化学

杨悠悠，谢云峰，田菲菲，等

常见食品中邻苯二甲酸酯类增塑剂含量及食品包装材料中邻苯二甲酸酯类增塑剂迁移量的测定

杨悠悠，谢云峰，田菲菲，等

目的：台湾“塑化剂”风波以后，增塑剂越来越受到人们的关注，成为近年食品安全风险重点监控对象。本文通过不同食品基质中邻苯二甲酸酯类增塑剂分离分析方法的优化及不同食品包装材料中邻苯二甲酸酯类增塑剂迁移方案的考察，以期将其应用于邻苯二甲酸酯类增塑剂的日常风险监控中。方法：采用气相色谱-质谱联用仪，优化使用液液萃取及固相萃取的样品前处理方式，进行果汁饮料、白酒、牛奶等从简单到复杂食品基质中邻苯二甲酸酯类增塑剂的分离分析方法的建立，提供食品中邻苯二甲酸酯类增塑剂含量的监测评价手段。此外，将该方法应用于食品包装材料中邻苯二甲酸酯类增塑剂的迁移研究，以异辛烷为油脂食品模拟物，测定保鲜膜与保鲜袋中16种邻苯二甲酸酯类增塑剂的迁移量。结果：通过程序升温条件、柱流速、进样口温度、进样模式等一系列条件的优化，16种邻苯二甲酸酯得到了基线分离，采用选择离子监测模式（SIM），以确保分析方法有较高的检测灵敏度以及减少基质干扰。在优化的色谱条件下，采用内标法定量，以各目标化合物与内标物的峰面积比对浓度比绘制标准曲线，相关系数均大于0.999。16种邻苯二甲酸酯类增塑剂的检出限（LOD，3 S/N）范围为0.005～0.025 μg/mL；峰面积相对标准偏差（RSD）均小于2%。对于简单基质的样品如水样或果汁饮料等，仅需采用正己烷进行提取即可获得满意的回收率，16种邻苯二甲酸酯类增塑剂的回收率范围为75%～107%。含酒精样品中，提取前需除去酒精，16种邻苯二甲酸酯的回收率可获得显著提高。对于复杂基质如牛奶样品，采用乙腈提取，净化过程则采用无水MgSO4和PSA填料。对于需要日常监测的邻苯二甲酸酯DMP、DBP、DIBP及DEHP，它们的回收率范围为75%～94%，完全满足分析需求。在测定食品包装材料中塑化剂的迁移量时，采用异辛烷为食品模拟物，以模拟家用储存油脂食物时的迁移情况。检测数据表明，保鲜袋基本不存在增塑剂的迁移，而在保鲜膜产品中，塑化剂的迁移行为非常明显，对于有明确迁移限量标准的DBP和DEHP均存在超标情况。另外，作为国家重点监测对象的DIBP，其含量也较高，为8.17 mg/kg。因而，保鲜膜在使用过程中应避免接触油脂性食品。结论：本文建立了用于检测饮料、白酒及牛奶三类从简单到复杂食品基质中16种邻苯二甲酸酯的GC-MS分析方法。采用SIM模式，显著提高了检测的灵敏度与选择性；通过优化液液萃取及基质分散固相萃取样品前处理方法，获得了较高的回收率，可满足实际样品中痕量邻苯二甲酸酯类塑化剂检测要求。此外，将所建立的分析方法应用于常见食品包装材料安全性考察，发现保鲜膜存在显著的增塑剂迁移现象。该方法简便、快速、经济、可靠，适用于对食品及食品包装材料中邻苯二甲酸酯类增塑剂的常规监测。

来源出版物：色谱, 2013, 31(7): 674-678

入选年份：2015

超高效液相色谱—飞行时间质谱法高通量筛查乳制品中20种镇静剂

严丽娟，张洁，潘晨松，等

摘要：食品中兽药残留检测已从单一化合物发展为多种不同化合物的同时定性和定量分析。与低分辨的三重四级杆质谱不同，高分辨飞行时间质谱能够采集高质量分辨率和高准确度的全扫描数据，目标化合物数目没有任何限制。利用精确分子量和同位素峰形还可对异常未知峰进行准确的定性分析。镇静剂药物具有抑制躁、镇吐等作用，可能被添加到奶牛饲料中以促进采食，提高饲料转化率，并缓解奶牛热应激，提高产奶量。但是，这类药物的残留会造成过敏、心悸、肝损害等不良反应。鉴于我国食品安全的现状，有必要对更多镇静剂进行监测。本研究中，利用超高效液相色谱/高分辨飞行时间质谱，结合数据库，建立了乳制品中常见镇静剂（唑吡旦、利眠宁、氯氮平、咪达唑仑、氟西泮、氟哌啶醇、硝西泮、氟硝西泮、异丙嗪、艾司唑仑、安眠酮、诺氟西汀、奥沙西泮、阿普唑仑、利血平、三唑仑、氯丙嗪、替马西泮、甲硫达嗪、地西泮）的高通量筛查方法。样品以乙腈和酸化乙腈沉淀蛋白质和脂肪，冷冻离心浓缩，经超高效液相色谱分离，采用电喷雾离子源，正离子模式，基质匹配法进行定量分析，可在9 min内对20种镇静剂进行高通量筛查和定量分析。镇静剂的质量浓度在1～500 mg/L或5～1000 mg/L 范围内具有较好的线性关系，检出限为 0.3～1.5 mg/L，定量限为1～5 mg/L。在5和50 mg/L添加水平时，平均回收率为76.1%～108.2%，相对标准偏差为2.5%～9.0%。利用Target Analysis软件建立镇静剂数据库，并应用于加标样品的筛查分析。通过数据库比对，样品中添加的镇静剂被全部筛查出来，鉴定准确度达到了100%，保留时间偏差小于0.1 min，质量偏差小于3 mDa，同位素峰形匹配度大于89.5%。国标GB/T22993—2008中氯丙嗪和氟哌啶醇的检出限分别为0.5和0.1 mg/L，而本研究中这两种镇静剂的检出限均为0.3 mg/L，与国标相当。由于我国目前尚未对乳制品中镇静剂制定限量标准，本研究参考了日本肯定列表的一律标准。本方法中镇静剂的检出限均低于一律标准的限量值（10 mg/L）。因此，本方法完全能够满足日常检测的需要。利用本方法对购自超市的8个不同品牌的50余份乳制品进行了筛查分析，均未检出阳性样品。

来源出版物：分析化学, 2013, 41(1): 31-35

入选年份：2015

基质固相分散—超快速液相色谱法测定牛肉中磺胺类兽药

王重洋，王远鹏，王宁，等

摘要：磺胺类药物主要通过外用或作为饲料添加剂而引入动物体中。近年来，动物源食品中磺胺类药物残留量超标现象十分严重，尤其是在猪、禽、牛等动物源食品中。欧盟规定肉类食品中的磺胺类药物的MRL为单一磺胺类药物≤25 μg/kg，磺胺类药物总量≤100 μg/kg。国际食品法典委员会与我国农业部2002年12月发布的235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定动物组织中磺胺类药物的MRL为100 μg/kg。基质固相分散（matrix solid phase dispersion，MSPD）是由Barker最先提出的样品前处理技术，将样品均化、预处理、过滤、净化、提取过程一并完成，避免了样品均化、沉淀、离心、浓缩等造成的检测对象的损失，节约时间和溶剂的用量，因此被广泛应用于固体、半固体和高粘性的生物样品的制备。目前该技术的应用领域囊括了动物组织及植物样品。在其发展过程当中，由于其具备无需萃取溶剂、提取条件温和（室温和大气压）、适用范围更广等优点，而使得现场处理样品成为可能。磺胺类兽药的残留检测方法主要有高效液相色谱（HPLC），气相色谱法（GC），液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS），气相色谱-质谱联用法（GC-MS），毛细管电泳法（CE）等。GC需要进行样品衍生操作，不利于实际样品的快速分析。HPLC-MS/MS和GC-MS具有准确性好、灵敏度高等优点，但仪器价格昂贵，普及范围受到限制。CE重现性差，限制了其广泛应用。目前，由于液相色谱仪的普及，液相色谱法已经广泛应用于磺胺类兽药残留的检测。本实验采用超快速液相色谱（UFLC）对牛肉中磺胺类兽药残留进行同时测定。本研究采用基质固相分散-超快速液相色谱测定了牛肉组织中磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲基异恶唑和磺胺间二甲氧嘧啶。基质固相分散萃取的最佳条件为：硅藻土为分散剂，6 mL甲醇为洗脱剂，样品与分散剂的质量比为1︰4。方法：的检出限为4.39～7.82 ng/g，定量限为14.62～26.08 ng/g，4种磺胺化合物回收率为71.73%～113.13%，测定的相对标准偏差为1.9%～12.7%。实验建立了牛肉中4种磺胺类兽药残留的基质固相分散-超快速液相色谱测定方法。采用基质固相分散技术进行样品前处理，具有样品处理简单、快速、提取效率高、消耗溶剂少和吸附剂成本低等优点，超快速液相色谱技术也具有高通量样品分析的能力。

来源出版物：分析化学, 2013, 41(1): 83-87

入选年份：2015

尿液代谢组学方法研究人参总皂苷治疗糖尿病心肌病大鼠作用机制

谷金宁，牛俊，皮子凤，等

摘要：利用基于液质联用技术的代谢组学方法，研究人参总皂苷（TG）治疗糖尿病心肌病（DCM）大鼠尿液中代谢物的变化，结合多元统计学分析方法寻找潜在生物标记物，考察了人参总皂苷治疗糖尿病心肌病大鼠的效应机制。通过建立糖尿病心肌病大鼠模型，随机分为模型组和TG给药组，TG组口服人参总皂苷，模型组和空白对照组给予生理盐水。连续给药12周后收集24小时尿液样本，采用快速高分辨液相色谱/四级杆—飞行时间/质谱（RRLC/Q-TOF/MS）技术对空白组、DCM组和TG组大鼠尿样的尿液代谢物进行分析，采用主成分分析对两组代谢物进行分类，并寻找潜在生物标记物，同时检测心肌病理超微结构、血液生化指标和心肌氧化应激水平。TG降低了DCM大鼠心肌超微结构损伤并改善其血脂、血糖及心肌氧化应激水平，心肌电镜结果提示糖尿病心肌病模型成功建立，TG治疗组可改善糖尿病心肌超微结构损伤。TG可通过降低血糖与血脂的水平，保护心脏免受葡萄糖和脂类代谢产物引起的心肌损伤，并降低心肌氧化应激水平。RRLC/Q-TOF/MS检测结果表明，DCM组和TG组大鼠的尿液代谢物谱发生了明显变化，且两组能得到很好的区分，发现并鉴定了3种生物标记物：蛋氨酸亚砜、L-肉毒碱和精氨基琥珀酸。TG可能通过影响糖尿病心肌病大鼠柠檬酸循环、脂肪酸代谢和氧化应激水平，从而对糖尿病心肌病大鼠体内的代谢紊乱进行调节。精氨基琥珀酸经精氨基琥珀酸裂解酶作用生成延胡索酸进入柠檬酸循环，而柠檬酸循环是糖类、脂类、氨基酸的最终代谢通路，精氨基琥珀酸水平异常升高可能是精氨基琥珀酸裂解酶下调造成，表明柠檬酸循环可能因缺乏底物的参与而减弱，经TG治疗后的DCM大鼠尿液中精氨基琥珀酸水平恢复性下降，这可能是TG对于柠檬酸循环的调节机制。L-肉毒碱对于给肌肉包括心肌提供能量来说非常关键，L-肉毒碱最重要的代谢功能是转运脂肪到肌肉（包括心肌）细胞的线粒体中用于氧化，这也是心脏大部分能量的来源。TG治疗后的DCM大鼠尿液中L-肉毒碱水平升高表明人参总皂苷对于心肌代谢和能量供给的积极作用。蛋氨酸亚砜是蛋氨酸被ROS经两电子依赖机制氧化产物，被认为是体内氧化应激的一个生物标记物，经TG治疗后，DCM大鼠尿液中蛋氨酸亚砜减少，这可能是TG一种可能的抗氧化作用机制。本研究利用基于RRLC/MS的代谢组学方法研究了人参总皂苷治疗糖尿病大鼠的尿液代谢谱变化并检测了血液生化指标和心肌氧化应激水平，多元统计分析表明，疾病模型组与给药治疗组获得了较好的区分，找出并鉴定了3个生物标记物蛋氨酸亚砜、L-肉毒碱和精氨基琥珀酸，这些标记物的变化趋势反映了人参总皂苷在柠檬酸循环、脂肪酸代谢和氧化应激上的调节作用，阐明了人参总皂苷治疗糖尿病心肌病的可能的作用机制。

来源出版物：分析化学, 2013, 41(3): 371-376

入选年份：2015

定量核磁共振波谱法同时测定中药虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的含量

禹珊，郭强胜，王会琳，等

摘要：目的：虎杖作为常用中药已收入中国药典。白藜芦醇和虎杖苷是虎杖中两种主要药效成分，近年来测定这两种成分主要以HPLC和液相色谱质谱联用为主。定量核磁共振波谱法（qNMR）简单、快捷，实际样品测定时可以不使用待测组分的对照品，已先后被各国药典收录。本文通过对虎杖样品进行有效的提取和净化，用定量核磁共振波谱建立同时测定虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的方法。方法：虎杖样品以乙醇-水（4︰1，v/v）室温超声提取30 min，抽滤、旋干后再用丙酮两次超声提取净化后抽滤并旋干，精密称取并加入用基准物质邻苯二甲酸氢钾标定的2,3,5-三碘苯甲酸为内标（标定时溶剂为氘代二甲亚砜-重水（4︰1，v/v）），在塑料离心管中超声溶于氘代二甲亚砜-重水（10︰1，v/v）混合溶剂，然后转移至核磁管用定量核磁共振氢波谱法测定。定量峰为6.388～6.391（白藜芦醇：d，2H）、6.322～6.330（虎杖苷：t，1H），8.329～8.332（内标2,3,5-三碘苯甲酸：d，1H）和7.917～7.935（邻苯二甲酸氢钾：dd，2H）。核磁共振波谱（NMR）采集条件为：脉冲序列zg30，脉冲宽度14.4 μs。选择延迟时间5 s，扫描次数32次。测定样品的NMR谱图积分时，先将NMR谱图基线调平，选定峰积分区间，每个峰积分3～5次，相对标准偏差（RSD）＜1%时取平均值。用中国药典2010版中的绝对定量公式计算含量。结果：通过考察实验条件对测定结果的影响选定样品提取与净化的预处理条件，以及氘代试剂、内标、采集参数等NMR实验条件。归属了样品与内标NMR谱图中的各NMR信号峰。选定的定量峰不受附近峰的干扰，各定量峰的信噪比符合要求。对所建立NMR测定方法进行了方法评价。组分峰面积与内标峰面积比值的日内与日间精密度（RSD）均小于0.6%。以（样品/内标）质量比为横坐标（X），NMR定量峰面积比为纵坐标（Y），用标定后纯品评价的零截距标准曲线分别为白藜芦醇：Y＝4.4368X，相关系数R＝0.9994；虎杖苷：Y＝1.2885X，R＝0.9995，理论计算线性曲线的斜率对白藜芦醇为4.3797，对虎杖苷为1.2803。两者接近，可以直接用绝对定量模式测定。用线性回归曲线Y轴截距的偏差与斜率计算定量NMR方法的检测限和定量限，白藜芦醇和虎杖苷的检测限分别为0.23 g/L和0.24 g/L，定量限评价还考虑了英国药典中NMR峰信噪比大于150的要求，结果白藜芦醇为0.69 g/L，虎杖苷为1.57 g/L。样品提取后qNMR方法的回收率结果白藜芦醇为99.6%～102.3%（RSD＝1.0%，n＝6），虎杖苷为98.7%～101.1%（RSD＝0.9%，n＝6）。包括样品提取过程的回收率结果白藜芦醇为97.7%～103.5%（RSD＝2.4%，n＝6），虎杖苷为94.5%～99.2%（RSD＝1.6%，n＝6）。实际测定4种虎杖饮片、超微饮片及配方颗粒样品中白藜芦醇含量为3.57～5.69 mg/g；虎杖苷含量为12.73～24.07 mg/g。结论：建立了qNMR同时定量中药虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的方法。所建立的样品提取方法稳定有效，定量NMR方法精密度好，线性评价显示可以直接用绝对定量公式计算含量，定量准确。可用于虎杖实际样品的测定。

来源出版物：分析化学, 2015, 43(1): 69-74

入选年份：2015

固相萃取—高效液相色谱—串联质谱法同时测定养殖海水中23种抗生素

杜鹃，赵洪霞，陈景文

摘要：目的：抗生素因其可导致抗性增加和超级细菌产生而成为被广泛关注的新型环境污染物。由于环境基质的复杂性，目前没有同时分析多种抗生素的标准方法。已有方法分析的抗生素类别较少，相对耗时较长，本研究通过优化分析和前处理条件，建立了6类23种抗生素的快速分析方法，并用于对养殖海水的分析。方法：取经0.45 μm玻璃纤维滤膜过滤的水样1 L，加入50 ng氘代磺胺甲恶唑，用盐酸-水溶液（1/1，v/v）调节pH至2.5；以流速10 mL/min经过用20 mL甲醇、6 mL超纯水和6 mL pH为2.5的盐酸溶液活化的HLB柱进行富集，用10 mL超纯水淋去杂质，氮气吹扫5 min后用12 mL甲醇分两次洗脱。洗脱液在40℃水浴中氮吹至近干，定容至1 mL，并用0.22 μm滤膜过滤。采用Agilent LC1100-6410B液质系统进行测定，进样量5 μL，柱温40℃，洗脱梯度以95%A（甲酸0.1%（v/v）-1 g/L甲酸铵水溶液）-5%B（甲醇-乙腈（1/1，v/v））起始，保持3 min，30 min内线性变为88%B，流速0.3 mL/min；质谱检测采用ESI+/ESI﹣切换多反应监测模式。结果：氯霉素类在ESI模式下响应较强，而其他5类抗生素相反，因此本方法中选择正负离子同时监测，一次完成23种目标抗生素分析，减少了分析时间。比较分离效果，选择了Waters Xterra柱（100 mm×2.1 mm，3.5 μm）。本研究中甲醇做溶剂时，响应值偏低且色谱峰出现前伸现象，而采用初始流动相（5%B）时得到改善，提高了方法灵敏度。前处理中，溶液pH会影响抗生素的形态、稳定性和与萃取柱填料之间的作用，考察酸性、中性（未调节pH）和碱性条件下的萃取效果，确定上样pH为大部分抗生素回收率最高时的2.5。洗脱实验表明，以6 mL甲醇洗脱两次，可保证较高的回收率，缩短了分析时间。在处理前添加回收率指示物，并使用空白和平行样进行质量控制与质量保证。工作曲线通过测定稀释成5个梯度混合标准工作液获得，所有目标物质线性相关系数（r2）均大于0.995。方法：检出限（MDL）为0.1～2.9 ng/L（除阿莫西林为8.5 ng/L）。在3个添加水平下考察方法回收率（n＝3）分别为47.3%～122.2%、53.9%～132.6%、58.6%～125.7%，相对标准偏差分别为1.6%～18.8%、0.6%～14.5%、1.2%～13.8%，显示本方法具有较好重现性和稳定性。用所建方法对东营地区5个海水养殖水样中的抗生素进行分析，共检出6种抗生素，总质量浓度在7.4～378.9 ng/L之间。所检出抗生素基本涵盖所有目标种类，显示了实用性和有效性。结论：采用固相萃取—高效液相色谱—串联质谱法技术建立了水中6类23种抗生素同时测定的分析方法，MDL为0.1～2.9 ng/L，加标回收率为47.3%～132.6%。采用本方法对海水养殖区5个养殖池水样进行了检测，除青霉素类外各类抗生素均有检出，所建立的方法高效、灵敏、可靠，可用于海水样中多种抗生素的分析。

来源出版物：色谱, 2015, 33(4): 348-353

入选年份：2015