉淀原是否标准）；

（3）阴性对照：生理盐水+炭沉淀素血清（检测炭疽沉淀素血清是否标准）。

4.1.3 结果判定 脏器抗原放置37℃温箱，1～2min观察结果，皮张抗原10～15min观察结果。两液接触面出现一清晰白色环者为阳性反应；在两液接触面出现模糊不清的疑似白色环者为可疑，应重做；在两液接触面无白色环者为阴性反应。

4.2 荧光抗体检查法

炭疽荚膜荧光抗体检查法是一种特异性强、检出率高、简便快速的方法。将病料均匀涂于载玻片上，干燥、火焰固定后，滴加用异硫氰酸荧光素标记的抗炭疽血清荧光抗体，置湿盒内作用30min后倾去载片上的荧光抗体，载片浸于缓冲盐水内3min，再移入另一缓冲盐水内3min，取出干燥，滴加缓冲甘油并覆以盖片，用荧光显微镜检查。阳性者，见有炭疽荚膜杆菌，菌体明显膨大，菌体周围呈明显的黄绿色荧光，亮度强，容易辨认。

4.3 串珠试验

炭疽杆菌不产生青霉素酶，对青霉素高度敏感，接触青霉素时发生形态变异。在0.5IU/mL青霉素培养基中，菌体膨胀呈圆形，呈明显的串球状，而炭疽类似菌则不呈串珠反应，这一点在炭疽菌与其类似菌鉴别上极为重要。

（1）液体培养法：取新鲜可疑培养物接种于1.8mL肉汤中，同时按5U/mL加入青霉素0.2mL，使青霉素的最终浓度为0.5IU/mL。另取2mL肉汤只加培养物不加青霉素做对照。37℃水浴或温箱1～1.5h，取出加20%福尔马林0.25mL，固定10min后做涂片检查，炭疽杆菌一般在1～1.5h出现明显串珠状，其他细菌则不呈串珠状。

（2）固体培养法：取普通琼脂加热融化，按0.5IU/mL加入青霉素，充分摇匀，倒入平皿，其厚度为1mm左右，凝后，用灭菌刀切成盖片大小的方块，平放在洁净的载片上，取1铂耳培养4～12h的可疑菌液接种在琼脂片上，把载片放在平皿中，皿中放一小块湿棉球，盖上皿盖，37℃培养2～4h，加盖片，用低倍和高倍显微镜检查，同时用不加青霉素的琼脂片作为对照。镜检时可见大而圆相连成串珠状者为阳性。