蒙药黄连—4汤对心肌缺血再灌注损伤SD大鼠cTn—I、CK、LDH的保护作用

金哈布日+李平+张青山+布仁巴图

【摘要】目的 探讨蒙药黄连-4汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤中cTn-I、CK、LDH的影响。方法 取健康雄性SD大鼠共60只，分为六组：假手术组、心肌缺血再灌注损伤模型组、蒙药黄连-4汤低剂量组、蒙药黄连-4汤中剂量组、蒙药黄连-4汤高剂量组、丹参组，治疗组连续灌胃给药15天后，采用结扎大鼠左冠状动脉下降支的方法制备心肌缺血再灌注损伤的模型，心肌缺血30 min，再灌注90 min。假手术组大鼠只穿线不结扎左冠状动脉下降支。心肌缺血再灌注末立即行腹主动脉取血。通过酶联免疫吸附法（ELISA）法检测血清中磷酸肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌钙蛋白（cTn-I）水平。结果 蒙药黄连-4汤组血清CK、LDH、cTn-I水平显著性降低。结论 蒙药黄连-4味汤对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。其作用机制与心肌酶CK、LDH、cTn-I含量有关。

【关键词】蒙药黄连-4汤；心肌缺血再灌注损伤；CK；LDH；cTn-I

【中图分类号】R542.2 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2017.33..03

当前，随着社会不断发展，物质水平的高速提高，不健康的饮食习惯、大量的吸烟和饮酒、长期缺乏运动以及精神上的压力使我国心血管疾病的发病率不断攀升[1]。研究发现，心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injuty ，MIRI）是一种心肌缺血后加重原有的损伤，引起心肌细胞的结构及功能发生不可逆性改变，进而加重原有的心血管病，最终导致患者病情恶化甚至死亡的疾病[2]。蒙药黄连-4汤是蒙医传统方剂之一，是由黄连、栀子、瞿麦、多叶棘豆组成，具有清热解毒、防止燥浊热、调理赫依齐素相搏之功效。君药黄连的性质为苦、寒、无毒，具有清热燥湿，泻火解毒、调理体素、泻火除烦、改善心脏赫依、齐素循环，调节免疫功能、改善心血管功能、降血压、抗血小板等功效，在这一基础上加以辨证施治。本实验通过研究蒙药黄连-4汤对大鼠心肌再灌注损伤后心肌酶及肌钙蛋白I的变化，进一步探讨蒙药黄连-4汤的应用对心肌再灌注损伤大鼠心脏的保护作用机制。报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

试验动物：选用清洁级雄性SD大鼠60只，体重约（280±20）g，大鼠饲养于适宜温度和湿度的动物室中，相同饲养环境且自由饮食，自然昼夜（术前12 h禁食水）。（由辽宁长生生物技术有限公司提供，许可证号码为：SCXK（辽）2015-0001）。

主要试剂及使用药品：蒙药黄连-4汤（由内蒙古民族大学附属医院制剂室生产制剂）；丹参片（南京厚生药业有限公司生产）；磷酸肌酸激酶（CK）试剂盒（SOOOO-96T）；乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒（SOOOO-96T）；肌钙蛋白（cTn-I）试剂盒（SOOOO-96T）；水合氯醛（天津市天力化学试剂有限公司）。

主要仪器：电热恒温培养箱（BDR-82，上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；心电图机（成都泰盟软件有限公司）；HX-300S动物呼吸机（成都泰盟软件有限公司）；BL-420S生物技能实验系统（成都泰盟软件有限公司）。全自动多功能酶标仪（MULTISKANMK3，wELLWASH4MKZ芬兰）；低速自动平衡离心机（北京时代北利离心机有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 实验动物分组及给药方法

60只正常成年雄性SD大鼠适应性喂养1周，正常饮食，体重约（280±20）g，每组10只随机分成6组：假手术组、模型组、黄连-4汤底剂量组、黄连-4汤中剂量组、黄连-4汤高剂量组、丹参组。假手术组和模型组灌胃等容积生理盐水，黄连-4汤成人（60KG）剂量为3 g/kg·d，低、中、高剂量组分别于成人的6、12、18倍（0.04 g/kg·d、0.08g/kg·d、0.16 g/kg·d），阳性对照组给予丹参0.04 g/kg·d，各组灌胃每天1次，灌胃15天。

1.2.2 心肌缺血再灌注损伤模型建立

按文献[3]方法加以改进后进行造模。术前15分钟大鼠用10%水合氯醛（300mg·kg-1）腹腔注射麻醉，大鼠麻醉成功后仰卧位固定，大鼠头部上仰，在气管处剪毛后切开颈部暴露，剥离甲状腺切开气管，置气管套管连接小动物呼吸机，正压通气（呼吸频率70～80次/min，呼吸比3：2，潮气量0.002～0.003 L），大鼠四肢皮下插入电极，连接BL-420S生物技能实验系统，持续记录Ⅱ导联的心电图。大鼠胸部剪毛后在胸骨左缘横向切开皮肤，沿着第3、4肋间逐层打开胸腔，暴露心脏，用6-0无损伤真丝线于左心耳下约2～3 mm处，穿过心脏表层结扎左冠状动脉前降支（深度约1.5 mm），致心肌缺血30 min拆线后再灌注90 min。假手术组只穿线不予结扎处理。心肌缺血时肉眼可看到局部心脏肌肉组织苍白或发绀，以Ⅱ导联心电图ST段太高或者T波异常，心肌再灌注损伤时缺血区心肌组织转红，太高的ST段降低50%以上可判断为心肌缺血模型

成功。

1.2.3 生化指标检测

各組大鼠均再灌注90 min后，腹主动脉取血（约

3 mL），离心15 min（3000 r·min-1，4℃），取上清放入-80℃冰箱冻存备用，测定血清LDH、CK、cTn-I等生化指标，具体操作严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件对本次数据进行分析处理，计数资料以例（n），百分数（%）表示，采用x2检验，计量资料以“x±s”表示，采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 蒙药黄连-4汤对大鼠MIRI血清LDH水平的影响endprint

与假手术组相比较：模型组血清LDH的水平显著性升高（P<0.05）；与模型组相比较：黄连-4汤各剂量组均使血清LDH水平降低，以黄连-4汤高剂量组最为显著（P<0.05）；与丹参组相比较：黄连-4汤高剂量组血清LDH产生显著性差异（P<0.05）。见表1。

2.2 蒙药黄连-4汤对大鼠MIRI血清CK水平的影响

与假手术组相比较：模型组血清CK的水平显著性升高（P<0.05）；与模型组相比较：黄连-4汤各剂量组均使血清CK水平降低，以黄连-4汤高剂量组最为显著（P<0.05）；与丹参组相比较：黄连-4汤高剂量组血清CK产生显著性差异（P<0.05）。见表1。

2.3 蒙药黄连-4汤对大鼠MIRI血清肌钙蛋白cTn-I水平的影响

与假手术组相比较：模型组血清cTn-I的水平显著性升高（P<0.05）；与模型组相比较：黄连-4汤各剂量组均使血清cTn-I水平降低，以黄连-4汤高剂量组最为显著P<0.05）；与丹参组相比较：黄连-4汤高剂量组血清cTn-I产生显著性差异（P<0.05）。见表1。

3 讨 论

心脏作为机体的发动机，其自身组织结构和生理功能的完整性时时刻刻影响着机体生老病死过程中的每一分钟。因此预防和治疗冠状动脉血流再灌注后造成的损伤与心肌梗死的研究愈来愈受到广大学者们的关注。大量研究显示，MIRI会进一步加大心肌缺血及心功能障碍的程度，甚至比急性心肌梗死严重，且病死率高[4]。前期研究发现MIRI的发生机制包括再灌注性心肌酶、肌钙蛋白漏出增

多[5-6]，心肌再灌注损伤时心肌细胞膜通透性增加，从而使心肌中数量较多的CK、LDH等心肌酶大量漏入到血液当中，使血清中CK、LDH的浓度升高[7]。本次实验中大鼠血清CK指标检测结果表明，MIRI模型组的CK值比较高，与假手术组和药物组比较后具有统计学差异，有统计学意义。蒙药黄连-4汤组大鼠血清中的 CK值比模型组较低，说明蒙药黄连-4汤能有效地抑制ATP和肌酸之间的转磷酰基反应，延缓或减轻心肌细胞中肌酸激酶的漏出目前认为在心梗时测定CK的活性比做心电图更有临床价值[8-9]。LDH作为一种糖酵解酶[10]，半寿期是10-163 h，在临床上多用于回顾性诊断，本次实验中大鼠血清LDH指标检测结果表明，大鼠MIRI模型组中 LDH的活性显著升高，说明心肌细胞损伤时漏出的LDH增多，而蒙药黄连-4汤组中的LDH活性低于模型组，说明蒙药黄连-4汤有效地抑制心肌细胞内LDH的漏出，其抑制途径可能与调控心肌细胞内钙离子水平相关。现认为cTnI为心肌中具有高度特异性的小分子量蛋白，当心肌受损时能够更早并且更易漏出入血液当中，而且在血液中维持的时间也较长，因cTnI具有高度的灵敏性和特异性，所以心肌缺血再灌注后检测血液中cTnI的含量可作为心肌损伤的重要指标[6]。并且cTn-I在血清中的含量极其微少，且具有基因编码的特异性[11]，本次实验中黄连-4汤组大鼠血清中cTn-I含量低于MIRI模型组（P<0.01），说明黄连-4汤组能有效减轻心肌细胞结构的破坏及坏死程度，从而使cTn-I释放入血的量明显降低，为缺血再灌注损伤的心肌细胞功能的修复起到一定的有效作用。

众所周知，传统蒙药在治疗各不同类心血管疾病中有其独特的优势。除君药黄连之外，主要成分栀子具有泻火除烦，清热利尿，凉血散瘀作用，瞿麦有利尿通淋，破血通经作用，多叶棘豆有杀"粘"虫，清热，燥"希日乌素"，愈傷，生肌，止血，消肿，通便等作用。因此蒙药黄连-4汤能够抑制心肌缺血再灌注损伤CK、LDH、cTn-I的水平从而达到大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。而本实验研究是首次对蒙药黄连-4汤在心肌缺再灌注方面血进行了药效学研究，增加并明确了蒙药黄连-4汤在心肌缺血再灌注损伤方面的临床主治范围，在临床上增加了治疗心肌缺血再灌注损伤的用药选择。

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本文编辑：李 豆endprint